DNA基础知识

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相关专题 一、探针的类型 核酸分子探针是指用放射性核素或其他标记物标记的、能与特定的靶分子发生特异性相互作用的DNA或RNA片段。1． 基因组DNA探针：病毒DNA等2． cDNA探针；最常用3． 寡核苷酸探针：10-50bp，测序、点突变4． RNA探针：稳定性高、特异性强，但RNA极易降解，不宜操作。二、探针的标记物理想的标记物：敏感度 ...

相关专题 1. 问题：RT-PCR灵敏度：在琼脂糖凝胶分析中看到少量或没有RT-PCR产物。 可能原因： 1）RNA被降解 建议解决方法： 在用来验证完整性之前先在变性胶上分析RNA使用良好的无污染技术分离RNA； 在将组织从动物体取出后立刻处理在100％甲酰胺中储存RNA； 如果使用胎盘RNase抑制剂，不要加热超过45℃或pH超过8.0 ...

相关专题 Solutions10X RT Buffer10X PCR Buffer100 mM Tris pH 9.0500 mM KCl1% Triton X-10025 mM MgCl2use at a concentration of 1.5 mMLysis Solution4M GuSCN 250 g guanidine thioc ...

相关专题 1、高质量RNA成功的cDNA合成来自高质量的RNA。高质量的RNA至少应保证全长并且不含逆转录酶的抑制剂，如EDTA或SDS。RNA的质量决定了你能够转录到cDNA上的序列信息量的最大值。一般不必使用oligo(dT)选择性分离poly(A)+RNA。不管起始模板是总RNA还是poly(A)+ RNA，都可以检测到扩增结果（图2） ...

相关专题 1)什么是Access RT-PCR？2)什么是Access RT-PCR系统？3)总RNA能否作为模板，是否一定需要poly(A)+RNA?4)使用Access RT-PCR系统需要的RNA的量是多少？5)同一般常用方法相比较，Access RT-PCR系统有哪些优点？6)使用Access RT-PCR系统需要优化哪些条件？7)T ...

相关专题 我做的是人VI 型胶原蛋白α1 链的克隆流程和实验结果如下，给做RT-PCR 的战友一点参考。首先引物设计引物设计有3 条基本原则：首先引物与模板的序列要紧密互补，其次引物与引物之间避免形成稳定的二聚体或发夹结构，再次引物不能在模板的非目的位点引发DNA 聚合反应(即错配)。具体实现这3 条基本原则需要考虑到诸多因素，如引物长度（p ...

相关专题 张驰宇1 2) 　张高红1 2) 　杨　敏1) 　贲昆龙1) 3(1) 中国科学院昆明动物研究所分子与细胞免疫学实验室昆明　650223 ;2) 中国科学院研究生院北京　100039)摘要　为建立一种新的SYBR green Ⅰ实时定量RT-PCR 方法使之能够有效消除引物二聚体(PDs)对实时定量结果的影响. 对RT-PCR ...

相关专题 Real time PCR的应用mRNA表达的研究 微小残留病变的检测 肿瘤耐药基因表达的研究 病毒感染的定量监测 Vs普通PCR，RT-PCR的优势采用封闭的检测模式，因此扩增产物导致污染的可能性比普通PCR要小得多 。扩增产物的检测在PCR扩增过程中同时进行，并且数据的采集、分析全部由仪器自动完成，因此整个检测所需的时间比普通P ...

相关专题 Ernest F. Retzel Katherine A. Staskus Janet E. Embretson and Ashley T. HaaseDepartment of Microbiology University of Minnesota Minneapolis MN 55455Copyright ?1994 The ...

相关专题 O. Henegariu N.A. HeeremaS.R. Dlouhy G.H. Vance and P.H. Vogt1 Indiana University IndianapolisIN USA and 1Heidelberg University Heidelberg GermanyABSTRACTBy simultaneo ...

相关专题 （一）、仪器设备 英国Thermo Hybaid原位PCR仪。 （二）、操作流程 1、原位PCR步骤 1）预处理： （1）切片常规脱蜡； （2）0.2mol/L HCl处理10min； （3）5μg/ml蛋白酶K消化组织37℃10min； （4）Nase消化组织37℃ 3 ...

相关专题 1. How to Reduce Primer Dimers in a LightCycler PCRIntroductionPrimer dimers are the product of nonspecific annealing and primer elongation events. These events take p ...

相关专题 1）基因组DNA Southern印迹的制备 预备 1．用适当的限制性内切酶消化基因组DNA样品（10μg）。 2．进行琼脂糖凝胶电泳。一般用0.7～1.0％的琼脂糖凝胶分离基因组DNA，它在1～15kb的范围内有较好的分辨率，可选用TBE或TAE缓冲液。琼脂糖凝胶电泳需在1V/cm的电压下进行，如果要分离片段大小相似的DNA带，应 ...

相关专题 1.体细胞杂交法 体细胞是生物体除生殖细胞外的所有细胞。 将从身体分离的体细胞做组织培养进行遗传学研究的学科称为体细胞遗传学（somatic genetics）。体外培养细胞可人为控制或改变环境条件，并可建立细胞株，长期保存，进行各种正常和病理研究。与基因定位有关的是体细胞杂交（somatic cell hybridiza ...

相关专题 基因重组技术是想从事生命科学领域的同学不可不懂的关键技术之一，本文以图文并茂的形式展示了基因重组中的限制酶、载体、分子克隆、基因表达以及基因文库中的重要反应和机制。 重组DNA技术是现代分子生物技术发展中最重要的成就之一。即是基因工程(Gene Engineering)的核心技术。 重组DNA技术(Recombinant DNA ...

相关专题 DNA重组是整个基因工程中的关键，其中所涉及到的主要反应，以及每个步骤中溶液的配制数据等不少，本文对其中的质粒提取鉴定、分子杂交、基因转移、DNA制备等实验方法作详细介绍。 一、质粒DNA的提取及鉴定 (一)质粒DNA的提取及鉴定 1.收获细菌 (1)将2ml含相应抗生素的LB液体培养基加入到通气良好的15ml的试管中，接入一单菌 ...

相关专题 PCR?PCR只是一个简单的不起眼玩艺 ——凯利·穆利斯（Kary Mullis) PCR只是一个概念，所发生的奇迹是：PCR概念变成了可操作的实验系统，变成了一项成熟的技术，后者又上升成为新的概念。 …它最大的特点就是能不断推出新形式。 —— 摘自: A Story of Biotec ...

相关专题 Jian Yu ( Email: jianyu@jhmi.edu)Last edited on May 1 2000OverviewThis protocol was developed in Kinzler/Vogelstein laboratories to isolate cDNA fragments correspondin ...

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