实验仪器使用技术

要保持泵的良好操作性能，必须持续保持系统的清洁，确保使用的溶剂和试剂的质量，流动相进入流路前必须进行过滤和脱气。 预防泵故障需要持久不间断的努力： 1）、使用优质试剂和HPLC级溶剂，对泵对色谱柱都有好处； 2）、流动相和溶剂在使用前使用优质材料过滤； 3）、对流动相和溶剂进处理脱气； 4）、每次开始使用时要排气放空，工作结束后从泵及色谱柱中洗去缓冲液或有害物；不让水及腐蚀性溶剂等有害物质滞留泵及 ...

保留时间不重现有两种不同的情况：即保留时间漂移和保留时间波动。前者是指保留时间仅沿单方向发生变化，而后者指保留时间无固定规律的波动。将此两种情况区分开来对找到问题的原因往往很有帮助。如，保留时间的漂移往往由柱老化引起；而柱老化不可能引起保留时间的无规律波动。事实上，保留时间漂移的多半原因是不同机理的色谱柱老化，如固定相流失（例如通过水解），色谱柱污染（由样品或流动相所致）等。保留时间漂移的几种最常 ...

1、色谱柱长时间不用，存放时，柱内应充满溶剂，两端封死（如ACN适于反相色谱柱，正相色谱柱用相应的有机相）。 2、对于手动进样器，当使用缓冲溶液时，要用水冲洗进样口，同时搬动进样阀数次，每次数毫升。 3、流动相使用前必须过滤，不要使用多日存放的蒸馏水（易长菌）。 4、带seal-wash的1100，要配制90%水+10%异丙醇，以每分2～3滴的速度虹吸排出，溶剂不能干涸。 5、其它主意事项见说明书 ...

一.实验目的（略） 二. 实验原理 SDS-PAGE是对蛋白质进行量化，比较及特性鉴定的一种经济、快速、而且可重复的方法。该法是依据混合蛋白的分子量不同来进行分离的。 SDS是一种去垢剂，可与蛋白质的疏水部分相结合，破坏其折叠结构，并使其广泛存在于一个广泛均一的溶液中。SDS蛋白质复合物的长度与其分子量成正比。在样品介质和凝胶中加入强还原剂和去污剂后，电荷因素可被忽略。蛋白亚基的迁移率取决于亚基分 ...

一、问：用HPLC进行分析时保留时间有时发生漂移，有时发生快速变化，原因何在？如何解决？ 答： 关于漂移问题：　　1． 温度控制不好，解决方法是采用恒温装置，保持柱温恒定。　　2． 流动相发生变化，解决办法是防止流动相发生蒸发、反应等。　　3． 柱子未平衡好，需对柱子进行更长时间的平衡。 关于快速变化问题　　1． 流速发生变化，解决办法是重新设定流速，使之保持稳定。　　2． 泵中有气泡，可通过排气 ...

一、原理及目的（略） 二、试剂 1、30%丙烯酰胺贮存液：29g丙烯酰胺和1g NN’-亚甲双丙烯酰胺溶于100ml热水中，验证其pH值不大于7.0。置棕色瓶中，4℃保存。 2、1.5mol/L Tris（pH8.8）溶液 3、10% SDS溶液 4、10%过硫酸铵：新鲜配制 5、TEMED溶液：4℃保存 6、1.0 mol/L Tris（pH6.8）溶液 7、2&ti ...

1、使用常规要求 pH：为了保证色谱柱长寿命，硅胶基质色谱柱的使用pH 范围是2～7，超出此范围的色谱柱寿命与功能团结构有关，但是偏离2～7范围越远，色谱柱性能下降的越快。 温度：典型硅胶基质色谱柱的使用温度在5℃与 60℃之间，高温使用会缩短柱寿命。 缓冲溶液：生物样品分离通常要求使用缓冲溶液控制流动相的pH值，仔细控制避免缓冲溶液与流动相有机溶剂混合时产生沉淀，色谱柱和HPLC系统不能储存在含 ...

因为样品中经常会含有能够吸附在色谱柱固定相上的杂质化合物，所以应该经常对色谱柱进行清洗或冲洗。当色谱柱在多次进样后显示出柱效降低时，有必要采用适当的流动相对色谱柱进行处理，冲洗除去吸附在固定相上的污染物和样品残余物。 方法如下： ●将色谱柱从系统上取下，反向连接到输液泵上。色谱柱出口不要连接到检测器上，以免污染检测器流动池。 大多数的硅胶基质色谱柱反相冲洗没有问题，但是聚合物基质色谱柱并不能如此操 ...

质谱，是一种分析方法，原理就是让带电原子、分子或分子碎片按质荷比的大小顺序排列，打出相应的谱线。待分析的样品分子在离子源中离化成具有不同质量的单电行分子离子和碎片离子，这些单电荷离子在加速电场中获得相同的动能并形成一束离子，进入由电场和磁场组成的分析器中；其中离子束中速度较慢的离子通过电场后编转大，速度快的偏转小；在磁场中离子发生角速度矢量相反的偏转，即速度慢的离子依然偏转大，速度快的偏转小；当两 ...

