植物学技术

实验42 乙醇酸氧化酶活性测定（比色法） 原理 　　乙醇酸氧化酶在光呼吸作用中起重要的作用，在它的作用下将乙醇酸氧化生成乙醛酸和过氧化氢，反应如下： 　　如果我们以二氯靛酚作为氢受体，接受乙醇酸氧化时脱下的H ，使二氯靛酚还原，此时原来为蓝色的染料则褪至无色，其反应如下： 　　利用染料颜色的变化，即可对酶的活性进行比色测定。由于在酶的粗制品中还 ...

实验43 淀粉的合成──淀粉磷酸化酶 原理 　　植物的组织中有一种淀粉磷酸化酶，能利用1—磷酸葡萄糖合成淀粉，生成的淀粉可用I2—KI染色检出。 仪器药品 　　台天平 　　　　离心机 　　水浴锅 　　　　研钵 　　移液管 　　　　1%1—磷酸葡萄糖 　　0.1mol/L柠檬酸　　0.2mol/L磷酸缓冲液，pH6.5，（见附表2）。 ...

实验44 植物呼吸强度的测定 　　呼吸作用是一切生活细胞所共有的生命活动，是新陈代谢的一个重要组成部分，是植物所有生理活动所需能量的来源，对植物有着十分重要的意义，一旦呼吸作用停止，也就预示生命的结束。 　　测定呼吸作用，一般测定呼吸过程消耗的O2量，或放出的CO2量。方法很多，除下面介绍的几种外，还可用华氏呼吸计（参阅实验87）和氧电极法（参阅实验88）。 ...

实验45 呼吸商的测定 原理 　　呼吸作用吸收的O2和放出的CO2的体积之比称为呼吸商（respiratory quotient，简称RQ）。呼吸商的大小则因呼吸作用消耗的基质而异，若以碳水化合物为基质时，呼吸商等于1，以有机酸为基质则大于1，以油类为基质则小于1。研究呼吸商对于了解呼吸作用的性质有很大帮助。 　　这里介绍测定呼吸商的方法，是利用丹尼（Denny，江 ...

实验47 离体线粒体的氧化作用和磷酸化作用 原理 　　当供给植物充足的氧气时，植物细胞可使底物完全氧化。以葡萄糖作为呼吸底物完全氧化时，最后生成CO2，吸收的O2被还原成水，并且每1摩（尔）葡萄糖的氧化产生38摩（尔）ATP： 　　C6H12O6 6O2 38ADP 38Pi→6CO2 6H2O 38ATP 　　其中大部分ATP是通过称为氧化磷酸化作用形成的， ...

实验48 植物组织中几种酶的组化定位鉴定 原理 　　在植物生理学的研究中，可利用组织化学的方法，来说明植物体内的生理活动问题。例如，当需要检定某种物质性质和在植物体内分布时，用组织化学的方法，可以达到定位和定性的目的，而且有时比用剥离的官或组织，作生化测定更能说明问题。植物组织中酶的组化鉴定的基本原理，是以某物质为底物在专一酶作用下，产生一种有颜色的化合物来表明有 ...

实验49 过氧化物酶活性的测定（比色法） 原理 　　过氧化物酶广泛分布于植物的各个组织器官中。在有过氧化氢存在下，过氧化物酶能使愈创木酚氧化，生成茶褐色物质，可用分光光度计测量生成物的含量。 仪器药品 　　721型分光光度计　　　　　离心机 　　秒表 　　　　　　　　　　天平 　　研钵 　　　　　　　　　　磁力搅拌 ...

实验50 过氧化氢酶活性的测定（氧电极法） 原理 　　过氧化氢酶广泛存在于植物的所有组织中，能将过氧化氢分解为氧和水，可使生物机体免受过氧化氢的毒害作用。测定过氧化氢酶的方法有测压法、滴定法以及分光光度法等。用氧电极法测量放氧速度，方法灵敏而快速。放氧速度与过氧化氢酶活性成正比。 仪器药品 　　氧电极仪 　　　　　　记录仪 ...

实验51 多酚氧化酶活性的测定（氧电极法） 原理 　　多酚氧化酶是一种含铜的氧化酶，能使一元酚和二元酚氧化生成醌。多酚氧化酶活性可以用氧电极测量反应耗氧的速度，或用比色法测量产物的形成，常用的底物如儿茶酚（邻苯二酚）和多巴（3，4－二羟苯丙氨酸）。 仪器药品 　　测氧仪 　　　　　　　记录仪 　　超级恒温水浴 　　　　离 ...

实验52 植物组织中可溶性糖含量的测定（蒽酮比色法） 原理 　　植物在个体发育的各个时期，代谢活动也发生相应的变化，碳水化合物的代谢也不例外，其含量也随之发生变化。了解可溶性糖含量的变化，在生理上和实践上都有重要的意义。这里介绍的是蒽酮比色法，糖在硫酸的作用下生成糖醛，糖醛再与蒽酮作用，形成一种绿色的络合物，颜色的深浅与糖含量有关。方法简便，但没有志一性，对于绝大 ...

