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        Annexin V凋亡流式双染与Tunel凋亡免疫组化案例介绍

        嘉美纽诺

        7339

        原位末端凋亡法(Tunel)实验服务

        TUNEL实验技术简介:TUNE技术,即脱氧核苷酸末端转移酶(terminal deoxynucleotidyl transferase,TdT )介导的2dUTP 缺口末端标记(TdT-mediated dUTP nick end labeling,TUNEL ) 技术是目前原位检测细胞凋亡最敏感、快速、特异的新方法, 已广泛用于生物、医学研究领域。

        TdT-mediated dUTP nick end labeling (TUNEL)是一种用来检测细胞凋亡(apoptosis)的分析方法。细胞凋亡有一项重要的特征为细胞内的DNA会碎裂成片段(DNA fragmentation),TUNEL可以有效的去探测DNA片段的产生,所以可以传达细胞凋亡的讯息。

        TdT为terminal deoxynucleotidyl transferase,此种酵素可以在没有DNA模板的情形下,连结核甘酸到DNA的3'-OH处。1992年,以色列科学家Gavrieli等人将TdT引为为标定DNA片段的一个酵素,自此衍生出TUNEL此项技术。

        TUNEL的好处是可以在细胞凋亡发生的早期,即可侦测到DNA片段的产生,并且可以直接使用在组织切片上,观察细胞凋亡发生的位置。所以TUNEL目前为广泛接受与使用的一种细胞凋亡的分析方法。

        实验服务注意事项

        1. 实验委托者提供实验分组情况及实验背景资料,有具体要求请事先说明;

        2. 实验委托者可提供组织块(以中性福尔马林或多聚甲醛固定,如组织块极小请事先说明)、蜡块或切片(使用免疫组化专用切片,以避免实验过程中掉片);

        3. TUNEL染色完毕后,照相1-2张/每切片,如需要图片分析请事先说明;

        4. TUNEL试剂盒的购买:事先咨询嘉美生物,明确是否有该抗体可使用,如无则由双方协商公司代购。

        标本收集、保存、运输

        1. 组织标本:事先应以10%的福尔马林或4%的多聚甲醛固定(后者同时适合免疫荧光检测);

        2. 细胞检测:由实验室负责准备检测样本,实验委托者提供细胞或实验室负责提供细胞;

        3. 样本运输:样本密封完毕,建议以塑料瓶装好标本寄送以免路途损坏;如寄送切片则选择纸盒包装完好,周围加以泡沫或纸巾填塞以免路途损坏,常温寄送即可。

        Annexin V-FITC/PI细胞凋亡双染流式检测实验服务

        原理:在正常细胞中,磷脂酰丝氨酸只分布在细胞膜脂质双层的内侧,细胞发生凋亡最早期,膜磷脂酰丝氨酸(PS)由脂膜内侧翻向外侧,这一变化早于细胞皱缩、染色质浓缩、DNA片断化和细胞膜的通透性增加等凋亡现象。

        Annexin V是一种磷脂结合蛋白,与磷脂酰丝氨酸有高度亲和力,故可通过细胞外侧暴露的磷脂酰丝氨酸与凋亡早期细胞的胞膜结合。因此Annexin V被作为检测细胞早期凋亡的灵敏指标之一。

        碘化丙啶(Propidium Iodide, PI)是一种核酸染料,它不能透过完整的细胞膜,但凋亡中晚期的细胞和死细胞由于细胞膜通透性的增加,PI能够透过细胞膜而使细胞核染红。因此将Annexin V与PI匹配使用,就可以将处于不同凋亡时期的细胞区分开来。

        案例介绍: 抗肿瘤药物细胞干预培养以及细胞凋亡检测

        细胞:人肺癌A549细胞

        药物:a、b、c三种药物干预24h

        实验分组:

        A组:细胞中加入药物a,培养24h后,细胞凋亡Annexin V/PI双染流式检测;

        B组:细胞加入药物b,培养24h后,细胞凋亡Annexin V/PI双染流式检测;

        C组:细胞加入药物c,培养24h后,细胞凋亡Annexin V/PI双染流式检测;

        D组:细胞正常培养,培养24h后,细胞凋亡Annexin V/PI双染流式检测;

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