实验基础

一、大肠菌群介绍 　　大肠菌群并非细菌学分类命名，而是卫生细菌领域的用语，它不代表某一个或某一属细菌，而指的是具有某些特性的一组与粪便污染有关的细菌，这些细菌在生化及血清学方面并非完全一致，其定义为：需氧及兼性厌氧、在37℃能分解乳糖产酸产气的革兰氏阴性无芽胞杆菌。一般认为该菌群细菌可包括大肠埃希氏菌、柠檬酸杆菌、产气克雷白氏菌和阴沟肠杆菌等。 　　大肠菌群分布较广，在温血动物粪便和自然界广泛存在 ...

大肠杆菌(Escherichia coli)是分子遗传学实验、基因工程操作中广泛采用的一种受体菌，它的遗传背景研究的比较详细，常用做寄主进行基因扩增及外源基因的表达。一.实验目的:掌握大肠杆菌的对照培养、单菌落的分离及菌种保存方法。二.实验原理:大肠杆菌除本身的核染色体外，往往还含有质粒(Plasmid)DNA，这是一种双链闭合环状的DNA分子，大小在1Kb-200Kb左右，通常质粒 ...

中 国ACCC 中国农业微生物菌种保藏管理中心ISF 中国农业科学院土壤肥料研究所SH 上海市农业科学院食用菌研究所CACC 抗菌素菌种保藏管理中心IA 中国医学科学院抗菌素研究所SIA 四川抗菌素工业研究所CGMCC 普通微生物菌种保藏管理中心AS 中国科学院微生物研究所AS-IV 中国科学院武汉病毒研究所CFCC 林业微生物菌种保藏管理中心CAF 中国林业科学院菌种保藏管理中心CICC ...

1．本次实验的目的和要求（1）观察家禽巴氏杆菌病的临诊表现和病理解剖变化 （2）掌握禽巴氏杆菌病的微生物学诊断方法2．实验内容或原理根据典型症状和病变，以及在显微镜下检查组织涂片发现的两极染色的杆菌，可初步诊断本病。但确诊应依靠病原分离鉴定，病原分离鉴定原理为革兰氏染色法。3．需用的仪器或试剂等动物：鸡、小白鼠器材：外科镊子、外科剪、灭菌纱布、载玻片、糖发酵管等。药品：草酸铵结晶紫、革兰氏碘、 ...

微生物的家族 最早将生物界分为两界系统，包括动物界和植物界。以后相继分为三界系统，即动物界、植物界和原生生物界。四界系统，即动物界、植物界和原生生物界（或真菌界）和原核生物界。五界系统，即动物界、植物界、真菌界、原生生物界和原核生物界。 植物与其它生物的区别主要是：植物含有叶绿素，可进行光合作用，具有细胞壁，而且是营固着生活。植物界通常划分为七个大类群，即藻类、菌类、地衣、苔藓、蕨 ...

一、基本原理 微生物具有容易变异的特性，因此，在保藏过程中，必须使微生物的代谢处于最不活跃或相对静止的状态，才能在一定的时间内使其不发生变异而又保持生活能力。 低温、干燥和隔绝空气是使微生物代谢能力降低的重要因素，所以，菌种保藏方法虽多，但都是根据这三个因素而设计的。 二、保藏方法大致可分为以下几种： 1. 传代培养保藏法 又有斜面培养、穿刺培养、疱肉培养 ...

一、实验原理 许多微生物在其生命活动过程中能产生某种特殊的代谢产物，具有选择性地抑制或杀死其他微生物的作用，例如抗生素。不同抗生素的抗菌谱是不同的，某些抗生素只对少数细菌有抗菌作用，例如青霉素一般只对革兰氏阳性菌有抗菌作用，多粘菌素只对革兰氏阴性菌有作用，这类抗生素称为窄谱抗生素；而另一些抗生素则对多种细菌有作用，例如四环素、土霉素对许多革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌都有作用，这类抗生素称为广谱抗生 ...

一、实验原理 高压蒸汽灭菌是将待灭菌的物品放在一个密闭的加压灭菌锅内，通过加热，使灭菌锅隔套间的水沸腾而产生蒸汽。待水蒸汽急剧地将锅内的冷空气从排气阀中驱尽，然后关闭排气阀，继续加热，此时由于蒸汽不能溢出，而增加了灭菌器内的压力，从而使沸点增高，得到高于100℃的温度。导致菌体蛋白质凝固变性而达到灭菌的目的。 在同一温度下，湿热的杀菌效力比干热大，其原因有三：一是湿热中细菌菌体吸收 ...

一、3%酸性酒精溶液 浓盐酸3 ml 95%酒精97 ml 二、中性红指示剂 中性红0.04 g 95%乙醇28 ml 蒸馏水72 ml 中性红pH6.8-8，颜色由红变黄，常用浓度为0.04%。 三、淀粉水解试验用碘液（卢戈氏碘液） 碘片1 g 碘化钾2 g 蒸馏水300 ml 先将碘化钾溶解在少量水中，再将碘片溶解在碘化钾溶液中，待碘全溶后，加足水分即成。 &nb ...

一、吕氏（Loeffler）碱性美蓝染液 A液：美蓝（methyleneblue）0.6 g 95%酒精30 ml B液：KOH 0.01 g 蒸馏水：100 ml 分别配制A液和B液，配好后混合即可。 二、齐氏（Ziehl）石炭酸复红染色液 A液：碱性复红（basicfuchsin）0.3 g 95%酒精 10 ml B液：石炭酸 5.0 g 蒸馏水 95 ml 将碱性复红在研钵 ...

