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Nuclear fractionation protocol

实验试剂 1. Buffer A 10 mM HEPES 1.5 mM MgCl2 10 mM KCl 0.5 mM DTT 0.05% NP40 (or 0.05% igepal or tergitol) pH 7.9 To prepare 250 ml stock of buffer A: HEPES: 1M = 238.3 g/L therefore 10 ...

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随机引物法标记探针

实验步骤 1.于1.5ml离心管中加入5μl H2O,2μl引物(N6),5μl DNA(0.1μg-1μg)。2.充分混匀,98°C 3分钟。3.离心1秒钟,将离心管盖上的汽化水甩下。4.加入2.5μl dNTPs(各2.5mM),3μl缓冲液,6μl H2O,1μl Klenow酶。充分混匀,置于冰上,拿到同位素室。5.加入1μl ...

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叶绿素a,b含量测定的原理及操作步骤

实验原理 根据叶绿体色素提取液对可见光谱的吸收,利用分光光度计在某一特定波长测定其吸光度,即可用公式计算出提取液中各色素的含量。根据朗伯—比尔定律,某有色溶液的吸光度A与其中溶质浓度C和液层厚度L成正比,即A=αCL式中:α比例常数。当溶液浓度以百分浓度为单位,液层厚度为1cm时,α为该物质的吸光系数。各种有色物质溶液在不同波长下的吸光系数可通过测定已知浓度的 ...

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过碘酸-雪夫染色的原理及操作步骤

实验原理 胞浆内存在糖原或多糖类物质(如粘多糖、粘蛋白、糖蛋白、糖脂等)中的乙二醇基(CHOH-CHOH)经过碘酸(periodicacid)氧化,转变为二醛基(CHO-CHO),与雪夫(Schiff)试剂中的无色品红结合,形成紫红色染料而沉积于细胞内多糖所在处。该反应称为过碘酸-雪夫 (PAS)阳性反应,以前也称为糖原染色。 实验试剂 1. 高碘酸氧化液:HIO4·2H2O1g蒸馏水 ...

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Protocol For Isolation of Genomic DNA From Sperm

实验原理 E.Z.N.A.® Mag-Bind Forensic DNA Isolation Kits use the reversible binding properties of the Mag-Bind® paramagnetic particles to provide a fast and flexible method for isolating genomic DNA from ...

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yeast transformation

实验步骤 小剂量:1. 制作感受态。a. 在500ml锥形瓶中摇100ml 酵母菌种直到OD值达到0.4(30℃),然后分装为两个50ml离心3000g五分钟。b. 弃上清,用20mlddH2O 冲悬,离心3000g五分钟。c. 弃上清,用10ml 1XTE/LiAc冲悬,离心3000g五分钟。d. 小心弃上清,用175μl1XTE/LiAc冲悬。2. 转化a. 每个转化需要50&mu ...

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Extraction of RNA from Fibrous tissue

实验原理 The E.Z.N.A.® HP Total RNA Kit uses the reversible binding properties of HiBind® matrix a new silica-based material. This is combined with the speed of mini-column spin technology. A specificall ...

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Western blotting样品准备

实验步骤 1. Lysis buffersTo prepare samples for running on a gel cells and tissues need to be lysed to release the proteins of interest. This solubilizes the proteins so they can migrate individually thr ...

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MTT比色法实验原理、步骤及注意事项

实验原理 MTT检测原理为活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能使外源性MTT还原为水不溶性的蓝紫色结晶甲瓒(Formazan)并沉积在细胞中,而死细胞无此功能。二甲基亚砜(DMSO)能溶解细胞中的甲瓒,用酶联免疫检测仪在490nm波长处测定其光吸收值,可间接反映活细胞数量。在一定细胞数范围内,MTT结晶形成的量与细胞数成正比。该方法已广泛用于一些生物活性因子的活性检测、大规模的抗肿瘤药物筛选、细胞毒性 ...

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Cell Surface Immunofluorescence Staining Protocol

实验试剂 Cell Staining Buffer Red Cell Lysis Buffer 7-AAD Viability Staining Solution TruStain FcX™ BioLegend Cat. #101319 实验步骤 1. Harvest Tissue or Cells:1) Obtain desired tissue ...

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胡萝卜根离体培养实验

实验试剂 1. MS 培养基 10 mg/L 24-D 2 mg/L 6-BA 2. 70% 乙醇3. 0.1% 升 实验设备 1. 超净工作台2. 灭菌锅3. 显微镜4. 接种器械5. 不锈钢打孔器6. 烧杯( 500ml )7. 培养皿( 9cm )8. 移液管 实验材料 市售大而新鲜的胡萝卜 实验步骤 1. 将胡萝卜用自来水冲洗干净,用刮皮刀除去表皮 ...

