抗体抗原实验

原理同普通电泳。普通电泳的电压一般为2V/cm~20V/cm，电泳时间需1小时至数小时。电泳时间越长，扩散越严重。对于一些小分子的物质如核苷酸、氨基酸、多肽等，在常压电泳中，往往达不到分离的目的。高压电泳则能使分子量相近的物质充分地进行分离。在高压电泳中，电压可达到50V/cm～200V/cm，高压电源达1 500V～1 0000V，电流可达50mA～400mA.电压越高，分离时间越短，所以在高压 ...

原理交叉免疫电泳是把琼脂平板电泳和火箭电泳结合起来的一种方法。先将抗原样品在琼脂凝胶中进行电泳分离，然后使已分开的各抗原成分与原泳动方向呈90度角的方向泳向含抗体的琼脂凝胶中，于是该抗原样品中的各个抗原成分和它相对应的抗体依次形成若干锥形沉淀线，根据沉淀线的位置及面积（或高度）可确定该抗原的质和量。 此试验可以用来鉴定抗原，即与标准抗原抗体系统相比较，就可知待测样品中抗原的质和量。此法也可 ...

原理 抗原在含有抗体的凝胶中进行电泳，在电场作用下，抗原向一个方向移动，在移动的过程中，逐步与凝胶中的抗体结合而沉淀呈火箭状。沉淀峰面积越大，说明抗原量越多，二者呈正相关，因此可用于抗原的定量测定。此法具有敏感性高、快速等优点。 材料与试剂1．0.05mol/L pH8.6巴比妥缓冲液配成2％的琼脂。2．抗原与抗体3．其它材料同免疫电泳。 操作方法 1．将2％琼脂煮沸溶化后，放入60℃ ...

可溶性抗原（如细菌浸出液、含菌病料浸出液、血清以及其他来源的蛋白质、多糖质、类脂体等）与其相应的抗体相遇后，在电解质参与下，抗原抗体结合形成白色絮状沉淀，出现白色沉淀线，此种现象称为沉淀反应。沉淀反应中的抗原叫沉淀原（precipitinogen）与沉淀原发生反应的抗体称为沉淀素（precipitin）。沉淀反应的发生机制与凝集反应基本相同。不同之点是：沉淀原分子小，单位体积内总面积大，故在定量试 ...

材料与试剂以布氏杆菌病试管凝集反应为例。1.试管（1cm×8cm）、试管架、恒温箱、吸管等。2.布氏杆菌病标准阳性血清、标准阴性血清、布氏杆菌试管凝集用抗原。3.布氏杆菌病待检血清。4.0.5%石炭酸生理盐水。 操作方法1.试管4支，另取对照管3支，共7支试管，置于试管架上。如检多份血清，则对照只需做一份。2.按表4-1加入0.5%石炭酸生理盐水，另用1ml的刻度吸管吸取0.2ml待检血清加入第一 ...

颗粒性抗原（细菌、螺旋体、红细胞等）与相应的抗体血清混合后，在电解质参与下，经过一定时间，抗原抗体凝聚成肉眼可见的凝集块，这种现象称为凝集反应。血清中的抗体称为凝集素（Agglutinin），抗原称为凝集原（Agglutinogen）。细菌或其他凝集原都带有相同的电荷（阴电荷），在悬液中相互排斥而呈均匀的分散状态。抗原与抗体相遇后，由于抗原和抗体分子表面存在着相互对应的化学基团，因而发生特异性结合 ...

材料与试剂以布氏杆菌病平板凝集反应为例。1．玻璃板、刻度吸管等。2．布氏杆菌平板凝集抗原、布氏杆菌标准阳性血清。 操作方法1．取洁净玻板一块，用玻璃铅笔划成方格，并注明待检血清号码。2．取０.２ml吸管分别吸取0.08ml、0.04ml、0.02ml和0.01ml各放入一方格内。大规模检验时，可只做２个血清量，大动物用0.04ml和0.02ml，中小动物用0.08ml和0.04ml。每检一个样品需 ...

原理 间接炭凝集反应简称炭凝。它是以炭粉微粒作为载体，将已知的抗体球蛋白吸附于这种载体上，形成炭粉抗体复合物，当炭血清与相应的抗原相遇时，二者发生特异性结合，形成肉眼可见的炭微粒凝集块。目前炭凝反应已用于炭疽、鼠疫和马副伤寒性流产等病的诊断。 材料与试剂 1．炭粉 炭粉粒子最好大小在0.12mm～0.15mm，目前市场上出售的炭粉均不合要求，必须过300目／寸的标准筛以300r／mi ...

玻片凝集反应一般用于未知细菌的定性，所以又称为定性凝集反应。实践中常用于新分离的大肠杆菌和沙门氏菌的鉴定和分型。反过来，也可用已知的细菌抗原去鉴定未知抗体，如鸡白痢沙门氏菌病的清群就是采用已知鸡白痢菌抗原去检测鸡白痢抗体。 材料与试剂载玻片、已知抗血清、待测细菌等。 操作方法取洁净载玻片一张，用铂金耳钓取已知诊断血清１滴置于载玻片一端，另端置生理盐水１滴做对照。然后用铂金耳钓取被检细菌少许，置生理 ...

