免疫学技术

yangxiexun 最近做肿瘤细胞的stat3的免疫细胞化学，显色后老是成片的显色，有细胞的地方就有颜色，没细胞的就没有，细胞核的颜色色稍深点，显色的地方苏木素染不上颜色。做了个PBS阴性对照，这片细胞就是核蓝染的颜色。真不知怎么回事，做了一个月了还是这样，急啊thomas531 MARK 家族我们都快做烂了,你买CELL CIGANALLING 的,你会有一种中奖的感觉yangxiexun 可我做的不是你那个家族啊，且买的也是s ...

maggertu 想请教个问题，做stat3的免疫组化，是选用stat3抗体，还是p-stat3抗体？看到国外大部分文章都做p-stat3，而国内有些文章用stat3抗体，搞不明白zfyyzz00 stat3抗体只是检测总蛋白，看活性必须要做P-stat3。在转录水平就应该做EMSAmaggertu 谢谢，再请教一下，应该只有磷酸化的stat3才能进行核内转移，那么做stat3抗体，为什么做免疫组化也会有核内染色显示？还有， ...

foreye 我想免疫组化法检测NFkBp65，请问santa cruz的这类抗体好用么？sc109和sc372分别识别的是NFkb p65的N末端和C末端，这两个有区别么？是否都是激活后暴露出来的？（记得C端是结合DNA的位置）请战友前辈指教！谢谢谢谢！lishufang821 我最近也在做免疫组化法检测NFkBp65，买的中山的，现在正在摸浓度，赫赫多交流阿。QQ：493093683biofish 免疫组化抗体的选择问题：能用 ...

　二、缓冲液　　免疫细胞化学中应用的缓冲液种类较多，即使是同种缓冲液，其浓度、pH、离子强度等也常常不同。在此介绍几种最常用的缓冲液的配制。　　1．0.2mol/L(pH7.4)磷酸盐缓冲液（Phosphate Buffer, PB）　　试剂： NaH2PO4·2H2O　　Na2HPO4·12H2O　　配制方法：配制时，常先配制0.2mol/L的 NaH2PO4和0.2mol/L的Na2HPO4，两者按一定比例混合即成0.2mol/L的磷酸盐缓冲液（PB），根据需要可配制不 ...

常用的免疫酶染色方法又分为以下两种方法：-酶标抗体法直接法间接法-非标记抗体酶法酶桥法PAP法(1) 酶标抗体法通过共价键将酶结合在抗体上，制成酶标抗体，与标本进行反应后，再用酶组化法将酶显色，使之生成有色的不溶性产物或具有一定电子密度的颗粒，以供光镜和电镜观察。-优点：切片能长期保存、反复观察，适于镜下半定量分析。-缺点：酶与抗体形成的共价键，可损害抗体和酶的活性；易产生非特异染色。(1) 酶标抗体法——直接法将酶直接标 ...

最近关于BiTE双特异性抗体传出重大利好消息，FDA决定批准安进公司开发的治疗白血病的新型免疫疗法blinatumomab上市。这一决定耗时仅2个月，比其预计的审核期足足早了5个月之久。Blinatumomab是一种基于安进公司双特异性T细胞衔接系统（bispecific T cell engager, BiTE）开发而来的免疫疗法。这种疗法能够通过将肿瘤细胞上的CD19蛋白--一种肿瘤细胞通用抗原--呈递给CD3蛋白，进而 ...

原位末端凋亡法（Tunel）实验服务TUNEL实验技术简介：TUNE技术，即脱氧核苷酸末端转移酶(terminal deoxynucleotidyl transferase，TdT )介导的2dUTP 缺口末端标记(TdT-mediated dUTP nick end labeling，TUNEL ) 技术是目前原位检测细胞凋亡最敏感、快速、特异的新方法， 已广泛用于生物、医学研究领域。TdT-mediated dUTP nick end labeling (TUNEL)是一 ...

先说一下啥是CTL，CTL就是细胞毒性 T 细胞(cytotoxic T lymphocyte CTL)，一般应用于肿瘤研究领域。CTL 杀伤靶细胞主要有两种途径：即细胞裂解性杀伤和诱导细胞凋亡 ( Apoptosis)。前者指 CTL 分泌诸如穿孔素一类的介质损伤靶细胞膜；后者指 CTL 通过表面 FasL 与靶细胞表面的 Fas 结合，或者通过释放粒酶 B 至靶细胞后诱导靶细胞凋亡 (Apoptosis)。CTL 一般的实验步骤如下：1、制备效应细胞，靶细胞，用 RPMI-1640 培养液调至所 ...

底物范围较广，包括二氨基联苯胺(DAB)、氯萘酚和氨乙基咔唑等。二氨基联苯胺／金属盐DAB是辣根过氧化物酶最敏感、常用的底物。它产生强烈的棕色产物，在水和醇中不溶解。多数情况下，推荐在DAB中加入不同的金属离子。当加入金属盐如钴、镍至底物液中，辣根过氧化物酶可以更加敏感。此类反应产物呈暗蓝灰色至黑色，且在水及醇中稳定。DAB／金属盐染色应用的组织染色范围较广。 1．需要的溶液和特殊设备 DAB，0．05mol／LTris缓冲液( ...

