抗体抗原实验

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斑 点 杂 交 方 法――优 化 抗 原 和 抗 体 浓 度对于一个给定的抗原，最佳的抗体浓度依赖的抗原和抗体本身。抗原和抗体的亲和力，以及一抗与二抗的特异反应都是不同的。最优抗原和抗体浓度可通过免疫印迹实验中使用不同浓度的抗原和抗体作用确定。另外，更快和更简单的方法是进行斑点印迹实验。以下是使用超敏感信号底物进行的斑点印迹的操作方法。注：所有的抗体稀释度假定起始浓度为1 mg/mL。1. 用TB ...

雌二醇(17β-Estradiol)是天然雌激素的重要成分，为防止儿童性早熟等问题，食品中尤其是畜禽产品的雌二醇检测不容忽视。胶体金免疫层析技术(GICA)在检测小分子有机物方面越来越受到重视。其基本原理是胶体金颗粒能够稳定吸附蛋白质，而蛋白质的生物活性无明显变化，所以它可以取代酶标记抗体〔1，2〕。本实验采用标记有雌二醇单克隆抗体的胶体金颗粒与相对应的固定在硝酸纤维膜上的雌二醇结合物相结合，固定 ...

这是一种使抗体-微珠基质快速捕获抗原的方法，将抗原溶液与微珠混合，搅拌或振荡制成匀浆。这种方法可使抗原与固相化的抗体最大限度地接触。结合反应完成后，将匀浆装入层析柱内，以便收集结合有抗原的抗体-微珠和洗脱抗原。此法可以很好地控制反应时间，充分的利用了抗体结合容量。这比上面介绍的直接用层析柱捕获抗原方法麻烦一些。主要是因为用匀浆装柱比较困难；另一个问题是在混匀过程中会增加抗原溶液中变性蛋白的量，所以 ...

该法可用于分离提取人、兔、小鼠血清中的Ig及杂交瘤诱生的腹水和培养上清液中McAb。　　【材料和试剂】　　（1）正辛酸。　　（2）60mmol/L，pH4.0醋酸缓冲液，PBS。　　（3）透析袋。　　（4）高速低温离心机。　　【操作步骤】　　（1）将待提取样品用60mmol/L，pH4.0醋酸缓冲液稀释3～4倍，调pH至4.5，对含脂质较高的标本可采用二氧化硅粉或玻璃纤维吸附法除去脂质 ...

以抗原免疫动物来制备的抗血清是一个非常复杂的混合物，包括血清的全部成分。但是同抗原特异性结合的抗体则主要是血清中的免疫球蛋白组分。通常用于制备酶标抗体或荧光抗体的免疫球蛋白必须高度纯化并具有特异性，不应含有非抗体的血清蛋白。因此，为了浓缩和提高抗体的效价，或为制备免疫球蛋白特异性抗体时，通常也需要分离和纯化免疫球蛋白。γ球蛋白（IgG）是血清免疫球蛋白的主要成分，约占全部免疫球蛋白的75%，因此， ...

间歇循环刺激法 是制备抗原特异性T细胞克隆的传统方法，即经抗原间隔刺激多个循环。（1）抗原致敏供者的单个核细胞(MNC)和经过3300rad照射的自身MNC（2）抗原（3）含10％人AB型血清的完全RPMI 1640培养液（4）细胞分离及T细胞培养增殖所需的其他试剂和器材。(1)抗原刺激：于24孔培养板加入单个核细胞5×106/2ml/孔和最适浓度的抗原，置37℃，5％CO2温箱培养7d。( ...

（一）原理将放射性元素标记的抗体(或抗原)与相应的抗原(或抗体)沉淀时沉淀线通过自显影而证实。所谓自显影就是通过复合物中的标记同位素在蜕变过程中放出的射线作用于感光材料的卤化银晶体而产生潜影再经过显影把“像”显示出来。这样能检出肉眼看不见的沉淀线从而提高反应的敏感性这种方法可应用于凝胶中的所有反应。（二）材料1、放射性同位素标记的抗原或抗体2、X―射线胶片或全色胶片3、显影液与定影液4、其它同对流 ...

材料二甲苯　　酒精（100％，95％）　　EDTA抗原修复工作液（pH8.0，稀释50倍使用）　　0.5M Tris-NaCl (TBS) pH7.4（稀释10倍使用）　　DAB显色液（临用前配制：试剂盒A、B、C各50ul，于1ml水中混匀）。方法1. 石蜡切片置60℃烘箱中烘烤过夜　　2. 二甲苯中脱蜡，梯度酒精入水(无水乙醇，95％酒精)，浸泡于蒸馏水中待用　　3. 抗原修复取500m ...

