抗体抗原实验

按细胞比重分离B细胞1．将2～3ml含3×107纯化的B细胞（B细胞90％）的细胞悬液加到3ml Percoll溶液（比重1.074）上，水平离心1000×g 20分钟。2．吸去无细胞上清液，交界面的低密度B细胞和大部分Percoll溶液。由于此时细胞沉淀非常松散，需留下约0.2ml Percoll溶液以防吸去了沉淀细胞。轻敲离心管，用留下的液体悬浮高密度B细胞。3．用洗涤液分别洗涤低密度B细胞和 ...

一、用帖壁法纯化巨噬细胞1．用含20％～40％小牛血清的RPMI-1640培养液将巨噬细胞配成2×106～4×106/ml的浓度。以每平方厘米2×105～4×105个巨噬细胞的密度将细胞悬液接种到玻璃培养皿（瓶）或塑料培养皿（瓶）中。37℃ 5％ CO2的饱和水汽二氧化碳培养箱中培养1小时或24小时。1小时培养节省时间但会丢失一些粘附力弱的巨噬细胞，而24小时可以得到较多的巨噬细胞。20％～40％ ...

　　本法是以NaIO４先将HRP表面的糖分子氧化成醛基，然后再与Ig上的氨基相结合，所获酶标记抗体的产率高，将近70％的HRP和Ig结合，99％的Ig与酶结合，酶与Ig的活性无重大损失，是目前最常用的方法。　　1.　原理：经典的过碘酸钠法中需采用二硝基氟苯封闭HRP上残留的α-和ε氨基基以避免酶分子之间的交联。后来Wilson等改用在低PH下使NaIO４氧化HRP，从而省去了二硝基氟苯封闭HRP步 ...

　　（1）切片入PBS冲洗5min，最好是将切片漂洗于灭菌器皿中。　　（2）0.1mol/L 甘氨酸PBs 5min。　　（3）0.4%Triton X-100 PBS 15min。　　（4）1μg/ml蛋白酶K，37℃保温30min。　　（5）4%多聚甲醛PBS固定5min 。　　（6）PBS冲洗2×3min。　　（7）0.25%乙酸酐（0.1mol/L 三乙醇胺配）10min。　　（8）2×S ...

1．铁蛋白的提取⑴ 配制2%硫酸铵液，并以1Mol/L的NaOH或HCl调pH值，正好为5.85。取1g铁蛋白溶于100ml的2%硫酸铵液中。⑵ 加入20%硫酸镉，使最终浓度为5%，混匀，4℃过夜。⑶ 1 500g离心(4℃)2h，去上清。仍加2%硫酸铵至100ml，混匀，离心，去除不纯沉渣。⑷ 于上清液中重新加入20%硫酸镉，重复步骤⑵，离心，去上清。⑸ 检查沉渣，置显微镜下检查，应具有典型的黄 ...

1．经典法（1）将被检病毒材料0.9ml，加1︰5～1︰10稀释的特异性免疫血清0.1ml充分混合。（2）置37℃作用1h或37℃1h后再置4℃过夜。（3）以17 000r/min～23 000r/min离心90min。（4）吸去上清，将离心管口倒置于滤纸上，吸去残留液体。（5）沉淀物中加少量H2O混悬，用3%磷钨酸(pH6.0)负染20Sec～30Sec，滴加于400目铜网Fomnvar膜上，用 ...

　　造成误差的可能来源有以下几个方面：　　1．各种仪器：设备的准确性、稳定性、效率以及被污染等情况带来的误差。如：①由于放射性测量仪器的稳定性、效率、样品试管的材料和均匀性及被测物的放射性强度等原因。②由于样品的自吸收，本底校正，测定时间，可能的污染等原因。③在试验室中所有的移液管、微量取样器以及天平的刻度、校准和使用方法等原因。④由于反应试管、移液管以及测定用试管等表面清洁度和所引起的不同吸附等 ...

　　1．选择准确性高的方法：对各种方法进行比较，淘汰粗糙及难以重复的方法。　　2．建立方法对比。用相同的测量方法和不同的测量方法在同一实验室和不同实验室，在同一地区和不同地区，在同一时间和不同时间，对同一样品进行对比，检查产生误差的原因。　　3．建立各种类型的标准。对标准品应规定纯度及制备方法，使用年限及贮存条件。　　4．建立操作规程，按章　操作。对使用的试剂、仪器设备要经常检查其有效性，更换试剂 ...

1 标本的采取和保存 可用作ELISA测定的标本十分广泛，体液（如血清）、分泌物（唾液）和排泄物（如尿液、粪便）等均可作标本以测定其中某种抗体或抗原成份。有些标本可直接进行测定（如血清、尿液），有些则需经预处理（如粪便和某些分泌物）。大部分ELISA检测均以血清为标本。血浆中除尚含有纤维蛋白原和抗凝剂外，其他成份均同等于血清。制备血浆标本需借助于抗凝剂，而血清标本只要待血清自然凝固、血块收缩后即可 ...

（一） 原理 免疫电镜技术是免疫化学技术与电镜技术结合的产物，是在超微结构水平研究和观察抗原、抗体结合定位的一种方法学。它主要分为两大类：一类是免疫凝集电镜技术，即采用抗原抗体凝集反应后，再经负染色直接在电镜下观察；另一类则是免疫电镜定位技术。该项技术是利用带有特殊标记的抗体与相应抗原相结合，在电子显微镜下观察，由于标准物形成一定的电子密度而指示出相应抗原所在的部位。免疫电镜的应用，使得抗原和 ...

