DNA基础知识

几个小技巧：1：在做多个同类酶切反应预混液时，水要多加1-5微升(当然不能超过预混液总体积的5%)，以防止最后一管酶液不够的尴尬局面.2:记住所用酶的特性，不光体现BUFFER的选择上。也体现记住不同限制酶稳定性上。比如BamHI5小时内稳定（37度），而BglII16小时内都保留100%的活性；那么在用酶时，如果能反应16小时，就可以采用BamHI : BglII = 2:1的用量了(为了省钱) ...

1. 10ml菌液过夜培养至饱和（OD600值为2-3） 2. 离心沉降细胞（Sorvall中以2000rpm的速度），然后以冷的、等体积的无菌蒸馏水洗涤 3. 将细胞沉淀在200μl 裂解缓冲液中重悬浮，然后加入约300μl 玻璃珠和200μl的1：1苯酚：氯仿混和液 4. 漩涡摇匀1-2min 5. 加入200μl的 TE缓冲液，倒置混合6-10次。注意：从这步开始漩涡摇匀可能会剪切DNA 6 ...

一:生长期重要性无庸置疑比如外源DNA基因组整合时酵母通常选取OD600值为1-2左右.这是因为其时酵母分裂旺盛细胞核膜较易被攻入(处于有丝分裂的前几期);同理基因组DNA松散暴露电转入的外源DNA较易整合; 细胞生命力也较强. 多种因素组合使得转化率得以提高.二:将你的细胞洗干净些很多新手做细菌酵母电转效率不高的原因有时很简单.最后的细胞悬液中带有太多的离子导致电流太强.曾看见新手电转时电转杯中 ...

Transformation of Gram-Positive Bacteriaan adaptation from Chang D. Chassy B. Saunders J. Sowers A. 1992.Guide to Electroporation and Electrofusion Academic Press Inc. San Diego CA.Guiding principles: ...

1、低温下长时间的连接效率比室温下短时间连接的好。2、在体系中加一点切载体的酶，只要连接后原来的酶切位点消失。这样可避免载体自连，应该可以大大提高平端连接的效率。3、足够多的载体和插入片段是最重要的 。我认为也不一定，要看片段具体情况而言，有时载体和片段浓度过高，容易产生线性化产物，不利于环化的。4、平端的连接对于离子浓度很敏感回收的时候多洗洗我做了几次都很顺的加PEG和扩大酶量22度2小时后4C ...

一、石蜡包埋组织DNA提取的基本方法从石蜡包埋组织中提取DNA的基本步骤，是在常规DNA提取方法的基础上改良和演变而业。Goelz等（1985）最先提出的石蜡包埋组织DNA提取技术，是用机械的方法破碎组织，切除多余的石蜡，进入含SDS和高浓度蛋白酶K（１mg/ml）的提取缓冲液加温孵育，然后进行苯酚和氯仿抽提。 所得DNA虽不完整，但可被限制性内切酶切割，因而适于点杂交，印迹杂交等多种分了生物学实 ...

方法一A液：1M，MnCl2： B液：1M，HEPES，pH=6.2-6.8，用无菌水配，配后不需灭菌； C液 称取CaCl2 0.10g，KCl 1.18g，全部转入细口试剂瓶，然后加入46ml三蒸水，轻轻振荡使所有组分充分溶解。将瓶塞盖上并用牛皮纸、棉线包扎，然后放入灭菌锅121℃高压灭菌备用。取1管B液（0.6ml），全部加入C液(46ml)中，混匀后，再用1ml移液器加入3.3ml A液， ...

第一节 概 述 在自然条件下很多质粒都可通过细菌接合作用转移到新的宿主内但在人工构建的质粒载体中一般缺乏此种转移所必需的mob基因因此不能自行完成从一个细胞到另一个细胞的接合转移。如需将质粒载体转移进受体细菌需诱导受体细菌产生一种短暂的感受态以摄取外源DNA。转化(Transformation)是将外源DNA分子引入受体细胞使之获得新的遗传性状的一种手段它是微生物遗传、分子遗传、基因工程等研究领域 ...

Lentivirus Transduction of Hematopoietic CellsMing-Jie Li and John J. RossiDivision of Molecular Biology Beckman Research Institute of the City of Hope Duarte California 91010Excerpted from Gene Tran ...

Removal of Ethidium Bromide from DNA by Extraction with Organic SolventsJoseph SambrookPeter Maccallum Cancer Institute and The University of Melbourne AustraliaDavid W. RussellUniversity of Texas So ...

The Inoue Method for Preparation and Transformation of Competent E. coli: "Ultra Competent" CellsJoseph SambrookPeter Maccallum Cancer Institute and The University of Melbourne AustraliaDavid W. Russ ...

