微生物学技术

实验三十六 渗透压对微生物的影响 　　一、目的要求 　　了解渗透压对微生物的影响。 　　二、基本原理 　　若将细菌置于低渗液或水中，菌体因吸收水分膨胀甚至破裂；如果将菌体置于高渗液中，则菌体内的水分就会渗出，结果发生质壁分离现象。不同的细菌对渗透压的抵抗力不同。但不论哪种细菌，对渗透压的抵抗力是有一定限度的，超过一定限度则使菌体生长受到抑制，只有在等渗溶液中， ...

实验三十八 生物因素对微生物的影响 　　一、目的要求　　了解某一抗生素的抗菌范围；学习抗菌谱试验的基本方法。　　二、基本原理　　许多微生物在其生命活动过程中能产生某种特殊的代谢产物，具有选择性地抑制或杀死其他微生物的作用，例如抗生素。不同抗生素的抗菌谱是不同的，某些抗生素只对少数细菌有抗菌作用，例如青霉素一般只对革兰氏阳性菌有抗菌作用，多粘菌素只对革兰氏阴性菌有作用，这类抗生素称为窄谱抗生 ...

Ⅹ、微生物的生理生化反应 　　各种细菌在代谢类型上表现了很大的差异。不同的细菌分解大分子碳水化合物、蛋白质和脂肪的能力不同，所能发酵的类型和最终产物也不一样。不同细菌对营养的要求不同也说明了它们有不同的合成能力。所有这些都反映了它们是有不同的酶系统。 　　细菌的这种生化反应的多样性在自然界产生了两种结果：第一、使自然界所有的有机分子都有可能得到分解；第二、使不同细菌之间有了互 ...

实验三十五 温度对微生物的影响 　　一、目的要求 　　了解不同微生物对高温的抵抗力以及同一微生物在不同的温度下对其生长的影响。 　　二、基本原理 　　温度是影响微生物生长与存活的重要因素之一。当微生物处于最适生长温度时，有刺激生长的作用；不适宜的温度可以导致细菌的形态和代谢的改变或使微生物的蛋白质凝固变性而导致死亡。不同的微生物对温度的抵抗力不同，如大肠杆菌在 ...

实验三十九 用生长谱法测定微生物的营养要求 　　一、目的要求　　学习用生长谱法测定微生物营养需要的基本原理和方法。　　二、基本原理　　为了使微生物生长、繁殖，必须供给所需要的碳源、氮源、无机盐、微量元素、生长因子等，如果缺少其中一种，微生物便不能生长。根据这一特性，可将微生物接种在一种只缺少某种营养物的完全合适的琼脂培养基中，倒成平板，再将所缺的这种营养物（例如各种碳源）点植于平板上，经适 ...

实验三十七 pH对微生物的影响 　　一、目的要求 　　了解pH对微生物的影响，确定微生物生长所需要的最适pH值。 　　二、基本原理 　　不同的微生物要求的最适pH值不同，一般来说，细菌和放线菌要求中性或微碱性的pH值，而酵母和霉菌则在偏酸的环境中生长。当环境中的pH值超过或低于其适于生长的pH值范围时，微生物的生长就会受到抑制。了解这个特性后，就可以配制不同 ...

实验三十三 化学因素对微生物的影响 　　一、目的要求 　　1．了解常用化学药品对微生物的作用。 　　2．学习测定石炭酸系数的方法。 　　二、基本原理 　　常用的化学消毒剂主要有重金属及其盐类，酚、醇、醛等有机化合物以及碘、表面活性剂等。它们的杀菌或抑菌作用主要是使菌体蛋白质变性，或者与酶的—SH基结合而使酶失去活性所致。 　　本实验是观察某些常用的 ...

实验四十 大分子物质的水解试验 　　一、目的要求 　　证明不同的微生物对复杂有机大分子的水解能力不同，从而说明不同的微生物有不同的酶系统。 　　二、基本原理 　　细菌对大分子的淀粉、蛋白质和脂肪不能直接利用，必须靠产生的胞外酶，如淀粉酶、蛋白酶和脂肪酶将大分子物质分解。胞外酶能分泌扩散到细胞外，将物质分解成小单位如糖、氨基酸、甘油与脂肪酸。这些小单位的物质能被 ...

实验四十一 糖发酵试验 　　一、目的要求 　　了解糖发酵的原理和在肠道细菌鉴定中的重要作用。 　　二、基本原理 　　糖发酵试验是最常用的生化反应，在肠道细菌的鉴定上尤为重要。绝大多数细菌都能利用糖类作为碳源和能源，但是它们在分解糖的能力上有很大的差异，有些细菌能分解某种糖并产酸（如乳酸、醋酸、丙酸等）和气体（如氢、甲烷、二氧化碳等）；有些细菌只产酸不产气。例如 ...

实验四十二 IMVIC与硫化氢试验 　　一、目的要求 　　了解IMVIC与硫化氢反应的原理及其在肠道菌鉴定中的意义。 　　二、基本原理 　　IMVIC是吲哚试验（indol test）、甲基红试验（methylred test）、伏-普试验（Voges-Prokauer test，V．P．试验） 和柠檬酸盐试验（citrate tes ...