实验54 植物组织中碳水化合物含量的测定（Somogyi法） 　　测定植物碳水化合物的含量，通常用80梍85%的酒精抽提，在此浓度的酒精溶液中，还原糖和蔗糖溶解而淀粉沉淀。过滤后在溶液中测定可溶性糖（包括还原糖和蔗糖），在残渣中测定淀粉。还原糖可根据其还原能力大小直接测定其含量。蔗糖和淀粉经水解后生成还原糖，测得其含量，然后换算成蔗糖和淀粉。纤维素用称重法，测得经酸、碱和有机溶剂处理 ...

实验55 氨基酸含量的测定（茚三酮比色法） 原理 　　凡含有自由氨基的化合物，如蛋白质、多肽、氨基酸的溶液与水合茚三酮共热时，能产生紫色化合物，可用比色法进行测定。氨基酸与茚三酮的反应分两个步骤。第一步是氨基酸被氧化形成CO2、NH3和醛、茚三酮被还原成还原型茚三酮；第二步是所形成的还原型茚三酮与另一个茚三酮分子和NH3缩合生成有色物质。 　　　 　　　 ...

实验56 蛋白质含量的测定 　　在研究植物的营养、代谢作用以及生长发育等生命活动时，往往需要测定样品中的蛋白质含量，测定蛋白质的方法有许多，不同的测定方法，乃根据蛋白质的不同理化特性，而不同的蛋白质由于结构不同、组成分不同，它们的理化特性也就很不相同，对不同的测定方法反应也就很难一致，因此，可以说没有一种测定方法在各种条件下都能适用。所以当你选用某一测定方法时，应该注意到： ...

实验58 花青素含量的测定 原理 　　花青素是植物体内广泛分布的色素之一，属黄酮类化合物，黄酮类化合物在植物生长中起调节作用，已受到人们的重视。　　花青素在不同pH条件下，呈现不同的颜色，在酸性中为红色，其颜色深浅与花青素含量成比例，用比色法即可进行测定，方法简单易行。 仪器药品 　　721型分类光度计 　　温箱 　　台天平　　　　　　　剪刀 　　烧杯　　　　　　　　量 ...

实验57 核酸的测定 Ⅰ．方法一 原理 　　核酸在生物体内，尤其是在蛋白质合成方面具有重要的意义。通过对不同年龄植物的各组织内核酸含量的测定，能进一步加深对核酸生理功能的理解。 　　用过氯酸沉淀植物组织匀浆中的核蛋白，用醇醚除去其中的脂类后，以稀碱水解然后酸化，在低温条件下使RNA与DNA分离，制成RNA和DNA提取液，再根据核酸 ...

实验59 莨菪碱和东莨菪碱的提取及分离 原理 　　生物碱是植物的一类次生物质，许多生物碱对人体生理发生强烈作用，因而是重要的药物。 　　莨菪碱和东莨菪碱是茄科植物中常见而有药用价值的生物碱。 　　生物碱可用不同方法提取，本实验介绍离子交换树脂法，其优点是操作及设备简便；有机溶剂用量较少，树脂再生后可反复应用；效率较高，既适合实验室制备，又适合工厂生产。 ...

实验60 植物体内有机物运输途径（环割法，示范） 原理 　　韧皮部的筛管是植物体内有机物质运输的通道，环割试验即可以证明这一点。在木本植物的枝条或树干上，用刀环形剥去一层树皮，深达形成层，从而阻断了割环上下方有机物的交换，在割环的上方聚集着从叶片运来的大量有机物，引起树皮组织生长加强，而形成伤组织或瘤状物。 仪器 　　解剖刀 操作步骤 　　1．夏季，在幼龄杨树或其他木植物上选定尚 ...

实验6I IAA的生物鉴定 （小麦芽鞘切段伸长法） 原理 　　将小麦胚芽鞘的延长部分切成段，漂浮在含有生长素的IAA的溶液中，这些切段可以继续伸长，在一定浓度范围内，芽鞘切段的伸长与生长素浓度的对数成正比，因而可通过测定切段伸长的多少来测定生长素的含量。 仪器药品 　　25℃暗室　　　　 滤纸 　　旋转器 　　　　　分 ...

实验62 脱落酸（ABA）放射免疫测定 原理 　　ABA放射免疫测定(radioimmunoassay RIA)是一种分子相同的标记ABA~undefinedAg)和非标记ABA(Ag)与另一种浓度有限的专一性抗ABA抗体(Ab)进行的竞争性抑制反应： 　　当反应体系中Ag和Ab量保持恒定，并且Ag量Ab量(Ag~IAb100~I35~B时，加入的Ag量越多，则 ...

实验63 吲哚乙酸氧化酶活性的测定 原理 　　吲哚乙酸在吲哚乙酸氧化酶的作用下，被氧化破坏失去活性。植物体内吲哚乙酸氧化酶活力的大小，对调节体内吲哚乙酸的水平，起着重要的作用，而影响植物的生长。酶活力的大小可以其破坏吲哚乙酸的速度表示之。吲哚乙酸的含量可用比色法测定。 仪器药品 　　721型分光光度计　　　　 离心机 　　 ...