DNA基础知识

相关专题 引物设计 什么是引物二聚体?怎样消除引物二聚体? 引物二聚体是引物的3'端间相互错配扩增形成的。引物二聚体的出现是必然的，只是或多或少的问题，电泳时看不到引物二聚体带也不代表没有二聚体出现，只是含量低我们 的肉眼看不到而已。提高PCR严谨性(包括提高退火温度，降低引物浓度等)可大大降低二聚体的浓度。 减少PCR产物中引物二聚 ...

相关专题 引物在PCR反应中处于关键作用，引物决定着扩增的特异性和扩增的效率。而在目前DNA的化学合成技术非常成熟的情形下，引物设计是否合适是我们应更为关注的层面。现在有很多的免费的软件或网络资源(http://frodo.wi.mit.edu/primer3/)能辅助我们进行引物设计，这使我们总能找到适合我们自己应用的引物设计工具。笔者用 ...

相关专题 引物设计 测序引物设计时的注意事项： 1， 对特异性的标准掌握更严格一些，也比普通PCR引物设计时更优先考虑特异性。因为如果在测序反应中，如果引物与模板在非预期位置退火并引发链延伸，会对结果对来很大的干扰甚至造成结果无法识读。 2， Tm值适当高一些。现在大部分测序反应均选用耐热的测序级DNA聚合酶来催化，并采用PCR的热循环程序。 ...

相关专题 DNA双螺旋结构的前前后后 我们拟提出脱氧核糖核酸(DNA)盐的一种结构。这种结构的崭新特点具有重要的生物学意义。 鲍林和考瑞曾提出过一个核酸结构。他们在发表这一结构之前，欣然将手稿送给我们一阅。他们的模型包含磷酸接近纤维袖，碱基在外周的三条多核苷酸链。我们觉得这样的结构是不够满意的，其理由有二：(1)我们认为进行过X射线衍射分析 ...

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相关专题 引物设计 如何测定引物的OD值 用紫外分光光度计在260nm波长测定溶液的吸光度来定量，请注意紫外分光光度计的使用，测定时溶液的吸光度最好稀释到0.2-0.8之间(吸光度太高或太低会有较大的误差)。DNA干粉用一定体积的水充分振荡溶解以后，取部分溶液稀释到1ml并在1ml标准比色皿中测定其吸光度，即为所测体积的OD值，进而可以计算出 ...

相关专题 引物纯化方式有哪些，如何选择? ◆　C18柱脱盐：有人称其为简易反相柱，它对DNA有特异性的吸附，可以被有机溶解洗脱，但不会被水洗脱，所以能有效地去除盐分。它不能有效去除比目的片段短的小片段。实际上，它是一种脱盐的作用。这种方法一般不会对普通PCR反应产生影响。对于需要用于测序、克隆的引物不能使用这个级别。 ◆　OPC纯化： OP ...

相关专题 引物设计 1.引物的OD数如何定量? 答：引物合成引物OD数是这样测定的：用紫外分光光度计，波长260nm，石英比色杯，光程为1厘 米，测定溶液的光密度。测定时溶液的光密度最好稀释到0.2-1.0之间。DNA干粉用一定体积的水充分振荡溶解以后，用1ml水稀释测OD值。需要根据 稀释倍数换算出母液的OD值。 2.需要合成多少OD数? ...

相关专题 1868年，瑞士的内科医生Friedrich Miescher从外科医院包扎伤口的绷带上的脓细胞核中提取到一种富含磷元素的酸性化合物，将其称为核质(nuclein);后来他又从鲭鱼精子中分离出类似的物质，并指出它是由一种碱性蛋白质与一种酸性物质组成的，此酸性物质即是现在所知的核酸(nucleic acid)。 1944年Oswal ...

相关专题 质粒 细菌质粒是一类双链、闭环的DNA，大小范围从1kb至200kb以上不等。各种质粒都是存在于细胞质中、独立于细胞染色体之外的自主复制的遗传成份，通常情况下可持续稳定地处于染色体外的游离状态，但在一定条件下也会可逆地整合到寄主染色体上，随着染色体的复制而复制，并通过细胞分裂传递到后代。 质粒已成为目前最常用的基因克隆的载体分子，重 ...