实验四十四 抗生素效价的生物测定 　　一、目的要求 　　学习了解抗生素效价的生物测定（管碟法）的基本原理和方法。 　　二、基本原理 　　某些微生物在代谢过程中所产生的次级代谢产物能在低浓度的情况下抑制或杀死某些微生物，这种物质称为抗生素。 　　抗生素效价的生物测定有稀释法、比浊法、扩散法三大类。管碟法是扩散法中的一种，本法是利用抗生素在琼脂培养基的扩散渗透作 ...

Ⅺ．微生物遗传 　　遗传是生物学中最基本的理论问题。而微生物则是研究遗传学有关基本理论问题的最好对象和实验材料。这是因为微生物的营养体大多数是单倍体，便于作为基因作用和基因精细结构的研究材料；易于培养，在固体培养基上能形成肉眼可见的菌落以作各种性状的分析；繁殖快，容易获得大量的研究材料；代谢力强，易于积累可供分析研究的中间代谢产物；易变异，可以获得各种遗传性标记。因此，研究微生物的遗传变 ...

实验四十六 抗药性突变株的分离 　　一、目的要求 　　学习用梯度培养皿法分离抗药性突变株。 　　二、基本原理 　　微生物的抗药性突变是 DNA分子的某一特定位置的结构改变的结果，与药物的存在无关，某种药物的存在只是作为分离某种抗药性菌株的一种手段。因而在含有一定抑制生长药物浓度的平板上接种大量的细胞群体，在这些细胞群体中只有极个别具有抗性突变的菌株才能在平板 ...

实验四十五 理化因素的诱变效应 　　一、目的要求 　　通过实验，观察紫外线，硫酸二乙酯对枯草芽孢杆菌BF7658的诱变效应，并学习理化因素诱变育种的方法。 　　二、基本原理 　　许多物理因素（如紫外线、X射线，γ射线等）和化学因素（如硫酸二乙酯、氮芥、亚硝酸、乙烯亚胺、亚硝基胍等）对微生物都有诱变作用。能够引起诱变作用的这些理化因素称为诱变剂。诱变剂的作用是 ...

实验四十三 微量简易诊检系统 　　一、目的要求 　　了解微量简易诊检系统的原理及其优越性，学习使用E-15系统的方法。 　　二、基本原理 　　各种不同的脱水试验培养基和指示剂被吸附在滤纸片上或直接加入特殊的分隔室内，构成一微量生化诊检卡，加入某一试验菌液，培养后即能得到反应结果，可用来对试验菌进行诊断与鉴定。 　　国际上广泛使用的有API-20E系统 ...

Ⅻ．病毒 　　病毒是一类个体极小的超显微生物，必须借助电子显微镜才能观察到。病毒没有细胞结构，大多数病毒是蛋白质与核酸组成的大分子，每一种病毒的核酸或是RNA，或是DNA。它们是专性寄生物，不能独立进行代谢活动与繁殖，只能在特异的宿主细胞内进行复制。 　　根据宿主的不同，可将病毒分为动物病毒（包括昆虫病毒）、植物病毒与细菌病毒——噬菌体等。由于病毒是专性寄生物，因此，还不能用人工培 ...

实验四十七 细菌的接合作用 　　一、目的要求 　　1．了解细菌接合作用的基本原理。 　　2．学习细菌接合实验的基本方法。 　　二、基本原理 　　细菌的接合是指供体菌与受体菌的完整细胞经直接接触时，供体菌的 DNA分子（包括质粒）传递给受体菌而产生基因重组的现象。营养缺陷型菌株例如Me-Th 或Me Th-不能在基本培养基中生长，如果将两者混合培养，使其接合 ...

实验四十八 噬菌体的分离与纯化 　　一、目的要求 　　1．学习分离、纯化噬菌体的基本原理和方法。 　　2．观察噬菌斑。 　　二、基本原理 　　因为噬菌体是专性寄生物，所以自然界中凡有细菌分布的地方，均可发现其特异的噬菌体的存在，亦即噬菌体是伴随着宿主细菌的分布而分布的，例如粪便与阴沟污水中含有大量大肠杆菌，故也能很容易地分离到大肠杆菌噬菌体；乳牛场有较多的 ...

实验四十九 噬菌体效价的测定 　　一、目的要求 　　学习噬菌体效价测定的基本方法。 　　二、基本原理 　　噬菌体的效价就是一毫升培养液中所含活噬菌体的数量。效价测定的方法，一般应用双层琼脂平板法。由于在含有特异宿主细菌的琼脂平板上，一个噬菌体产生一个噬菌斑，因此，能进行噬菌体的计数。 　　三、器材 　　大肠杆菌18小时培养液，大肠杆菌噬菌体10 ...

ⅩⅢ．免疫学技术 　　免疫分为非特异性免疫和特异性免疫两大类。非特异性免疫是由机体固有的组织细胞和体液中的抗菌物质共同实现的，例如吞噬细胞、补体、溶菌酶等。特异性免疫是由于机体受抗原刺激后所产生的特异性致敏细胞和抗体所起的作用。这些免疫因素及其作用在体外均可测得，例如可将吞噬细胞从人体的血液或动物的血液和腹腔液中分离出来，再加入细菌，可观察到吞噬细胞的吞噬活性，用以说明该机体的吞噬免疫功 ...