如何从酿酒酵母抽提质粒？
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1982
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问：请教如何从酿酒酵母抽提质粒 ?
用胞壁松解酶处理以后，再用SDS处理，是否就可以破碎酵母了，因为是抽提质粒，不是抽基因组DNA ，可以不用蛋白酶K处理吗?请各位朋友提宝贵建议(不用玻璃珠破细胞)。我要尽可能把样品中的质粒都抽提出来，然后 REAL TIME PCR定量，好计算每个酵母细胞中的质粒拷贝数目。因为样品少，不能做SOUTHERN BOLT计算拷贝。谢谢了!
答：1.用胞壁松解酶处理以后，再用SDS 处理，应该就可以破碎酵母了; 2.应该用蛋白酶K处理，防止核酸酶降解作用;
私人建议：若想达到兄台的目的，恐怕有很大困难(若想很精确的话)，须仔细考虑每一步骤，以减少损失。最好能将损失率计算进去。
结果验证：用胞壁松解酶处理也可使相当部分胞壁破裂，我将这部分DNA也进行了回收。正如您所言，用SDS处理以后，在显微镜下没有发现完整的酵母细胞了。再次感谢!
