DNA基础知识

下面是一些分子生物学基础知识，有助于某些实验的理解。E. coli is a Gram-negative, rod-shaped bacterium about 2.5 micrometers long that contains flagella and a genome of 4,639,221 base pairs encoding at least 4000 genes。 The K12 strain was first isolated in 1921 from the stool of a malaria patient and it has been maintained ...

（前面的几个帖子太长了，看一遍所花时间长到逆历史潮流，只能新开一帖，希望快餐一点。本帖不回答求助，先致歉。）1：苯酚保存条件的实验苯酚的保存条件，正统的说法：避光、4C、上覆一层液体、密闭，可保存 1 个月。下面是我的一个实验：3 月 10 日，取 Tris 饱和苯酚 (加入 beta-Mercaptoethanol 抗氧化) 到 6 个透明 1.5ml 离心管中，其中 3 管再覆盖少量液体。取一管未加液体的和一管加液体的放入 4C 冰箱，其余 4 管置于室温。室温的 4 管有两管 (加液和不加液各一管) 用刀子将离心 ...

欢迎大家光临腺病毒之家！希望在这里可以找到你想要的东西！最近，着手将本帖的目录整理了一下，这样便于大家快速找到自己需要的东西！为了促进核酸版的发展和满足广大战友的需求，还请战友们多多提出宝贵的建议！Page 1：1. 电转化感受态的制备2. 穿梭载体Pme I 线性化及回收3. 重组腺病毒质粒的判定4. 化学转化法同源重组Page 2：1. 同源重组的形式2. 阳性重组质粒的判定3. 重组腺病毒的包装（质粒纯化、线性化、转染）Page 3：1. 阳性重组质粒的判定2. 长片 ...

第一章 质粒DNA的分离、纯化和鉴定第一节 概 述　　把一个有用的目的DNA片段通过重组DNA技术,送进受体细胞中去进行繁殖和表达的工具叫载体(Vector)。细菌质粒是重组DNA技术中常用的载体。　　质粒(Plasmid)是一种染色体外的稳定遗传因子,大小从1-200kb不等,为双链、闭环的DNA分子,并以超螺旋状态存在于宿主细胞中。质粒主要发现于细菌、放线菌和真菌细胞中，它具有自主复制和转录能力,能在子代细胞中保持恒定的拷贝数,并表达 ...

最近看到很多战友在论坛上询问如何查询基因序列、如何进行引物设计、如何使用BLAST进行序列比对……，这些问题在NCBI上都可以方便的找到答案。现在我就结合我自己使用NCBI的一些经历（经验）跟大家交流一下BCBI的使用。希望大家都能发表自己的使用心得，让我们共同进步！我分以下几个部分说一下NCBI的使用：Part one： 如何查找基因序列、mRNA、Promoter （第一页）Part two ：如何查找连续的mRNA、cDNA、蛋 ...

自己的实验刚刚开始，又涉及到质粒的提取。翻译了OMEGA 的大/小规模质粒提取试剂盒的说明书（D6922-01和D6942-01）。希望能给和我一样的新手一点帮助，同时请大家指正多给建议，特别是自己的心得啊。全是自己打的，帮顶让大家都能下啊:)E.Z.N.A Plasmid Miniprep Protocol 质粒小规模提取试剂盒Product Number D6942 and D6943,D6944注意：1．使用之前，把试剂盒中的一小管RNA酶加入溶液 ...

近期发现连接转化的问题特别多,希望各位战友能把自己的问题和意见解答都交流出来,只要有建设性的不管问题还是解答,打分从宽,以促进各位战友共同进步,不至于在这些常规问题上浪费时间和精力.同时也希望发问的战友尽量在后面跟帖而不是另开帖,也希望各位战友能把自己以前的有建设性的问题及解答粘贴过来,互相交流.近期的链接如下(1.10-1.5.可以直接在链接下面讨论):【求助】急救!关于重组质粒构建的问题.http://www.dxy ...