1、提取DNA的简易方法:1)、从全血中提取DNA：取20μl抗凝血于0.5ml无菌管中，加500μl左右的ddH2O混匀后，12000rpm离心2分钟，弃上清，（若沉淀中仍 有红细胞需重复此操作1-2次）加入样品提取液20μl混匀100℃煮10分钟(可在扩增仪上进行)后12000rpm离心5分钟取上清2μl进行扩增。2)、从其它有核细胞中提取DNA：可直接加适量的样品提取液到装有发根、头屑、骨髓 ...

方法一：1. 标本预处理：将1ml EDTA抗凝贮冻血液于室温解冻后移入5ml离心管中，加入1ml磷酸缓冲盐溶液（PBS），混匀，3500g离心15min倾去含裂解红细胞上清。重复一次。用0.7ml DNA提取液混悬白细胞沉淀，37℃水浴温育1h。2. 消化：上述DNA提取液混悬白细胞，37℃水浴温育1h后，加入1mg/ml蛋白酶K 0.2ml至终浓度为100-200ug/ml上下转动混匀，液体变 ...

（一）外源ＤＮＡ和质粒载体的连接反应　　外源ＤＮＡ片段和线状质粒载体的连接，也就是在双链ＤＮＡ５'磷酸和相邻的3'羟基之间 形成的新的共价链。如质粒载体的两条链都带5'磷酸，可生成４个新的磷酸二酯链。但如果质粒ＤＮＡ已去磷酸化，则吸能形成２个新的磷酸二酯链。在这种情况下产生的两个杂交体分子带有２个单链切口，当杂本导入感受态细胞后可被修复。相邻的５'磷酸和３'羟基间磷酸二酯键的形成可在体外由两种不同 ...

耐热DNA聚合酶特点：合理选择耐热DNA聚合酶是PCR成败与否的一个关键因素，如何选择最合适的耐热聚合酶，是进行PCR实验首先要考虑的问题。目前市面上有许多耐热DNA聚合酶，虽然名称各不相同，但主要区别在于特异性、保真性、耐热性、扩增速率、扩增片段长度等几个指标。TIANGEN公司生产的耐热DNA聚合酶全部采用标准化生产工艺和质量检测标准，是经过多次分子筛、离子交换层析柱纯化的超纯型产品，去除了宿 ...

大片段DNA的测序: 通过鸟枪法 (Shot Gun Sequencing) 测序 鸟枪法测序的操作方法1. 用限制酶切下目的片段的大片段Insert DNA 并用Agarose凝胶电泳进行回收。2. 对回收的大片段DNA用物理方法 (如超声波等) 进行切断处理，然后用T4 DNA Polymerase对小片段 DNA进行末端平滑化。3. 进行Agarose电泳，切胶回收1 kbp ~ 2 kbp ...

有时候提DNA不是很顺，所以提出来大家讨论一下，因为我是做微生物的，我首先提供一下关于微生物的DNA 提取方法，大家觉的有可以改进的地方，欢迎讨论！！细菌DNA的提取：（一）试剂：1. 抽提缓冲液2% CTAB (W/V)2% PVP K25 (w/v) （去色素）100mM Tris-HCl (pH8.0)25mM EDTA (pH8.0)2.0M NaCl2.10M LiCl3. 2M LiC ...

1. 分离外周血白细胞(1)取患者肘静脉血5ml，EDTA抗凝，2500rpm离心10 min。(2)小心吸取上层血浆，分装到3个0.5ml离心管中。(3)在血细胞中加入3倍体积的溶血液，摇匀，冰浴15 min。(4)2500rpm离心10 min，弃上清。 (5)加入10ml溶血液，摇匀，冰浴15 min。(6)3000rpm离心10 min，弃上清。(7)倒置离心管，去掉残液。(8)得白细胞， ...

近10年来，现代分子生物学技术越来越广泛地被用于人类疾病研究的诸领域，为了解病理状态下基因组DNA的变化积累了新资料。目前认为，人类基因组并非人们想像的那样稳定，诸如基因重排、扩增、缺失，突瘘和DNA甲基化类型改变等时有发生，这些改变对于基因表过和调控，以及疾病过程的发展与转归等方面均具有重要意义。　　医院病理科档案中积存的大量石蜡包埋组织，是一个可靠的分子生物学研究的材料来源。在石蜡切片上进行原 ...

近10年来，现代分子生物学技术越来越广泛地被用于人类疾病研究的诸领域，为了解病理状态下基因组DNA的变化积累了新资料。目前认为，人类基因组并非人们想像的那样稳定，诸如基因重排、扩增、缺失，突瘘和DNA甲基化类型改变等时有发生，这些改变对于基因表过和调控，以及疾病过程的发展与转归等方面均具有重要意义。　　医院病理科档案中积存的大量石蜡包埋组织，是一个可靠的分子生物学研究的材料来源。在石蜡切片上进行原 ...