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        如何确定引物的OD数

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        引物设计

        1.引物的OD数如何定量?

        答:引物合成 引物OD数是这样测定的:用紫外分光光度计 ,波长260nm,石英比色杯,光程为1厘 米,测定溶液的光密度。测定时溶液的光密度最好稀释到0.2-1.0之间。DNA干粉用一定体积的水充分振荡溶解以后,用1ml水稀释测OD值。需要根据 稀释倍数换算出母液的OD值。

        2.需要合成多少OD数?

        答:根据实验目的确定。一般PCR 扩增,2 OD引物,可以做200-500次50ul标准PCR 反应。如果是做基因拼接或退火后做连接,1 OD就足够了。但是有些研究人员,就做几次PCR,但是却要5-10 OD。做全基因构建的引物都比较长,但是我们有些研究人员也要求高OD数。片段越长, 最后全长得率就越低,出错的几率就越大。超出需要之外的OD数要求,其实也是对社会资源的一种浪费,同时也从一个侧面反映了部分研究人员,特别是新手的自 信心不足,总觉得需要重复多次才能成功。

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