核酸探针标记（label of nuclei acid probe ）

相关专题

 

一、探针 的类型
核酸分子 探针是指用放射性核素或其他标记物标记的、能与特定的靶分子发生特异性相互作用的DNA或RNA片段。
1． 基因组 DNA探针：病毒DNA等
2． cDNA探针 ；最常用
3． 寡核苷酸探针：10-50bp，测序 、点突变
4． RNA探针：稳定性高、特异性强，但RNA极易降解，不宜操作。

二、探针的标记物

理想的标记物：敏感度高；特异性强；不影响探针分子的主要理化特性；标记、检测方法简单、探针保存时间长；对环境无污染、对人体无损害；价格低廉。
一）放射性标记物
二）非放射性标记物

（一） 放射性标记物——放射性核素
利用放射性核素能产生射线的特性将核素标记在核酸合成所必需的NTP或dNTP上，通过一定方法掺入到DNA 或RNA 中去制成探针，与待测的核酸杂交后，核素产生的或射线可使底片感光的特性，通过放射自显影的方法进行检测。
产生射线的核素：32P、3H、35S
产生射线的核素：125I
1、常用的放射性核素
1） 32P：产生射线，灵敏度高，分辨率强，是最常用的放射性标记物，但半衰期短（14。3天）：位和位标记。
2）35S：分辨率高、半衰期长（87.1天）。敏感度底

2、放射性标记物的优缺点

优点：灵敏度高：0.01pg
特异性强
缺点：放射性污染
成本高、半衰期短，不能长期保存

二）非放射性标记物
1、优缺点
优点：无放射性污染，成本低、操作简单
缺点：敏感性、特异性均低于放射性核素

2、常用的标记物
1）生物素：1-2pg
生物素化核苷酸：bio-16-dUTP
bio-11-dUTP
生物素化核苷酸----通过酶触反应掺入到DNA中去制成探针----杂交----抗生物素蛋白-生物素-酶的复合物—加底物—显色
光敏生物素：生物素与光敏基团结合----光敏生物素-----光敏生物素与核酸探针混合----在强光的作用下----光敏基团与核酸共价结合---生物素标记的 探针

生物素化的核苷酸和光敏生物素


2）地高辛甙元

Dig-dUTP-----通过酶触反应掺入到DNA中去制成探针----杂交----加抗地高辛-酶的复合物—加底物—显色
灵敏度较高：0.1pg
特异性较生物素高
是较理想的非放射性标记物

三、探针的标记方法
（一）缺口翻译法或切口平移（nick translation）