SNP（single nucleotide polymorphism），单核苷酸多态性。指在基因组的DNA链上，由于单个核苷酸的变异所引起的DNA序列多态性。SNP数量很多，既可能发生在编码序列上，也可能发生在非编码序列上。发生在编码序列内的SNP，既有不改变氨基酸的同义突变，也有改变了氨基酸的非同义突变。那种改变了氨基酸的非同义SNP就改变了生物性状。由于SNP能稳定的遗传下去，所以在同一个群体当中，那些具有相同SN ...

动物体内转染，简单地说，就是用RNA和DNA直接打动物完成干扰和表达。再通俗地说，用合成的(RNA)或者提取的核酸(DNA)，就可以完成以前的动物转基因或者基因敲除的实验，无需再用病毒或者基因敲除动物。实验周期可以缩短为几天，花费几千元即可进行实验。动物体内转染技术的出现，让广大生物医学研究者，轻松进行动物的基因干扰、导入等操作。尤其是临床医学工作者，可以在很少工作量较少经费的情况下，直接针对研究的疾病进行动物实验， ...

本书有29章，全是英文，经翻译成中文，首次在此公开，就是说还未出过正式的中文版，请珍惜。 现将第1章放上，因内容太多，打成文本将超过千页，将会陆续放上，当然，首先是大家都喜欢！第1章 基因就是DNA早在一个世纪以前，孟德尔(Mendel)定义了基因的基本属性。在他的两个定律中将基因归纳为一种“特殊因子”。在它从亲代传给子代的过程中是不改变的。同一个基因可能以不同的形式存在（突变）。在二倍体的植物中，含有两个染色体组。每个子代从两个母代中各遗传到一组染色体。这同基因的行为相同。相当于发现染色体是基因的载体。下一步是证明每条染色体是由线性排列的基因组成。孟德尔定律预测不同染色体上的基因将各自独立分开。然而在同一染色体上的基因表现为连锁遗传。基础观察显示不同染色体上的基因是以随机重组的方式代代相传，然而连锁性基因重组的几率下降，就是说它们有在一起不分离的趋势。通过基因分析可以绘制出基因连锁图的结构，包含了1条染色体上携带的所有基因。连锁群的基因图与自然存在的染色体相一致。在二十世纪前五十年建立高等生物的遗传图。基因被组合成像一个带子上的珠子。它们出现在固定的位置上，基因的重组包括同

一个高人的实验注意事项——超级有用记不得是在哪里看得了对我的用处相当的大，拿出来同大家分享：实验中的每个环节都很重要忽略任何一个都可能导致实验的失败每个人在实验中都有自己的一些好的细小的习惯例如tip头吸完后马上从移液器上取下来以免忙乱的时候又以同一tip汲取另一种试剂用完量桶或者烧杯后，及时清洗，并放入烘箱。不管大小实验，做完后都要认真做记录。一个枪头如果可以连续吸两次的话，也不能吸，主要是第二次吸时不准， ...

最近做大抽，用的是Qiagen Maxi kit, 一开始抽提产量少，因为是公认的昂贵而好用的试剂盒，觉得是自己操作的不好。就仔细研究了说明书，及整个提取过程，得出一些经验。（high copy plasmid）1.摇菌：菌摇得好不好十分重要。整个过程，其他步骤完全按试剂盒说明操作，一般没有问题，唯独摇菌得自己操作。a.个人觉得还是先活化摇菌8h，在稀释后扩大培养较好，不要偷懒。b.摇菌量问题：试剂盒有推荐cultrue volume，我的推荐 ...

写在前面的话：近一段时间由于参与了院子里的管理，接触到了更多的帖子，感触良多。大家好象都习惯于发帖提问，而很少去浏览一下以前的帖子，但然也有一些资源太多了，寻找起来太麻烦。不过看到一些帖子在那里挂了几天没人应也不愿搜搜的就实在无法理解了。就象才进院子里的新手很关心自己下载资源的权限，只要一看到什么资源就下，至于有没有看那就是另一回事了。鉴于此，我们决定开一个热门问题的专帖来讨论这个问题集中以下并并把它作为静态 ...