间接红血球凝集反应（简称间接血凝）是间接凝集反应中应用最广的一种方法。 原理以红血球为载体的间接凝集反应叫做间接血凝。将抗原吸附在红血球上用以检测微量抗体称为正向间接血凝，以抗体吸附于红血球上，检测相应的抗原，称为反向间接血凝。用抗原吸附红血球，一般比较容易，但用免疫血清吸附红血球，则困难得多，而且往往不易获得良好的结果，因为免疫血清中的成分非常复杂。许多其他蛋白质和非抗体活性的免疫球蛋白占据红血 ...

原理同炭凝，只是载体换为聚苯乙烯乳胶，它是一种由0.6μm～0.7μm的颗粒所组成的胶体溶液，具有良好的吸附蛋白质的性能。间接乳胶凝集目前已用于鼠疫菌、沙门氏菌、流感杆菌、脑膜炎双球菌、葡萄球菌肠毒素等的诊断。 材料与试剂1．聚苯乙烯乳胶2．免疫血清3．正常血清4．标准抗原5．待检抗原6．0.02Mol/L pH8.2硼酸缓冲液硼砂 6.67g硼酸 ...

利用胃蛋白酶分解IgG，将抗体断链为Fab和Fc片段。具体操作方法如下：1．将IgG粉末100mg，溶于2ml0.10Mol/L pH4.0醋酸缓冲液。溶液稍成白浊，30℃，保温10min。2．取结晶胃蛋白酶1.50mg，溶于1.50ml 0.10Mol/L pH4.0醋酸缓冲液，加入上述溶液中，于30℃作用16h。3．用0.10Mol/L pH8.0 PBS透析一夜。4．加入硫醇使成0.10mo ...

（一）透析袋浓缩法利用透析袋浓缩蛋白质溶液是应用最广的一种。将要浓缩的蛋白溶液放入透析袋（无透析袋可用玻璃纸代替），结扎，把高分子（6 000－12 000）聚合物如聚乙二醇（碳蜡）、聚乙烯吡咯、烷酮等或蔗糖撒在透析袋外即可。也可将吸水剂配成30％－40％浓度的溶液，将装有蛋白液的透析袋放入即可。吸水剂用过后，可放入温箱中烘干或自然干燥后，仍可再用。（二）冷冻干燥浓缩法这是浓缩蛋白质的一种较好的办 ...

（一）材料与试剂1．血清2．饱和硫酸铵溶液3．洗脱液0.005Mol/L pH7.4PB液 0.025 Mol/L pH7.4PB液0.01Mol/L pH7.4PBS液(0.14mol/L NaCl) 4．DE525．SephadexG150（二）操作方法1．取血清倍比稀释后，加等量饱和（NH4）2SO4溶液，盐析。2．离心取沉淀，溶于少量生理盐水中，透析、除盐。3．过DE52柱，以0.0 ...

（一）试剂及配制1．饱和硫酸铵液2．各种磷酸盐缓冲液⑴ 0.2mol/L原液A液：0.20Mol/L NaH2PO4液 NaH2PO4·H2O 31.20g H2O 1 000mlB液：0.20Mol/L Na2HPO4液 Na2HPO4·12H2O 71.7g H2O ...

（一）双缩脲测定法1．原理 蛋白质中的肽键有双缩脲反应，在碱性溶液中与二价铜离子形成蓝紫色的络合物，在一定的范围内，颜色的深浅与蛋白质的含量成正比。此法特异性强，游离的氨基酸、小肽和核酸均不产生这种反应，但此法不够敏感，仅能测出毫克水平。 2．试剂配制 硫酸铜（CuSO4·5H2O） 1.50g酒石酸钾钠 ...

（一）材料与试剂1．初乳2．SephadexG2003．0.10Mol/L pH6.8PB液4．0.01Mol/L pH7.4PB液5．DEAE52（二）操作方法1．取初乳20ml，10 000rpm离心10min，弃去表面脂肪层及底部的沉淀物。2．取乳清过SephadexG200柱（柱规格为2.50cm×90cm），以0.10Mol/L pH6.8PB液洗脱，第一峰为IgA（含IgG）。3． ...

（一）材料与试剂配制1．禽胆汁2．饱和硫酸铵溶液3．0.01Mol/L pH7.4PBS液4．0.10Mol/L pH6.4PBS液（0.30Mol/L NaCl）5． DEAE52-纤维素（二）操作方法1．取冷藏的胆汁3Ⅹml，缓慢滴加Ⅹml饱和硫酸铵液，边加边搅拌，使成25％饱和硫酸铵液。4℃放置30min。1． 3 000r/min离心30min，去沉淀。2． 取上清，加饱和硫酸铵液， ...

（一）材料1．血清2．葡聚糖凝胶G2003．洗脱液0.01Mol/L pH7.4PBS（0.14Mol/L NaCl或0.1Mol/L pH8.0 Tris－HCl 0.14Mol/L NaCl）。（二） 操作方法选取2.50cm×90cm层析柱，用葡聚糖凝胶G200装柱，平衡后，直接加血清样品10ml或硫酸铵粗提制品，洗脱液洗脱，流速0.25ml/min，分管收集，测OD280值，第一峰即为I ...

（一）材料与试剂配制1．DEAE52纤维素2．0.10Mol/L ZnSO4液ZnSO4·7H2O 2.88g加水至1 000.00ml3．饱和硫酸铵溶液4．10％EDTA—Na5．SephadexG2006．0.01Mol/L pH7.4PB液7．0.10Mol/L pH6.4PB液8．血清（二）操作方法1．取血清加等量的0.1Mol/L ZnSO4液，调pH至7.0，室温搅拌 ...