1. Acetobacter Medium (醋酸菌培养基) Glucose (葡萄糖) ：100 g ； Yeasst extract (酵母膏) ：10 g； CaCO3：20 g ； Agar (琼脂) ：15 g； Distilled water (蒸馏水) 1 000 ml Adjust (调) pH to 6.8。 适用范围：恶臭醋酸杆菌混浊变种。 2. N ...

一、目的 本规程旨在为无菌操作及无菌室的保护提供一个标准化规程。 二、安全注意事项 严格无菌操作，防止微生物污染；操作人员进入无菌室应先关掉紫外灯。 三、规程 3.1 无菌室应设有无菌操作间和缓冲间，无菌操作间洁净度应达到10 000级，室内温度保持在20-24℃，湿度保持在45-60%。超净台洁净度应达到100级。 3.2 无菌室应保持清洁， ...

无菌操作技术不仅在微生物学研究和应用上起着举足轻重的作用，在许多生物技术中也被广泛应用，例如转基因技术、单克隆抗体技术等。 无菌室，微生物实验室内专辟的一个小房间，室外设一个缓冲间，缓冲间的门和无菌室的门不要朝向同一方向，以免气流带进杂菌。无菌室和缓冲间都必须密闭，无菌室内的地面、墙壁必须平整，不易藏污纳垢、便于清洗，室内装备的换气设备必须有空气过滤装置。工作台的台面应该处于水平状 ...

培养基经高压灭菌后，用经过灭菌的工具（如接种针和吸管等）在无菌条件下接种含菌材料（如样品、菌苔或菌悬液等）于培养基上，这个过程叫做无菌接种操作。在实验室检验中的各种接种必须是无菌操作。 实验台面不论是什么材料，一律要求光滑、水平。光滑是便于用消毒剂擦洗；水平是倒琼脂培养基时利于培养皿内平板的厚度保持一致。在实验台上方，空气流动应缓慢，杂菌应尽量减少，其周围杂菌也应越少越好。为此，必 ...

一、接种 将微生物接到适于它生长繁殖的人工培养基上或活的生物体内的过程叫做接种。 在实验室用得最多的接种工具是接种环、接种针。由于接种要求或方法的不同，接种针的针尖部常做成不同的形状，有刀形、耙形等之分。有时滴管、吸管也可作为接种工具进行液体接种。在固体培养基表面要将菌液均匀涂布时，需要用到涂布棒。（图1） 图1　接种和分离工具 1.接种针 2.接种环 3.接种钩 4.5.玻璃涂 ...

1. Tris 吸入，摄入，皮肤吸收可造成伤害。戴好手套和护目镜。 2. 氨基乙酸：吸入，摄入，皮肤吸收可造成伤害。戴好手套和护目镜。避免吸入尘埃。 3. X-半乳糖 (X-gal)：对眼睛和皮肤有毒性。使用粉剂时遵循常规注意事项。应注意的是，X-gal 溶液是在一种有机溶剂（DMF）中制备的。 4. β-半乳糖苷酶：有刺激性，可产 ...

消毒（disinfection）与灭菌（sterilization）两者的意义有所不同。消毒一般是指消灭病原菌和有害微生物的营养体而言，灭菌则是指杀灭一切微生物的营养体、芽孢和孢子。消毒与灭菌的方法很多，一般可分为加热、过滤、照射和使用化学药品等方法。 一、加热法 又分干热灭菌和湿热灭菌两类。 1. 干热灭菌 有火焰烧灼灭菌和热空气灭菌两种。火焰烧灼灭菌适 ...

培养基是人工地将多种物质按各种微生物生长的需要配制而成的一种混合营养基质，用以培养或分离各种微生物。因此，营养基质应当有微生物所能利用的营养成分（包括碳源、氮源、能源、无机盐、生长因素）和水。根据微生物的种类和实验目的不同，培养基也有不同的种类和配制方法。 一、按成分的不同分 1. 天然培养基 主要成分是复杂的天然有机物质，如马铃薯、豆芽汁、牛肉膏、蛋白胨、血清等。这些 ...

微生物学实验室所用的玻璃器皿，大多要进行消毒、灭菌和用来培养微生物，因此对其质量、洗涤和包装方法均有一定的要求。一般，玻璃器皿的质量要求硬质玻璃，才能承受高温和短暂烧灼而不致破损；器皿的游离碱含量要少，否则会影响培养基的酸碱度；对玻璃器皿的形状和包装方法的要求，以能防止污染杂菌为准；洗涤方法不恰当也会影响实验结果。本节将对这几方面作详细介绍。 一、器皿的种类、要求与应用 1. 试管 ...

基本原理 发酵工业是既古老又崭新的工业，它的形成经历了漫长的岁月。随着科学技术的发展，发酵工业不断地得到发展和充实。现代发酵工业就是传统的发酵技术与现代DNA重组、细胞融合等新技术相结合，而发展起来的现代生物技术，并通过现代化学工程技术生产有用物质或直接用于工业化生产的一种大工业体系，是生物技术的重要组成部分。 发酵工业在基因工程药物的研制方面起着不可替代的作用。重组DNA技术和大 ...