说明：资料占有数和资料利用率成反比，是我们大多数人的一个坏习惯（包括偶自己）。近期论坛不少帖子都对实验室里的所用水感到困惑。我自己最大的一个体会是层析试验中缓冲液的配制，所用的水对离子交换层析和疏水层析的效果有所影响。为此， 特地摘抄一段大家都知道（但未仔细学习）的内容，以共同来温习实验室用水的相关常识。问题：实验室中常见规格的水及使用注意点?1、自来水（Tap water）Tap water is usually of uncontroll ...

看文献想到的。希望大家从实际出发，讨论不同方法的优缺点，注意的是这里的突变是广义的包括染色体的改变。建议讨论从如下方面展开：1、技术名字、基本原理2、具体实现方法/手段3、应用4、优缺点5、相关技术发展概况6、在PNAS、science、nature、JBC等杂志上的经典应用文献翻译与点评7、其他本版前期的明星技术：1. 【交流】核酸版2005年9月份明星技术: ribosome display2. 【交流】核酸版2005年8月份明星 ...

无意中看到,觉得不错,拿来与大家分享,内容包括:Useful resources:Blocking with immunizing peptide protocol (BL)Buffers and stock solutionsFluorophore tableTroubleshooting tipsImmunohistochemistry (IHC) / Immunocytochemistry (ICC) protocols:IHC-Fr staining protocolI ...

2013年诺贝尔生理或医学奖落花落“基础研究”，无疑给了大家一剂兴奋：在最基础的研究上，坚持下去；在小实验室里，自由探索。丁香通试用中心为助力科研，特推出申请试用装，送丁当的活动。活动时间：2013.10.9-10.30活动形式：跟帖附上申请的试用装，每申请一件，送2个丁当。格式：我申请：动物组织总RNA提取试剂盒重点推荐：5款PCR、RNA提取试剂盒产品特点简介：1. 动物组织总RNA提取试剂盒：去除DNA污染；无需担心RNA ...

刚开始做慢病毒。在此慢慢归纳总结。慢病毒载体（Lentiviral vector, LVs）是在HIV-1病毒基础上改造而成的病毒载体系统，它能高效的将目的基因（或RNAi）导入动物和人的原代细胞或细胞系。慢病毒载体基因组是正链RNA，其基因组进入细胞后，在细胞浆中被其自身携带的反转录酶反转为DNA，形成DNA整合前复合体，进入细胞核后，DNA整合到细胞基因组中。整合后的DNA转录mRNA，回到细胞浆中，表达目的蛋白；或产 ...

《生物实验室安全故事手记》隆重登场！国内第一本依靠网络力量、由专业人士编写而成的实验室安全类书籍!主编 孟博 ID：Biowind实验室通则 副主编 田智 ID：tianx775分子实验室 副主编 向征 ID：jnuxz细胞实验室 副主编　 吴瑨 ID：b01191111微生物实验室 副主编 裴得胜 ID：kaige88动物实验室 副主编　 孙世顷 ID：shiqingsun出版单位：科学出版社原　价：￥ 36.00 元丁香园优惠价：￥ 28.80 元购买方式：丁香淘宝在线购买银行汇款：建设银行　1540 2099 ...

核糖核酸酶保护实验(Ribonuclease protection assay，RPA)是近十年发展起来的一种全新的mRNA定量分析方法。其基本原理是将标记的特异RNA探针(32P或生物素)与待测的RNA样品液相杂交，标记的特异RNA探针按碱基互补的原则与目的基因特异性结合，形成双链RNA；未结合的单链RNA经RNA酶A或RNA酶T1消化形成寡核糖核酸，而待测目的基因与特异RNA探针结合后形成双链RNA，免受RNA ...