相关专题 一、概述 可溶性抗原（如细菌浸出液、含菌病料浸出液、血清以及其他来源的蛋白质、多糖质、类脂体等）与其相应的抗体相遇后，在电解质参与下，抗原抗体结合形成白色絮状沉淀，出现白色沉淀线，此种现象称为沉淀反应。沉淀反应中的抗原叫沉淀原（precipitinogen）与沉淀原发生反应的抗体称为沉淀素（precipitin）。沉淀反应的发生机制 ...

相关专题 免疫沉淀是利用特异性抗体识别并分离抗原的方法。 材料： 上样buffer的配方(用前现配): 2ul 1.25M Tris-HCL pH 6.8 35ul distilled water 2.5ul 2-mercaptoethanol 12.5ul 10%SDS 10ul ...

相关专题 酶与抗体交联的方法有许多种根据酶的结构不同可采用不同的方法。对于制备HRP结合物，可用戊二醛二步法和过碘酸钠法。尤以简易过碘酸钠法更为常用。 　　戊二醛二步法　　1.　原理：戊二醛为一种双功能试剂，通过其醛基分别与酶和免疫球蛋白上的氨基共价结合，形成酶-戊二醛-免疫球蛋白结合物。　　2.　标记步骤：　　(1)　称取HRP25mg溶于 ...

相关专题 (一)　原理 　　目前用于抗体标记的荧光素主要有异硫氰酸荧光素(Fluorescein isothiocynateFITC)或罗达明(Lissamine rhodamine B200 RB200)。在硷性条件下FITC的碳酰胺键可与抗体赖氨酸的ε氨基共价结合，标记后的抗体仍保持与相应抗原结合的能力。在荧光灯源紫外线或 ...

相关专题 一、固定剂 　　大多数神经激素、肽类物质为水溶性，在用于免疫细胞化学研究之前，常需固定。但肽类和蛋白质的物理、化学性质不同，因而对不同的固定方法或固定剂的反应也不尽相同。某些固定剂甚至可同时破坏和/或保护同一抗原的不同抗原决定簇。因此，在进行免疫细胞化学研究之前，很有必要了解所要研究的物质（蛋白质或肽类）的化学性质，并根据需要来选 ...

相关专题 腹水：腹水重组后可加入少量叠氮纳等来阻止细菌生长。腹水应当冻存。单抗最好能够小包装保存以避免反复冻融。若要保存较长时间，则不要在4℃。和血清不同，腹水中含有蛋白酶，会使抗体效价下降，因此加入蛋白酶抑制剂可以选择。 纯IgG:不要稀释抗体后来保存，除非加入羊血清，BSA等后。IgG会和玻璃，塑料等粘附。当IgG的浓度小于0.1 mg/ ...

相关专题 （一）材料与试剂1．抗原 牛结核PPD。2．血清 待检血清、标准结核阳性血清和结核阴性血清。3．硝酸纤维膜 孔径0.45µm。4．氯化金（优质）5．0.2Mol/L PB液6．0.05Mol/L Tris—HCl缓冲液7．硝酸银显影液（现用现配） 明胶（20g/L） 6.00ml 对苯 ...

相关专题 一、单克隆抗体的概念和原理　　免疫反应是人类对疾病具有抵抗力的重要因素。当动物体受抗原刺激后可产生抗体。抗体的特异性取决于抗原分子的决定簇，各种抗原分子具有很多抗原决定簇，因此，免疫动物所产生的抗体实为多种抗体的混合物。用这种传统方法制备抗体效率低、产量有限，且动物抗体注入人体可产生严重的过敏反应。此外，要把这些不同的抗体分开也极困 ...

相关专题 　　血管内皮细胞不仅参与调节血管通透性和凝血过程，在免疫调节，移植排斥，肿瘤转移，炎症等许多过程中也具有重要作用。内皮细胞培养是体外研究内皮细胞功能的重要手段。70年代Eric等建立了内皮细胞分离及体外培养的方法。人脐带静脉是人血管内皮细胞最易获取的来源，在人内皮细胞的研究中被普遍采用。 　　㈠ 原理在体外，内皮细胞在内皮细胞生长因 ...

相关专题 　　免疫斑点试验(Dot Immunobinding Assay DIBA)是利用硝酸纤维素膜(N、C或醋酸纤维素膜作为固相支持物，进行抗原抗体反应的免疫学检测方法。该法具有微量、快速、经济、方便等特点，可用于检测抗体或抗原。近年来已较多地应用于医学基础研究和疾病的诊断。 　　(一)　免疫斑点试验的基本原理 　　硝酸纤维素膜和醋酸纤 ...

相关专题 　　淋巴细胞增殖和分化是机体免疫应答过程的一个重要阶段。因此，检测淋巴细胞增殖水平是细胞免疫研究和临床免疫功能检测的一种常用方法。 　　(一)　原理 　　T细胞、B细胞表面具有识别抗原的受体和有丝分裂原受体，在特异性抗原刺激下可使相应淋巴细胞克隆发生增殖。植物血凝素(PHA)、刀豆蛋白A(ConA)抗CD２、抗CD３ McAb作为多 ...