免疫细胞与组织染色实验

原位免疫PCR的IHC增敏方法：Sano等（1992）率先利用基因工程的方法表达了A蛋白与链霉亲和素的嵌合体分子获得成功，建立了免疫PCR技术。这是一种新的抗原检测系统，利用细胞工程和基因工程技术，巧妙地将抗原抗体反应的特异性同PCR的敏感性相结合，通过构建单克隆抗体与重组核酸的嵌合体分子，使得利用PCR技术检测蛋白成为可能。

滚动式循环放大法IHC增敏方法：滚动式循环放大（RCA）法是一种能够在恒温条件下，使标记有寡核苷酸探针（与组织细胞内的核苷酸无相关性）的抗体（特异性一抗或第二抗）与组织细胞内的抗原结合后，在DNA聚合酶的作用下，加入的寡核苷酸进行循环扩增，产生一条扩增的DNA序列拷贝产物。

白磷还原法制备胶体金分散颗粒：胶体金可用多种方法制备，其中应用较为广泛的是化学还原法。这一方法的基本原理是在氯化金水溶液中加入一定量的还原剂，使金离子还原为金原子，可用于制备胶体金的还原剂有50余种，但在生物医学领域内最为常用的还原剂是白磷、柠檬酸三钠以及鞣酸等。

制备胶体金分散颗粒的其他方法：乙醇-超声波还原法（Baigent和Muller,1980），硼氢化钠还原法（Tschopp等，1982），放射性胶体金制备法（Kent等，1981）

当蛋白质的最适稳定量及标记的最佳pH值被确定以后，便可进行标记。具体步骤如下：（1）根据标记所用胶体金的总量计算出所需要待标记蛋白质的总量。

胶体金标记蛋白质的纯化:标记好的免疫金探针必须经过纯化处理才能用于IHC染色，尤其是免疫电镜的染色。纯化的目的就是除去其中未标记的蛋白质，未充分标记的胶体金及在标记过程可能形成的各种聚合物。其纯化方法有超速离心法、色谱柱法以及以上二者相结合应用。

本法是由Geoghegan等（1978）首次应用金标探针检测B淋巴细胞表面抗原，将胶体金颗粒（大于20nm）标记在第二抗体或SPA分子上，制备成金标二抗。

免疫荧光显微法：溶液准备：PBS（pH7.4）：10mM Na2HPO4 ,1.8mM KH2PO4,50mM NaCl,2.7mM KCl实验步骤：1 . 用盖玻片将12孔板盖上，细胞培养至50%浓度。2 . 将培养液倒掉并用PBS清洗两次。……

免疫共沉淀方法：溶液准备：RIPA缓冲液：50mM Tris-HCl pH7.4 ,150mM NaCl ,1mM EDTA,1%Triton×100,1%去氧胆酸钠，0.1%SDS,1mM PMSF,1μg/ml 牛胰蛋白酶抑制剂 （ aprotinin ） , 1μg/ml亮抑蛋白酶肽 （ leupeptin ）。PBS （ pH7.4 ） :10mM Na2HPO4,1.8mM KH2PO4 ,50mM NaCl ,2.7mM KCl。1×样品缓冲液：65mM Tris-HCl （ pH8.0 ），10% （ v/v ） 甘油，2.3%（w/v） SDS,0.01% 溴酚蓝，1% DTT

百奇生物的免疫组织化学（HRP-DAB系统）：1. 溶液准备：PBS （ pH7.4 ） :10mM Na2HPO4 ,1.8mM KH2PO4 , 50mM NaCl , 2.7mM KCl封闭缓冲液：3%BSA-PBS2. 程序：1 ） 对石蜡切片进行脱蜡和水化：3×10min 二甲苯，5min 100%乙醇，5min 95%乙醇，5min 80%乙醇， 5min 70%乙醇，3×5min PBS.……

免疫组化是应用免疫学基本原理--抗原抗体反应，即抗原与抗体特异性结合的原理，通过化学反应使标记抗体的显色剂 （荧光素、酶、金属离子、同位素） 显色来确定组织细胞内抗原（多肽和蛋白质），对其进行定位、定性及定量的研究，称为免疫组织化学技术（Immunohistochemistry）或免疫细胞化学技术（Immunocytochemistry）。

免疫组化是应用免疫学基本原理--抗原抗体反应，即抗原与抗体特异性结合的原理，通过化学反应使标记抗体的显色剂 （荧光素、酶、金属离子、同位素） 显色来确定组织细胞内抗原（多肽和蛋白质），对其进行定位、定性及定量的研究，称为免疫组织化学技术（Immunohistochemistry）或免疫细胞化学技术（Immunocytochemistry）。

石蜡切片与冰冻切片

贴壁细胞的免疫荧光染色方法

非常棒的动画制作效果和英语原声解说，让你对于免疫印迹技术一目了然。

组织的非特异性染色的机理很复杂，其原因主要有以下几点：（1）一部分荧光素未与蛋白质结合，形成了聚合物和衍化物……

抗原修复过程中由于高温、高压、辐射等诸多因素的影响，极易造成脱片。这里选用ZLI-9001 APES、ZLI- 9003 HistogripTM或ZLI-9005 Poly-L-Lysine等几种试剂，对已清洗的载玻片进行处理。

案例一：DAB染色后切片着色一片黄/背景深 背景：奥运会期间我们课题组研究生都在实验室做实验，许多从北京购买的试剂买不到，对我们的许多实验产生了很大的影响。我以前一直用中杉金桥的Sp三步法染色试剂盒，效果不错，在奥运会期间我准备做同批实验分不同批次酶免疫组化实验，第一批组化实验结果很好，抗体浓度感觉比较合适（Santa Cruz公司1：200），等做第二批时发现封闭血清不够了，为了保证实验顺利进行 ...

免疫组化方法中关键环节及其原理解述

组织细胞固定在免疫荧光中的作用探讨