相关专题 核酸包括DNA、RNA两种分子，在细胞中都是以与蛋白质结合的状态存在。真核生物的染色体DNA为双链线性分子，原核生物的“染色体”、质粒及真核细胞器DNA为双链环状分子；有些嗜菌体DNA有时为单链环状分子，RNA分子在大多数生物体内均是单链线性分子，不同类型的RNA分子可以具有不同的结构特点，如真核mRNA分子多数在3’端带有poly ...

相关专题 【基本原理】 利用DNA连接酶把目的DNA片段和载体DNA连接在一起，成为一个新的重组分子。目的DNA片段被限制酶消化后其末端只可能有3种形式： (1)带有相同的粘性末端：用同一种酶或同尾酶处理可得这样的末端。由于质粒载体也必须用同样的酶消化，亦得两个相同的粘性末端，因此在连接反应中，外源目的基因片段和质粒载体DNA均可能发生自身 ...

相关专题 1.5×CTAB CTAB 15 g 1 M Tris·Cl (pH 8.0) 75 ml 0.5 M EDTA 30 ml NaCl 61.4 g add ddH2O to 1000 ml 0.5 M EDTA (pH 8.0) EDTA-Na·2H2O 186.1 g NaOH ~20 g Adjust to pH 8.0 d ...

相关专题 一、试剂 1 、 10 × TBE ( pH 8.3 )： 2 、 46% 尿素溶液： 3 、 20% 聚丙烯酰胺溶液 4 、 10% 过硫酸胺 5 、引物 6 、模板 7 、 DNA 聚合酶 8 、放射性标记的 dNTP 和 ddNTP 贮存液 9、TEMED 二、操作方法 (一)由双链质粒制备单链DNA膜板 取质粒 DNA ( ...

相关专题 QPCR 亮点速读： ● GoTaq® qPCR Master Mix 介绍：染 料法qPCR 的明智选择 ● 使用PureYieldTM RNA 中量纯化系统 纯化体外转录的RNA ● ReliaPrepTM 血液基因组DNA 小提系 统，一种新型的基于离心柱的全血基 因组DNA 纯化方法 ● RT-qPCR 新选择：强荧光、 ...

相关专题 20世纪已经结束，回顾20世纪的科学发展史，不难看出，上半个世纪，科学发展主要在物理学，爱因斯坦的相对论将现代物理学推到了光辉的顶峰;但在下半个世纪，科学的重心显然偏向生命科学。自1953年，克里克和沃森发现DNA 双螺旋结构以来，生命科学成果迭出。截止1989年，已有22位科学家共9 次在此领域获得诺贝尔奖。1989年～1997 ...

相关专题 总有一种转染方法适合你 Clontech，曾经是华人的骄傲，其开发的产品曾多次获得R&D 100大奖。虽说几经沉浮，但如今Takara旗下的Clontech仍在基因表达领域默默耕耘，不断开发新产品。对于从事基因表达的研究人员来说，Smart Race、酵母双杂交系统、慢病毒与腺病毒载体、多色荧光蛋白载体这些产品大家都不会陌生。近几年 ...

相关专题 引物设计操作流程：序列下载——同源性比较——引物设计筛选 1.序列查找 根据所需检测的病原体或者待检特定基因，在http://www.ncbi.nlm.nih.gov/网址查询有关序列。 2、同源性比较 主要有两种方法 A、在www.NCBI.nlm.nih.gov/Blast/blast.cgi 网址进行在线的两两比较。 B、采 ...

相关专题 引物设计 Primer-Blast介绍 Primer-BLAST，在线设计用于聚合酶链反应(PCR)的特异性寡核苷酸引物。Primer-BLAST可以直接从Blast主页(http://blast.ncbi.nlm.nih.gov/)找到，或是直接用下面的链接进入： http://www.ncbi.nlm.nih.gov/tools ...

相关专题 引物设计 知道了基因名(即Symbol)，怎样在NCBI上查找该基因的序列。Symbol是基因的名称，在文献是可以经常看到的，经常会提到某个基因的基因名。我们就可以用Symbol在NCBI的Gene数据库搜索。但有一点需注意，Symbol是经常会改变的，就是说随着序列的升级，对该基因的研究更加深入，Symbol会改变。但这个基本上不 ...