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植物原生质体的分离和融合

实验原理 植物原生质体是除去细胞壁后为原生质所包围的“裸露细胞”,是开展基础研究的理想材料。其中酶解法分离原生质体是一个常用的技术,其原理是植物细胞壁主要由纤维素、半纤维素和果胶质组成,因而使用纤维素酶、半纤维素酶和果胶酶能降解细胞壁成分,除去细胞壁,即可得到原生质体。由于原生质体内部与外界环境之间仅隔一层薄薄的细胞膜必须保持在渗透压平衡的溶液中才能保持其完整性。其次还应当考虑取材、酶的种类和纯 ...

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Isolate DNA from NRBC Blood from Buccal Swab or dried blood spots collected with filter paper

实验试剂 1. Absolute Ethanol - approximately 0.3 ml per sample 2. RNase A(Optional) - Prepare a stock of RNase A at 50mg/ml 实验设备 1. Tabletop microcentrifuge and sterile 1.5 ml tubes 2. Water bath - ...

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Cryopreservation and Recovery of Mature Differentiated Neural Cells

实验试剂 Neurobasal® MediumB-27® Serum-Free SupplementGlutaMAX™-ITrypan BlueSynth-a-Freeze® Cryopreservation Medium 实验设备 Cryogenic VialsIsopropanol ChamberFreezer -80°CLiquid nitrogen freezerWater b ...

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胡萝卜愈伤组织诱导标准操作程序

实验材料 胡萝卜直根 实验步骤 1. 用清水洗净胡萝卜直根,用小刀削去表皮和顶部。2. 将其在75%的酒精中消毒5min.3. 50%的次氯酸钠消毒30min,120rpm。4. 无菌水漂洗5遍再用无菌水浸泡30min.5. 最后用无菌水漂洗3遍..6. 消毒好的胡萝卜直根切去表面消毒的1/3部分,下边的2/3部分留下部分用消毒好的小刀沿截面横切成厚度1mm左右的小圆片。7. 然后将小 ...

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毕赤酵母PEG1000转化方法

实验试剂 Buffer A:1M山梨醇,10mM bicine(N-二(羟乙基)甘氨酸)pH8.35,3%(v/v)乙二醇Buffer B:40%(w/v)聚乙二醇1000,0.2M N-二(羟乙基)甘氨酸pH8.35Buffer C:0.15M NaCl,10mM N-二(羟乙基)甘氨酸pH8.35过滤除菌,存于-20 度新鲜的试剂级DMSO,未打开或刚配制,存于-70 度直至使用。 ...

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RNASafer® Protocol for Total RNA Isolation

实验步骤 1. Protocol for total RNA purification from tissue sample with E.Z.N.A.® Total RNA System 1) Remove sample from RNASafer® Reagent using forceps. 2) Estimate the amount of the tissue and se ...

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间接ELISA中试剂的配制及反应流程

实验试剂 1. 包被缓冲液:(0.05 mol/L,pH 9.6的碳酸盐缓冲液) Na2CO3 1.59g NaHCO3 2.93g蒸馏水 1000ml4℃保存,一周内用完。2. 磷酸盐缓冲液(PBS,PH 7.4) NaCl 8.0g KH2PO4 0.2g KCl 0.2g Na2HPO4.12H2O 3.65g蒸馏水 1000ml3. 洗涤液(0.01 mol/ ...

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乙烯和脱落酸对HrpNEa诱导拟南芥抗蚜与抗旱的对比实验

实验原理 HrpNEa是植物病原细菌E. amylovora产生的一种多效型蛋白,用其处理拟南芥能激发脱落酸和乙烯信号介导的抗旱和抗虫过程。ABA和乙烯两种激素都参与了种子萌发和根生长,但在植株地上部分的抗虫性和促生长中只有乙烯是需要的。随着在缺水条件下HrpNEa应用于生长植株的地上部分,ABA介导的干旱被启动而此过程有不需要乙烯的参与。 实验材料 1. 拟南芥野生型Co-0 ...

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Purification of Inhibitor-Free Soil DNA Obtained by other Methods

实验步骤 1. Dissolve the DNA pellet with 200 ul of Elution Buffer or Buffer TE. Important: DNA pellet should be dissolved in Elution Buffer or Buffer TE(pH8.0).2. Add 50 ul inhibitor Removal Resin to the ...

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