正常淋巴细胞（如小鼠脾细胞）具有分泌抗体的能力，但不能在体外长期培养，瘤细胞（如骨髓瘤）可以在体外长期培养，但不分泌抗体。于是英国人Kohler和Milstein 1975将两种细胞杂交而创立了单克隆抗体技术，获1984年诺贝尔奖。

当前，免疫学技术正沿着基础研究－应用研究－高技术开发研究3条主线在开展，三者互相促进，推动着技术平台的发展；同时它不断向生物学和医学各个学科渗透，推动现代医学的发展。抗体技术在免疫学中占着重要的地位。杂交瘤技术的建立和细胞因子对免疫细胞发育、分化影响的发现，基因工程技术的发展，使实验室的研究直接转向生物高技术产品的开发，如重组细胞因子、单克隆抗体及其相应的试剂盒、基因工程抗体和疫苗等已经或正在投入 ...

（一）原理 交叉免疫电泳是把琼脂平板电泳和火箭电泳结合起来的一种方法。先将抗原样品在琼脂凝胶中进行电泳分离，然后使已分开的各抗原成分与原泳动方向呈90度角的方向泳向含抗体的琼脂凝胶中，于是该抗原样品中的各个抗原成分和它相对应的抗体依次形成若干锥形沉淀线，根据沉淀线的位置及面积（或高度）可确定该抗原的质和量。 此试验可以用来鉴定抗原，即与标准抗原抗体系统相比较，就可知待测样品中抗原的质 ...

（一）原理 利用酶标记抗原（抗体）和待测抗体（抗原）在电场中向一定方向移动，在比例适当的地方形成沉淀线，通过酶作用底物而显色，指示沉淀线的存在。该法的敏感性大大高于对流免疫电泳。 本试验以检测血吸虫抗体为例。（二）材料与试剂1．0.02Mol/pH 8.6巴比妥缓冲液 巴比妥 0.553g 巴比妥钠 ...

（一）原理当抗原遇到相应的抗体便形成抗原抗体复合物（Ag＋Ab ↔Ag －Ab），当用放射性同位素标记抗原再与相应的抗体结合便形成标记抗原和抗体复合物。即： Ag Ab↔ Ag－Ab。当标记抗原和未标记抗原一起加入相应的抗体时则两种抗原产生相互的竞争，而生成有标记抗原和抗体复合物以及非标记抗原和抗体复合物。生成标记抗原抗体复合物与非标记抗原的含量在一定的限度内是呈反比的，所以利用这个原理去测定未知 ...

（一）材料1．血清2．葡聚糖凝胶G2003．洗脱液0.01Mol/L pH7.4PBS（0.14Mol/L NaCl或0.1Mol/L pH8.0 Tris－HCl 0.14Mol/L NaCl）。（二） 操作方法选取2.50cm×90cm层析柱，用葡聚糖凝胶G200装柱，平衡后，直接加血清样品10ml或硫酸铵粗提制品，洗脱液洗脱，流速0.25ml/min，分管收集，测OD280值，第一峰即为I ...

（一）材料与试剂配制1．动物血清2．硫酸铵饱和溶液硫酸铵 800g~850gH2O 1 000ml加热至绝大部分溶质溶解为止，趁热过滤，置室温过夜，然后以28％NH4OH调pH至7.0（不调pH值也可以）。注：硫酸铵以质量优者为佳，因次品中含有少量重金属对蛋白质巯基有影响。如次品必须除去重金属，可在溶液中通入H2S，静置过夜后滤过，加热蒸发H2S即 ...

（一）制片 选无自发性荧光的石英玻片或普通优质玻片，洗净后浸泡于无水乙醇和乙醚等量混合液中。用时取出用绸布擦净。将待检样品如组织块剪成适当大小印压于玻片上。也可采用冰冻切片或石蜡切片样品。（二）固定 除研究细胞表面抗原或不稳定抗原可不固定外，一般均应固定。固定的作用有三：①防止标本从玻片上脱落；②除去防碍抗原—抗体结合的类脂，使抗原抗体结合物易于获得良好的染色结果；③固定的标本易于保存， ...

（一）材料与试剂配制1．DEAE52纤维素2．0.10Mol/L ZnSO4液ZnSO4·7H2O 2.88g加水至1 000.00ml3．饱和硫酸铵溶液4．10％EDTA—Na5．SephadexG2006．0.01Mol/L pH7.4PB液7．0.10Mol/L pH6.4PB液8．血清（二）操作方法1．取血清加等量的0.1Mol/L ZnSO4液，调pH至7.0，室温搅拌 ...

（一）材料与试剂1．初乳2．SephadexG2003．0.10Mol/L pH6.8PB液4．0.01Mol/L pH7.4PB液5．DEAE52（二）操作方法1．取初乳20ml，10 000rpm离心10min，弃去表面脂肪层及底部的沉淀物。2．取乳清过SephadexG200柱（柱规格为2.50cm×90cm），以0.10Mol/L pH6.8PB液洗脱，第一峰为IgA（含IgG）。3． ...