微生物学技术

材料和试剂 1. 6 cm 细胞培养皿（Fiosher）。 2. 人类或小鼠细胞系，细胞试验所需要的生长培养基。 3. 凝聚胺。 4. 合适的选择性抗生素。 仪器 1. 细胞培养箱 步骤 1. 慢病毒感染方法应该根据不同的细胞系和以细胞为基础的试验来进行优 ...

一、3%酸性酒精溶液 浓盐酸3 ml 95%酒精97 ml 二、中性红指示剂 中性红0.04 g 95%乙醇28 ml 蒸馏水72 ml 中性红pH6.8-8，颜色由红变黄，常用浓度为0.04%。 三、淀粉水解试验用碘液（卢戈氏碘液） 碘片1 g 碘化钾2 g 蒸馏水300 ml 先将碘化钾溶解在少量水中，再将碘片溶解在碘化钾溶液中，待碘全溶后，加足水分即成。 &nb ...

一、吕氏（Loeffler）碱性美蓝染液 A液：美蓝（methyleneblue）0.6 g 95%酒精30 ml B液：KOH 0.01 g 蒸馏水：100 ml 分别配制A液和B液，配好后混合即可。 二、齐氏（Ziehl）石炭酸复红染色液 A液：碱性复红（basicfuchsin）0.3 g 95%酒精 10 ml B液：石炭酸 5.0 g 蒸馏水 95 ml 将碱性复红在研钵 ...

1. Acetobacter Medium (醋酸菌培养基) Glucose (葡萄糖) ：100 g ； Yeasst extract (酵母膏) ：10 g； CaCO3：20 g ； Agar (琼脂) ：15 g； Distilled water (蒸馏水) 1 000 ml Adjust (调) pH to 6.8。 适用范围：恶臭醋酸杆菌混浊变种。 2. N ...

一、目的 本规程旨在为无菌操作及无菌室的保护提供一个标准化规程。 二、安全注意事项 严格无菌操作，防止微生物污染；操作人员进入无菌室应先关掉紫外灯。 三、规程 3.1 无菌室应设有无菌操作间和缓冲间，无菌操作间洁净度应达到10 000级，室内温度保持在20-24℃，湿度保持在45-60%。超净台洁净度应达到100级。 3.2 无菌室应保持清洁， ...

无菌操作技术不仅在微生物学研究和应用上起着举足轻重的作用，在许多生物技术中也被广泛应用，例如转基因技术、单克隆抗体技术等。 无菌室，微生物实验室内专辟的一个小房间，室外设一个缓冲间，缓冲间的门和无菌室的门不要朝向同一方向，以免气流带进杂菌。无菌室和缓冲间都必须密闭，无菌室内的地面、墙壁必须平整，不易藏污纳垢、便于清洗，室内装备的换气设备必须有空气过滤装置。工作台的台面应该处于水平状 ...

培养基经高压灭菌后，用经过灭菌的工具（如接种针和吸管等）在无菌条件下接种含菌材料（如样品、菌苔或菌悬液等）于培养基上，这个过程叫做无菌接种操作。在实验室检验中的各种接种必须是无菌操作。 实验台面不论是什么材料，一律要求光滑、水平。光滑是便于用消毒剂擦洗；水平是倒琼脂培养基时利于培养皿内平板的厚度保持一致。在实验台上方，空气流动应缓慢，杂菌应尽量减少，其周围杂菌也应越少越好。为此，必 ...

一、接种 将微生物接到适于它生长繁殖的人工培养基上或活的生物体内的过程叫做接种。 在实验室用得最多的接种工具是接种环、接种针。由于接种要求或方法的不同，接种针的针尖部常做成不同的形状，有刀形、耙形等之分。有时滴管、吸管也可作为接种工具进行液体接种。在固体培养基表面要将菌液均匀涂布时，需要用到涂布棒。（图1） 图1　接种和分离工具 1.接种针 2.接种环 3.接种钩 4.5.玻璃涂 ...

1. Tris 吸入，摄入，皮肤吸收可造成伤害。戴好手套和护目镜。 2. 氨基乙酸：吸入，摄入，皮肤吸收可造成伤害。戴好手套和护目镜。避免吸入尘埃。 3. X-半乳糖 (X-gal)：对眼睛和皮肤有毒性。使用粉剂时遵循常规注意事项。应注意的是，X-gal 溶液是在一种有机溶剂（DMF）中制备的。 4. β-半乳糖苷酶：有刺激性，可产 ...

消毒（disinfection）与灭菌（sterilization）两者的意义有所不同。消毒一般是指消灭病原菌和有害微生物的营养体而言，灭菌则是指杀灭一切微生物的营养体、芽孢和孢子。消毒与灭菌的方法很多，一般可分为加热、过滤、照射和使用化学药品等方法。 一、加热法 又分干热灭菌和湿热灭菌两类。 1. 干热灭菌 有火焰烧灼灭菌和热空气灭菌两种。火焰烧灼灭菌适 ...

培养基是人工地将多种物质按各种微生物生长的需要配制而成的一种混合营养基质，用以培养或分离各种微生物。因此，营养基质应当有微生物所能利用的营养成分（包括碳源、氮源、能源、无机盐、生长因素）和水。根据微生物的种类和实验目的不同，培养基也有不同的种类和配制方法。 一、按成分的不同分 1. 天然培养基 主要成分是复杂的天然有机物质，如马铃薯、豆芽汁、牛肉膏、蛋白胨、血清等。这些 ...

