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        微生物常用染色液的配制

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        9570
        一、吕氏(Loeffler)碱性美蓝染液

        A液:美蓝(methyleneblue)0.6 g

        95%酒精30 ml

        B液:KOH 0.01 g

        蒸馏水:100 ml

        分别配制A液和B液,配好后混合即可。

        二、齐氏(Ziehl)石炭酸复红染色液

        A液:碱性复红(basicfuchsin)0.3 g

        95%酒精 10 ml

        B液:石炭酸 5.0 g

        蒸馏水 95 ml

        将碱性复红在研钵中研磨后,逐渐加入95%酒精,继续研磨使其溶解,配成A液。

        将石炭酸溶解于水中,配成B液。

        混合A液及B液即成。通常可将此混合液稀释5-10倍使用,稀释液易变质失效,一次不宜多配。

        三、革兰氏(Gram)染色液

        1. 草酸铵结晶紫染液

        A液:结晶紫(crystalviolet)2 g

        95%酒精20ml

        B液:草酸铵(ammoniumoxalate)0.8 g

        蒸馏水80 ml

        混合A、B二液,静置48小时后使用。

        2. 卢戈氏(Lugol)碘液

        碘片1.0 g

        碘化钾2.0 g

        蒸馏水300 ml

        先将碘化钾溶解在少量水中,再将碘片溶解在碘化钾溶液中,待碘全溶后,加足水分即成。

        3. 95%的酒精溶液。

        4. 番红复染液

        番红(safranineO)2.5 g

        95%酒精 100 ml

        取上述配好的番红酒精溶液10 ml 与80 ml 蒸馏水混匀即成。

        四、芽孢染色液

        1. 孔雀绿染液

        孔雀绿(malachitegreen)5 g

        蒸馏水 100 ml

        2. 番红水溶液

        番红 0.5 g

        蒸馏水 100 ml

        3. 苯酚品红溶液

        碱性品红 11 g

        无水酒精 100 ml

        制法取上述溶液10 ml 与100 ml 5%的苯酚溶液混合,过滤备用。

        4. 黑色素(nigrosin)溶液

        水溶性黑色素10 g

        蒸馏水 100 ml

        称取10 g 黑色素溶于100 ml 蒸馏水中,置沸水浴中30分钟后,滤纸过滤

        二次,补加水到100 ml,加0.5 ml 甲醛,备用。

        五、荚膜染色液

        1. 黑色素水溶液

        黑色素 5 g

        蒸馏水 100 ml

        福尔马林(40%甲醛)0.5 ml

        将黑色素在蒸馏水中煮沸5分钟,然后加入福尔马林作防腐剂。

        2. 番红染液

        与革兰氏染液中番红复染液相同。

        六、鞭毛染色液

        A液:单宁酸5 g

        FeCl3 1.5 g

        蒸馏水 100 ml

        福尔马林(15%)2.0 ml

        NaOH(1%)1.0 ml

        配好后,当日使用,次日效果差,第三日则不宜使用。

        B液:AgNO3 2 g

        蒸馏水 100 ml

        待AgNO3溶解后,取出10 ml 备用,向其余的90 ml AgNO3中滴入浓NH4ON,使之成为很浓厚的悬浮液,再继续滴加NH4OH,直到新形成的沉淀又重新刚刚溶解为止。

        再将备用的10ml AgNO3慢慢滴入,则出现薄雾,但轻轻摇动后,薄雾状沉淀又消失,再滴入AgNO3,直到摇动后仍呈现轻微而稳定的薄雾状沉淀为止。如所呈雾不重,此染剂可使用一周,如雾重,则银盐沉淀出,不宜使用。

        七、富尔根氏核染色液

        1. 席夫氏(Schiff)试剂

        将1 g碱性复红加入200 ml 煮沸的蒸馏水中,振荡5分钟,冷至50℃左右过滤,再加入1 mol/L HCl 20 ml,摇匀。待冷至25℃时,加Na2S2O5(偏重亚硫酸钠) 3 g,摇匀后装在棕色瓶中,用黑纸包好,放置暗处过夜,此时试剂应为淡黄色(如为粉红色则不能用),再加中性活性炭过滤,滤液振荡1分钟后,再过滤,将此滤液置冷暗处备用(注意:过滤需在避光条件下进行)。

        在整个操作过程中所用的一切器皿都需十分洁净、干燥,以消除还原性物质。

        2. Schandium固定液

        A液:饱和升汞水溶液

        50 ml 升汞水溶液加95%酒精25 ml 混合即得。

        B液:冰醋酸

        取A液9毫升+B液1毫升,混匀后加热至60℃。

        3. 亚硫酸水溶液

        10%偏重亚硫酸钠水溶液5 ml,1 mol/L HCl 5 ml,加蒸馏水100 ml 混合即得。

        八、Bouin氏固定液

        苦味酸饱和水溶液75 ml

        福尔马林(40%甲醛)25 ml

        冰醋酸5 ml

        1 g 苦味酸可制成75 ml 饱和水溶液。

        先将苦味酸溶解成水溶液,然后再加入福尔马林和冰醋酸摇匀即成。

        九、乳酸石炭酸棉蓝染色液

        石炭酸10 g

        乳酸(比重1.21)10 ml

        甘油 20 ml

        蒸馏水 10 ml

        棉蓝(cottonblue)0.02 g

        将石炭酸加在蒸馏水中加热溶解,然后加入乳酸和甘油,最后加入棉蓝,使其溶解即成。

        十、瑞氏(Wright)染色液

        瑞氏染料粉末 0.3 g

        甘油 3 ml

        甲醇 97 ml

        将染料粉末置于干燥的乳缽内研磨,先加甘油,后加甲醇,放玻璃瓶中过夜,过滤即可。

        十一、美蓝(Levowitz-Weber)染液

        在52 ml 95%酒精和44 ml 四氯乙烷的三角烧瓶中,慢慢加入0.6 g 氯化美蓝(methylenebluechloride),旋摇三角烧瓶,使其溶解。放5~10℃下,12~24小时,然后加入4 ml 冰醋酸。用质量好的滤纸如WhatmanNo.42或与之同质量的滤纸过滤。贮存于清洁的密闭容器内。

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