【实验目的】 1.掌握盘状聚丙烯酰胺凝胶电泳的基本原理。 2.学习盘状聚丙烯酰胺凝胶电泳的操作技术，用于分离蛋白质。 【实验原理】 聚丙烯酰胺凝胶电泳是以聚丙烯酰胺作为支持物的一种电泳形式。单体-丙烯酰胺和交联剂-甲叉双丙烯酰胺相互作用可形成聚丙烯酰胺，该聚合反应以TEMED作为催化剂，以APS 作为引发剂。 丙烯酰胺和甲叉双丙烯酰胺的比例可决定凝胶网孔的大小，交联剂所占比重越大，凝胶的网孔 ...

1、故障现象 用户反映YWG C18 10μ（4.6mmX150mm）色谱柱使用20天左右后，柱压升高约1Mpa左右，分离效果变差，用蒸馏水清洗色谱柱没有明显改善。 色谱柱分离度不好，柱效不高，可能是用户分析发酵液，简单的过滤后进样分析，其中的蛋白质等可能没有去除完全，致使过多的蛋白质沉淀在色谱柱中，加之对沉淀的蛋白质没有及时冲洗，长时间后，破坏C18官能团，而且客户使用纯水长时间冲洗色谱柱 ...

除非特殊说明，在所有情况下，所用溶剂的体积应该是色谱柱体积的40～60倍。 应在清洗过程开始和结束时各测一次柱效和容量因子等，比较色谱柱性能的改善，以确定清洗的效果。 确保色谱柱中没有样品和缓冲溶液，清洗前所用的溶剂应与最初清洗时所用的溶剂相溶。 应确保实验测试时所用的流动相与色谱柱中最后的溶剂相溶。 ...

【实验目的】 1.掌握聚丙烯酰胺凝胶等电聚焦的基本原理 　　2.学习用等电聚焦电泳测定蛋白质等电点的操作和方法 【实验原理】 等电聚焦法是一种特殊的聚丙烯酰胺凝胶电泳法。它的特点是在凝胶柱中加入两性电解质载体-Ampholine，从而使凝胶柱上产生pH梯度。当向两性载体凝胶施加电场时，即可形成pH梯度，pH梯度的顺序是从阳极到阴极pH值逐渐增大。 蛋白质为两性电解质，其所带电荷的性质和数量 ...

六通阀进样器是高效液相色谱系统中最理想的进样器，它是由圆形密封垫（转子）和固定底座（定子）组成。美国Rheodyne公司的六通阀进样器最为通用，各大HPLC仪器制造商均以此产品作为仪器的进样器。 工作原理： 1、手柄位进样（Load）位置时，样品经微量进样针从进样孔注射进定量环，定量环充满后，多余样品从放空孔排出。 2、将手柄转动至进样（Inject）位置时，阀与液相流路接通，由泵输送的流动相冲洗 ...

HPLC为广大药学工作者日常工作中必不可少的仪器之一，由于其精度较高，对实验人员和实验室条件要求较高，因此保养也很重要，应引起注意： 1．HPLC的日常操作条件： 温度：10～30℃； 相对湿度<80%； 最好是恒温、恒湿，远离高电干扰、高振动设备。 2．泵的保养： 1)使用流动相尽量要清洁； 　　2)进液处的沙芯过滤头要经常清洗； 　　3)流动相交换时要防止沉淀； 　　4)避免泵内堵塞或有 ...

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【实验目的】 1.掌握SDS—聚丙烯酰胺电泳法的原理。 　　2.学会用此种方法测定蛋白质的分子量。 【实验原理】 SDS—聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)是对蛋白质进行量化，比较及特性鉴定的一种经济、快速、而且可重复的方法。该法主要依据蛋白质的分子量对其进行分离。SDS与蛋白质的疏水部分相结合，破坏其折叠结构，并使其稳定地存在于一个广泛均一的溶液中。SDS&md ...

一、原理 核酸（ribonucleicacid，RNA）分子在一定pH值的缓冲液中带有电荷，将其放入电场中，可向与其所带电荷电性相反的电极移动。聚丙烯酰胺凝胶具有分子筛效应，核酸分子大小、形状不同，故在电场作用下，核酸分子在聚丙烯酰胺凝胶中泳动速度不同，依此可达到分离纯化的目的。 二、材料、仪器设备及试剂 材料：RNA样品液。 （二）仪器设备：1. 电泳仪；2. 玻璃管；3. 试管架；4. 穿 ...

一、原理 用聚丙烯酰胺凝胶电泳法分离鉴定蛋白质（protein），主要依赖于电荷效应和分子筛效应。再与标准样品对照即可确定各区带的成分。要利用凝胶电泳测定某样品的蛋白质分子量就必须去掉其电荷效应，使样品的蛋白质分子的迁移率完全取决于分子量。如在电泳体系中加入一定浓度的十二烷基硫酸钠（Sodiumdodecylsulfate简称SDS）。这种阴离子表面活性剂浓度大于1mmol/L时，以1．4gSDS ...

摘 要 毛细管电泳法以其进样量少、操作简便、分辨率高、易于分离和定量、试剂消耗量少、分析时间短等优点，越来越广泛地应用于酶体系的动力学研究中。本文介绍了近三年来毛细管电泳法在酶反应动力学研究中的应用，包括酶反应动力学参数的测定、抑制动力学以及蛋白质-药物和蛋白质-蛋白质络合常数的测定三个部分。 关键词 毛细管电泳 酶 动力学 抑制剂 络合常数 1967 年Hjerten最早提出毛细管电泳技术，并 ...