免疫细胞与组织染色实验

免疫组化技术常见问题及其解答集锦

兔胶体金检测技术IGSS法

彩色免疫金银法（colouredIGSS简称CIGSS）是在IGSS基础上发展起来的一种新方法。其基本原理与彩色显影相似。

1、切片固定后用毛细滴管吸取经适当稀释的免疫血清滴加在其上，置于染色盒中保持一定的湿度，37℃作用30min。然后用0.01mol/l pH7.2PBS洗两次，10min，用吸水吸去或吹干余留的液体。 2、再滴加间接荧光抗体（如兔抗人 -球蛋白荧光抗体等），同上步骤，染色30min，37℃，缓冲盐水洗两次10min，搅拌，缓冲甘油封固，镜检。 对照染色：①抗体对照：用正常兔血清或人血清代替免疫血清 ...

直接免疫荧光法测抗原

免疫组化Elivison二步法

SP（streptavidin-perosidase）法，即链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶连结法。

4%多聚甲醛常规灌注固定，取材并置20%蔗糖溶液（4℃）中过夜

欧美国家相继开展了免疫组化质量控制工作，建立了一套比较完善的质量控制方法和程序。

利用荧光染料检测支原体污染。这种染料会结合到DNA的A-T富集区，因为支原体DNA中A-T含量高，所以可将其染色而被检测到。

【求助】细胞免疫组化 参与者：sunnyBIO 没有做过，但是最近要尝试. 网上及园子里找过有许多种方法，但是不知道那种合适. 希望做过的各位可以给我指点. 在此希望高手可以提供详细的方法.不胜感激！ 参与者：sunnyBIO 米有人可以帮帮偶吗? 参与者：zhangyuelin1999 本实验室的方法，参考一下： 细胞爬片后， PBS洗3×5min 4%多聚甲醛固定30分钟（4度冰箱 ...

【求助】免疫组化 参与者：andywfa 我想请教一下，液氮冻存的组织，能否用来做免疫组化? 叩谢了！ 参与者：organer 当然可以，只要你冻存方法正确，冻存可以保护细胞，当然也可保护细胞表面抗原和组织抗原 参与者：zgxsea 液氮冻存组织一般用来提取蛋白、DNA或RNA，做相关指标的检测。如用其做免疫组化，存在一个技术性难题，即冻存的过程中，细胞内易形成冰晶，并破坏细胞结构，做了切片染色后 ...

免疫胶体金银染色和其它免疫细胞化学方法一样，要想得到好的染色效果，关键取决于标本处理是否合适，只有使抗原性及组织结构保存的好，才能使以后的染色成功成为可能，其次要用高特异性和高效价的一抗，选择合适的稀释度。由于免疫组化方法广泛应用于不同的生物学科，所要检出的抗原种类繁多，性质也各不相同。因此，不可能有一种适用于所有抗原的固定剂，而是根据不同的抗原性质区别对待。根据我们使用的固定剂介绍如下，仅供参考 ...

1、基本原理 彩色免疫金银法（coloured IGSS简称CIGSS）是在IGSS基础上发展起来的一种新方法。其基本原理与彩色显影相似。IGSS方法染色在抗原位点处生成银颗粒经铁氰化钾与溴化钾的作用即被氧化成溴化银，后者与彩色显影剂相接触立即被还原成金属银，而彩色显影剂本身则被氧化，其氧化产物使彩色成色剂由无色变成有色的染料并沉积在银颗粒的部位，金属银变成了银离子。由于染料只能通过彩色显影剂沉积 ...

一、免疫荧光的标本制作的基本程序同DAB显色的免疫组化，不同点如下： 1、免疫荧光不需要使用双氧水处理，封闭和一抗孵育与其它相同。 2、免疫荧光的二抗使用不同荧光标记的二抗孵育，孵育时间根据抗体的工作浓度确定。 3、二抗孵育之后充分洗片后即可贴片、封片和观察。 4、免疫荧光在封片使用专用封片剂或甘油：0.01MPBS （1：1）。 5、条件许可可以购买防淬灭的试剂加入封片剂中，标本可以保存更久。 ...

1、荧光显微镜基本操作流程 （1）关闭房间内的电灯，开启显微镜汞灯。 （2）根据样品荧光素选择相应荧光组件。 （3）选择滤光片。 （4）放好样品，找到合适的视野。 （5）需拍照先确认照相机已装好。 （6）使用结束关闭所有电源并做好使用记录。 （7）如需详细说明，请借阅说明书。 2、荧光显微镜使用注意事项 （1）荧光几乎都较弱，应在暗室内进行。 （2）关闭汞灯至少在开启15分钟后。 （3）尽可能缩 ...

对于初入实验室的学生，拟做冰冻切片的免疫荧光染色。从文献看来，荧光素标记的二抗大部分都是选择Jackson ImmunoResearch公司产品，偶遂登入其官方网站，其产品种类太多了，令人眼花。如何选择以下哪种类别参与自己的实验？ 例如：Jackson ImmunoResearch All Secondary Antibodies：Whole IgG of Affinity-Purified An ...

1、问：免疫荧光：用免疫荧光方法做同样的内容，组织切片和培养细胞，两者操作过程中有哪些不同？ 参考见解：只是固定方法不同，细胞固定用甲醇，切片固定用多聚甲醛，而染色方法是一样的。 2、问：近期要做免疫荧光双标，不知哪位有免疫荧光双标技术的详细步骤以及注意事项？ 参考见解：我正在做冰冻组织切片的免疫荧光的双染。有些体会： （1）选取primary antibodies时要来源于两种不同的动物，我用的 ...

1、概念和基本原理 免疫组织化学又称免疫细胞化学，是指带显色剂标记的特异性抗体在组织细胞原位通过抗原抗体反应和组织化学的呈色反应，对相应抗原进行定性、定位、定量测定的一项新技术。它把免疫反应的特异性、组织化学的可见性巧妙地结合起来，借助显微镜的现像和放大作用，在细胞，亚细胞水平检测各种抗原物质，并可在原位显示相应的基因和基因表达产物。 免疫组织化学技术现已有：免疫荧光组织（细胞）化学技术、免疫酶组 ...

免疫荧光细胞化学技术，它的原理是根据抗原抗体反应的规律，把已知的抗原或抗体标记上荧光素，制成荧光抗原或抗体，然后以它作为探针来检测组织或细胞内的相应物质。应用的方法有直接法、间接法、夹心法和补体法等。在荧光显微镜下，根据其形成复合物所发的荧光，来确定判断检测物的来源、性质和部位。 1、直接法：这是最早的方法。其基本原理是用已知的抗体标记上荧光素后成为特异性荧光抗体，染色时将该抗体直接滴在载玻片上进 ...