遗传学实验技术

相关专题 1 甲基化敏感性限制性内切酶(methylation-sensitive restriction Endonuclease，MS-RE)-PCR/Southern法 这种方法利用甲基化敏感性限制性内切酶对甲基化区的不切割的特性，将DNA消化为不同大小的片段后再进行分析。常使用的甲基化敏感的限制性内切酶有HpaⅡ-MspⅠ(识别序列 ...

相关专题 DNA甲基化是基因组DNA的一种主要表观遗传修饰形式。近年来，大量研究表明DNA甲基化修饰对于维持正常细胞功能、传递基因组遗传印记、胚胎发育以及人类肿瘤发生，起着至关重要的作用。甲基化研究成为表观遗传学的热点，相应的技术也是层出不穷，根据实验目的的不同，这些技术大体能够分成两类：全基因组(高通量)甲基化研究技术以及特异性甲基化位点 ...

相关专题 近年来涌现出不少DNA甲基化的检测技术，少说也有十几种。大致可以分为两类：特异位点的甲基化检测和全基因组的甲基化分析，后者也称为甲基化图谱分析(methylation profiling)。下面大家介绍一些常用的方法。 特异位点的甲基化检测 甲基化特异性PCR(MS-PCR) 这种方法经济实用，无需特殊仪器，因此是目前应用最为广泛 ...

相关专题 G418 ：白色粉末，融点138～144℃，溶于水、甲醇。 CAS No.：108321-42-2 分子式 ：C20H40N4O10 •2H2SO4 分子量 ：692.71 比旋：+104o～+121o 水分：≤10% 吸光值：≤0.015 (280nm，1mg/ml)， ≤0.1 (570nm， 10 ...

相关专题 Q1：G418怎么配制? A1：我觉得不能用水配，因为这样PH会变化很大，至少要用PBS。我是配在HEPES溶液中的，具体方法如下：1g包装的G418瓶子中，加入10ml HEPES溶液，浓度为100 mg/ml完全溶解后，0.22 um过滤，-20度保存。HEPES缓冲液配方如下：90 ml 水中，0.8 g NaCl 0.03 ...

相关专题 1.G418的配制： 方案一： 300mgG418加入3ml PBS溶液，浓度为100mg/ml，完全溶解后，0.22um 过滤，-20℃保存。 方案二：(1)配制1M HEPES：23.8g HEPES(缓冲能力更强)粉末溶于100ml ddH2O，10N NaOH(加量较多)调节pH至7.3，过滤除菌(较难过滤)，4℃保存，终 ...

相关专题 一步步教你设计简并引物PCR实验室产品选择指南 一、从别无选择的蛋白序列设计简并引物，如： M(A/T)ASV(E/D)NR(Q/H/Y)F 你只需要用FastPCR的DNA、Protein互转功能即可。 1、分析可能的组合，如下(fasTA format)： 1 MAASVENRQF 2 MTASVDNRHF 3 MTASVDNR ...

相关专题 一步步教你设计简并引物 简并引物设计都要注意些什么呢？用Primer5.0怎样设计兼并引物呢？下面是网上找到的详细的简并引物设计原则和Primer5.0 设计简并引物的方法可以参考下： 理论上说：由氨基酸回导核酸序列，同时考虑到细菌使用密码子的偏爱性，以减少兼并度，但是这样得到的兼并引物的兼并密码子比较多，我建议你可以先从网上找到已 ...

相关专题 最近想用“简并引物”设计点实验做做，上网找了点东东，还是发现了不少东西。特总结如下：主要包括简并引物设计常用的几个方面及简并因为设计时的注意事项。 简并引物是指代表编码单个氨基酸所有不同碱基可能性的不同序列的混合物。密码子具有简并性，单以氨基酸顺序推测编码的DNA序列是不精确的，但可以设计成对简并引物，扩增所有编码已知顺序的核酸序 ...

相关专题 一步步教你设计简并引物 GeneFisher提供一个在线的简并引物设计工具，基础是同源基因。目前的版本是2.0，加入了AJAX技术。主页：http://bibiserv.techfak.uni-bielefeld.de/genefisher2/ geneFisher2 - Submission 点击 Genefisher2 Subm ...