利用家兔的多抗制备方法

优质的试剂，良好的仪器和正确的操作是保证ELISA检测结果准确可靠的必要条件。ELISA的操作因固相载体的形成不同而有所差异，国内医学检验一般均用板式点。本文将叙述板式ELISA各个操作步骤的注意要点，珠式、管式及磁性球ELSIA，国外试剂均与特殊仪器配合应用，两者均有详细的使用说明，严格遵照规定操作，必能得出准确的结果。

最近园子里有很多战友问有关在单抗制作中，如何利用ELISA筛选以及ELISA方法操作的注意事项，下面我先起个头吧，谈谈我的个人经验：）ELISA，全称酶联免疫吸附实验，主要利用的是抗原抗体特异性结合的特点，可分为直接法、间接法、双抗体夹心法、竞争法等。下面以间接法为例进行介绍：1、方阵ELISA。用途：①融合前后确定鼠血清中抗体效价；②拿到单抗腹水后，需要建立ELISA方法时首先要确定包被原及抗体的最佳工作浓度。经典 ...

前言昨天台湾地震,网络一直没有恢复,上不了MSN,也回复不了工作邮件.于是写点我对膜的一些看法,大家一起来讨论.硝酸纤维素膜又称为NC膜, 在胶体金试纸中用做C/T线的承载体,同时也是免疫反应的发生处.所以NC膜成为该试验中最重要的耗材,而由于其属于非标准器件,基本上每个项目开始阶段都会遇到如何选择合适的NC膜的问题.同时也存在是否要对NC膜进行后期处理及如何处理的讨论.一. NC膜的生产原理这个虽然看上去属于生产厂商 ...

★☆★★☆★★☆单克隆抗体技术相关总结与讨论专帖★☆★★☆★★☆一、前言1975年，Kohler和Milstein发现将小鼠骨髓瘤细胞和绵羊红细胞免疫的小鼠脾细胞进行融合，形成的杂交细胞既可产生抗体，又可无限增殖，从而创立了单克隆抗体杂交瘤技术。这一技术上的突破不仅为医学与生物学基础研究开创了新纪元，也为临床疾病的诊、防、治提供了新的工具。制备单克隆抗体包括动物免疫、细胞融合、选择杂交瘤、检测抗体、杂交瘤细胞的克隆化、冻存以及 ...

第一次作ELISA，真**的简单，偶暗想。第二次做，咿，结果差别这么大（同一份标本）怎么还有跳孔。第三次，决定做的认真一些，争取作到同一份标本，做两到三次，板间无差异，发觉很难。原来ELISA 也这么讲究。看看ELISA的注意事项吧：（一）加样　　在ELISA中除了包被外，一般需进行4－5次加样。在定性测定中有时不强调加样量的准确性，例如规定为加样一滴。此时应该使用相同口径的滴管，保持准确的加样姿势，使每滴液体的体积基本相同。在定量 ...

（交流）胶体金快速诊断试剂的市场情况略谈序胶体金快速诊断试剂是近年来的生物产业化最成功的产品之一，现在很多生物学者纷纷抛弃分子基因等艰涩的基础性理论研究，而转向该应用领域，利用自己实验室的设施人员开始开发胶体金快速诊断产品，为自己在创业初期淘得第一桶金。我在该行业工作了比较长的一段时间，和很多的同行都有过接触，在此写一点自己对该行业的感受。个人观点不对之处，希望ＤＸ指正。前言目前生物领域内基本上是以研究为目 ...

胶体金试纸行业趋向成熟与饱和有幸在胶体金行业从业数年, 经历整个行业从高速到平稳发展的全过程. 曲终戏末, 让我们再次回顾这些年来在这个行业发生的疯狂增长, 同时预测后市的发展走向.背景回顾80年代到90年代初, 胶体金标记技术从早期的金电镜应用转移到渗滤免疫诊断, 在这个时期出现了早孕, 传染等多个系列的渗滤检测试剂盒, 并逐步实现了商品化. 渗滤盒在临检领域需求旺盛.90年代初到中期, 胶体金标记免疫层析诊断技术开始进入商业化应用, 在胶体金发展史 ...

很多公司开展了荧光胶乳免疫层析做定量分析及胶乳增强免疫比浊分析项目，关注胶乳标记技术的技术人员越来越多。本人总结了部分胶乳微球标记技术相关主题帖，并加以分类，以便朋友们查阅，希望朋友们继续完善或分享经验。1. 胶乳大小选择【求助】免疫胶乳或免疫颗粒（聚苯乙烯）的粒径http://immunotech.dxy.cn/bbs/topic/12699817?keywords=%E8%83%B6%E4%B9%B3%E5%A4%A7%E5%B ...

免疫荧光技术直接免疫荧光法测抗原基本原理　　将荧光素标记在相应的抗体上，直接与相应抗原反应。其优点是方法简便、特异性高，非特异性荧光染色少。缺点是敏感性偏低；而且每检查一种抗原就需要制备一种荧光抗体。此法常用于细菌、病毒等微生物的快速检查和肾炎活检、皮肤活检的免疫病理检查。试剂与仪器l 磷酸盐缓冲盐水（PBS）：0.01mol/L，pH7.4l 荧光标记的抗体溶液：以0.01mol/L，pH7.4的PBS进行稀释l 缓冲甘油：分析纯无荧 ...

抗体工程：抗体研究领域的进展大致可分为3个阶段：（1）以1890年Behring发现白喉抗毒素为代表，其特点是用抗原免疫动物来获得多克隆抗体。（2）以1975年Kohler创建杂交瘤技术制备单克隆抗体为代表。（3）以1994年Winter以基因工程方法制备抗体为代表。这是抗体研究领域出现的又一次技术革命，它不用人工免疫动物和细胞融合技术，完全用基因工程技术制备人源性抗体，而且还能利用基因转移和表达技术，通过细菌发 ...