用生长谱法测定微生物的营养要求

 

实验三十九 用生长谱法测定微生物的营养要求

 

　　一、目的要求

　　学习用生长谱法测定微生物营养需要的基本原理和方法。

　　二、基本原理

　　为了使微生物生长、繁殖，必须供给所需要的碳源、氮源、无机盐、微量元素、生长因子等，如果缺少其中一种，微生物便不能生长。根据这一特性，可将微生物接种在一种只缺少某种营养物的完全合适的琼脂培养基中，倒成平板，再将所缺的这种营养物（例如各种碳源）点植于平板上，经适温培养，该营养物便逐渐扩散于植点周围。该微生物若需要此种营养物，便在这种营养物扩散处生长繁殖，微生物繁殖之处便出现圆形菌落圈，即生长图形，故称此法为生长谱法。这种方法可以定性、定量地测定微生物对各种营养物质的需要。在微生物育种和营养缺陷型的鉴定中也常用此法。

　　三、器材

　　大肠杆菌；

　　合成培养基，木糖，葡萄糖，半乳糖，麦芽糖，蔗糖，乳糖；

　　无菌平板，无菌牙签，吸管，无菌水等。

　　四、操作步骤

　　1．将培养24小时的大肠杆菌斜面用无菌水洗下，制成菌悬液。

　　2．将合成培养基约20ml，溶化后冷到50℃左右加入1ml大肠杆菌悬液，摇匀，立即倾注于直径为12cm的无菌培养皿中，待充分凝固后，在平板背面用记号笔划分为六个区，并标明要点植的各种糖类，如图Ⅸ-4所示。

 

　　3．用6根无菌牙签，分别挑取6种糖对号点植，糖粒大小如小米粒。

　　4．倒置于37℃温室培养18—24小时，观察各种糖周围有无菌落圈。

　　五、实验报告

　　结果

　　(1)绘图表示生长情况。

　　(2)根据实验结果，大肠杆菌所需要的碳源是什么？