相关专题 酵母感受态细胞制备可以：(1)用于建立酵母转化体系;(2)用于酵母表达系统构建;(3)用于酵母其他分子生物学研究。 一、试剂与耗材 1. 试剂 细菌用-酵母提取物(Fisher)、 细菌用-蛋白胨(Fisher)、葡萄糖(Fisher)、细菌用-琼脂粉、去离子水、甘油(Sigma)、二甲基亚砜(Sigma)、聚乙二醇3350(Si ...

相关专题 1、毕氏酵母氯化锂转化法 (1)试剂 1M LiCl(用去离子蒸馏水配制，滤膜过滤除菌;必要时用消毒去离子水稀释) 50% PEG3350(Sigma P3640 用去离子蒸馏水配制，滤膜过滤除菌，用较紧的盖子的瓶子分装) 2mg/ml salmon sperm DNA / TE(10mM Tris-Cl pH8.0 1.0mM ...

相关专题 LB培养基的配方及实验指南 lb培养基是每个实验室最常用的物品，用于大肠杆菌的培养，在分子克隆实验室更是必备品。LB培养基或平板可能是你进入实验室最早接触的东东，但下面有几个关于LB培养基的有趣事情，您知不知道? 1、1950年Giuseppe Bertani在研究细菌溶源性过程中，为优化志贺氏菌属的噬斑性状首次制备了LB培养基。很 ...

相关专题 焦磷酸测序技术(pyrosequencing)是一种新型的酶联级联测序技术，焦磷酸测序法适于对已知的短序列的测序分析，其可重复性和精确性能与SangerDNA测序法相媲美，而速度却大大的提高。焦磷酸测序技术产品具备同时对大量样品进行测序分析的能力，为大通量、低成本、适时、快速、直观地进行单核苷酸多态性(single nucle—o ...

相关专题 区别一：琼脂培养基就是加了琼脂粉凝结成固体的lb培养基。 固体的培养基用于细菌涂板， 抗性筛选挑选单克隆之用 液体的用于单克隆菌种扩大培养， 提取目的基因或者蛋白之用 区别之二：就是LB培养基是液体的，而营养琼脂培养基(牛肉膏蛋白胨培养基) 是固体 具体的配方问题—— LB培养基的配方如下: 胰蛋白胨(Tryptone) 10g/ ...

相关专题 问：我欲提酵母质粒。我在为酵母细胞破碎犯愁，有人说超声波就可以。但大多人说对于酵母不行，高手们请指教了!谢了! 答：军科院的方法： 1、用酵母细胞裂解液重悬酵母菌 2、加酚-氯仿 3、加玻璃珠 4、振荡半小时 5、乙醇沉淀 6、电转大肠杆菌 Detailed: Plasmid Isolation from Yeast Reagen ...

相关专题 我给你介绍两个必叫简单点的酵母破壁方法，非常实用，我作过很多实验，这两个方法是我自己总结出来的，希望对你有用! 酵母的细胞壁比较厚不易破，而且细胞壁中含有的一些成分容易影响以后的实验，所以破壁的步骤非常关键!其他步骤只要你按照说明就可以了。 1. 酚氯仿剧烈振荡方法破壁：培养好的1ml酵母细胞在STE溶液中洗涤两次后，用70ulT ...

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相关专题 完美酵母质粒提取实验Protocol 问：请教如何从酿酒酵母抽提质粒? 用胞壁松解酶处理以后，再用SDS处理，是否就可以破碎酵母了，因为是抽提质粒，不是抽基因组DNA，可以不用蛋白酶K处理吗?请各位朋友提宝贵建议(不用玻璃珠破细胞)。我要尽可能把样品中的质粒都抽提出来，然后 REAL TIME PCR定量，好计算每个酵母细胞中的质粒 ...

相关专题 完美酵母质粒提取实验Protocol 问: 想从酵母提取质粒转化大肠杆菌按分子克隆的方法可能都线性化了转化率为0请问有什么好的办法? 答: 以下是我的方法曾提过数百个好像转化效率还可以基本上都提出来了. 个人体会是Lyticase的活性要好而且涡流混匀这一步好像要尽量充分吧u see酵母质粒所以不好提就是因为酵母细胞有很厚的细胞壁再 ...