微生物学实验室所用的玻璃器皿，大多要进行消毒、灭菌和用来培养微生物，因此对其质量、洗涤和包装方法均有一定的要求。一般，玻璃器皿的质量要求硬质玻璃，才能承受高温和短暂烧灼而不致破损；器皿的游离碱含量要少，否则会影响培养基的酸碱度；对玻璃器皿的形状和包装方法的要求，以能防止污染杂菌为准；洗涤方法不恰当也会影响实验结果。本节将对这几方面作详细介绍。 一、器皿的种类、要求与应用 1. 试管 ...

1 适用范围 本标准规定了禽流感的血凝试验、血凝抑制试验。 本标准适用于禽流感抗体的检测（主要适用于血清样品）。 2 血凝试验 2.1 材料与试剂 2.1.1 器材：普通天平、分析天平、普通离心机、微型振荡器、注射器、冰箱、高压灭菌器、微量移液器及96孔V形血凝反应板。 2.2.2 pH7.2磷酸盐缓冲液(PBS)，配制方 ...

基本原理 发酵工业是既古老又崭新的工业，它的形成经历了漫长的岁月。随着科学技术的发展，发酵工业不断地得到发展和充实。现代发酵工业就是传统的发酵技术与现代DNA重组、细胞融合等新技术相结合，而发展起来的现代生物技术，并通过现代化学工程技术生产有用物质或直接用于工业化生产的一种大工业体系，是生物技术的重要组成部分。 发酵工业在基因工程药物的研制方面起着不可替代的作用。重组DNA技术和大 ...

慢病毒（慢病毒（Lentiviruses）属于逆转录病毒科。慢病毒核蛋白质前整合复合物具有噬核特性，病毒基因组运输至细胞核，从而使慢病毒可以感染和在非有丝分裂细胞中复制。这一特性使慢病毒成为基因治疗的转移载体。 HIV （Human immunodeficiency virus） 、EIAV （Equine infectious anemia virus） 、 FIV （Feline immunodeficiency virus） 、 SIV （Simian immunodeficiency virus） 。其中研究最多最为透彻的是HIV。

一、目的要求掌握鸡胚尿囊腔接种培养新城疫病毒的操作技术。二、器材1.鸡胚 应选用健康鸡群的受精蛋，接种鸡的鸡胚应无母源抗体，以免影响病毒在胚胎中的增殖。实验用的鸡胚多采用9—10日龄的活胚。2.接种材料 新城疫I系疫苗3.各种器械 孵卵器、照蛋箱、蛋架、打孔器、1ml结核菌素注射器、41/2号注射针头、镊子、3%碘酊、75%酒精棉球、铅笔、酒精灯、剪刀、眼科镊子、灭菌的疫苗瓶、灭菌滴管 ...

PCR法是20世纪80年代中期建立起来的一种体外DNA扩增技术，其基本原理是酶促DNA合成反应，即在DNA模板、引物和脱氧核糖核酸存在下，经DNA聚合酶的作用，使DNA 链扩增延伸。该方法具有灵敏度高、特异性强、快速的特点，但其对实验环境的要求严格，实验成本较高，有时还有假阳性的现象出现。 1、仪器设备 超净工作台、PCR仪、电泳仪、凝胶成像分析系统、台式离心机、旋涡混悬器等。 2、实验试剂 选 ...

溶脲脲原体（Uu）和人型支原体（Mh）是常见的致病性泌尿道支原体。根据支原体不同生化反应特性和对特定物质的不同抵抗力可用于分离鉴定支原体。 【原理】标本分别接种于支原体鉴别培养液内。溶脲脲原体可产生脲酶，使分糖产氨，培养液呈碱性，指示剂由黄色变为粉红色。人型支原体能分解精氨酸产氮，使含有精氨酸肉汤培养液呈碱性而呈粉红色。 【材料】支原体分离鉴定培养液。 【标本采集】标本采集后应立即送检，室温保存 ...

【原理】 肺炎支原体快速检测卡可检测血清中的肺炎支原体lgM抗体。患者的血清样品分别加入两个测试孔内，当样品沿膜扩散时，分别加入3滴抗人lgM碱性磷酸酶复合物、3滴洗液和2滴底物，5分钟后观察结果。质控孔为质量控制，固定有人lgM，测试孔固定有肺炎支原体抗原。阳性反应结果为蓝色，阴性结果为无色。 【材料】 1、患者血清。 2、肺炎支原体lgM检测试剂盒，包括： （1）检测卡：单独锡纸包装，卡上固 ...

实验原理 所谓大肠菌群，是指在37℃培养24h 内能发酵乳糖产酸、产气的兼性厌氧的革蓝氏阴性无芽孢杆菌的总称。主要由肠杆菌科中四个属内的细菌组成，即埃希氏杆菌属、柠檬酸杆菌属、克雷伯氏菌属和肠杆菌属。 水的大肠菌群数是指100 mL水检样内含有的大肠菌群实际数值，以大肠菌群最近似数（MPN）表示。在正常情况下，肠道中主要有大肠菌群、粪链球菌和厌氧芽孢杆菌等多种细菌。这些细菌都可以随人畜排泄物进入 ...