免疫学技术

一．开机程序1．检查稳压器电源，打开电源，稳定5分钟。2．打开储液箱，倒掉废液 并在废液桶中加入400ml漂白水原液。打开压力阀，取出鞘液桶，将鞘液桶加至4/5满（一般可用三蒸水，做分选必须用PBS或FACSFlow），合上压力阀。确实盖紧桶盖，检查所有管路是否妥善安置。3．将FACSCalibur开关打开，此时仪器功能控制钮的显示应是STANDBY，预热5－1 ...

做免疫学特别是肿瘤学实验，总免不了要测淋巴细胞或其他细胞对肿瘤细胞的杀伤，老外最常用的是Cr51放射实验，但这个方法在国内的不少地方都不能做，而MTT这个方法又太老了，而且也不准确，那么替代方法就用流式细胞术，又方便，又准确，这也是偶参照老外的方法吧。1　计数靶细胞，并加入CFSE，使CFSE终浓度达到2uM37度30分钟。2　拿出后，1000rpm5min可隐约看到细胞染成黄色，PBS洗三次3　 ...

早在1986年Mosmann等依据小鼠分泌的细胞因子谱不同首次将Th细胞分为Th1和Th2两个功能不同的独立亚群。Th1细胞主要分泌IL-2、、IL-12、IFN-γ和TNF- α等细胞因子，介导与细胞毒和局部炎症有关的免疫应答，参与细胞免疫及迟发型超敏反应。Th2细胞主要分泌IL-4、IL-5、 IL-6、IL-10和IL13等细胞因子，其主要功能为刺激B细胞增殖并产生抗 ...

乳酸脱氢酶（LDH）测定法1 原理 活细胞的胞浆内含有LDH。正常情况下，LDH不能透过细胞膜，当细胞受到NK细胞的杀伤后，LDH释放到细胞外。LDH 可使乳酸锂脱氢，进而使NAD还原成NADH，后者再经递氢体吩嗪二甲酯硫酸盐（PMS）还原碘硝基氯化四氮唑（INT），INT 接受H＋被还原成紫红色甲月赞 类化合物。在酶标仪上用490nm比色测定。2 ...

同位素3H-TdR测定法1 原理 将用同位素3H-TdR标记的靶细胞与淋巴细胞共同培养时，靶细胞可被NK细胞杀伤。同位素便从被杀伤的靶细胞中释放出来，其释放的量与NK细胞活性成正比。通过测定靶细胞3H-TdR的释放率即可反应NK细胞的活性。2 仪器和材料 液体闪烁仪、多头细胞取集器、二氧化碳培养箱、3H-TdR、RPMI164 ...

二硝基氟苯诱导小鼠DTH（耳肿胀法）1 原理 二硝基氟苯（DNFB）是一种半抗原，将其稀释液涂抹腹壁皮肤后，与皮肤蛋白结合成完全抗原，由此刺激 T 淋巴细胞增殖成致敏淋巴细胞。4～7天 后再将其涂抹于耳部，使局部产生迟发型变态反应。一般在抗原攻击后24～48h达高峰，故于此时测定其肿胀程度。2 材料 DNFB、丙酮、麻油、硫化 ...

在基因功能研究过程中，常常使用的一种方法就是将目的基因转到靶细胞内进行瞬时表达（transient expression），以流式细胞仪检测细胞周期的变化，观察转基因对细胞增殖的影响。由于各种转基因方法的不同，转基因的效率也不同，往往是仅有一部分细胞可以表达目的基因，没有转基因的细胞将影响检测的结果。如何将已经转基因的细胞同未转基因的细胞区分开来进行检测，是一个技术上的难点。常用的一种方法就是将表 ...

凋亡都比较多，但遗憾的是与G1峰分得不是很开，因此，Modfit分析的时候，会根据您的结果用统计学原理将它们分为Apo和G1，但这样可能掩盖真正的结果！建议做PI染色的时候，在PBS洗两次后，加入PC buffer，这是一种轻破膜剂，可以使断裂成小片断的DNA出细胞而降低其在FL2-Ad上的值，这样就容易区分G1和APO了。 对照很好，特别是 ...

在酶标记的溶液中，出现的是各种交联物的混合物，有酶-抗体、酶-抗体-酶、抗体-抗体、酶-酶，甚至还有游离的酶和抗体。 在这中间，除了抗体-酶和酶-抗体-酶外，其它都应该给予除去。 1.50%饱和硫酸铵沉淀法。 此法只能除去游离的酶及酶-酶聚合体。而不能除去其它不需要者。但是此法对酶标抗体的损耗少。&nb ...

Q:我现在做肿瘤细胞内ROS水平测定，使用流式细胞仪测DCF荧光强度，应该用什么做对照呢？就是这种肿瘤细胞的正常细胞做对照吗？可不可以用任意的正常组织细胞做对照呢？或者只用PBS加DCFH-DA作为空白对照呢？ A:据我的经验，DCFH-DA本身没有荧光，可穿过细胞膜进入细胞，在胞内转化生成DCFH。在活性氧作用下，DCFH被氧化生成荧光物质DCF，荧光强度与细胞内活性氧水平成正比。你是要测定细胞 ...

活性氧检测试剂盒(Reactive oxygen species assay kit)是一种利用荧光探针 DCFH-DA进行活性氧检测的试剂盒。DCFH- DA本身没有荧光，可以自由穿过细胞膜，进入细胞内后，可以被细胞内的酯酶水解生成DCFH。而 DCFH不能通透细胞膜，从而使 探针很容易被装载到细胞内。细胞内的活性氧可以氧化无荧光的DCFH生成有荧光的DCF。检测DCF的荧光就可以知道细胞内活性 ...

Q:我想用流式细胞术测血浆中的内皮源性微粒，已购买荧光标记的抗体（PE ANTI -CD144)已文献证实这种微粒表面表达CD144，且具有特异性。但我们检测了两次均无特异性，不知道是否标本处理有问题。 A:EMP: CD31、CD42 Q:抗体已经买了，我们还是想用CD144做，据说CD144特异标记内皮源性微粒（EMP).你们有过用CD31.CD42标记的经验吗？你的标本是怎麽处理的？对流式细 ...

各种血液细胞及血管内皮细胞受到刺激而活化或发生凋亡后，细胞膜磷脂酰丝氨酸由胞膜内层进入外层，以出芽方式形成小泡状结构而脱落，形成所谓的“微粒(microparticle，MP)”。正常人体血液中即存在少量MP，而在许多疾病中MP水平明显升高。MP具有促进血液凝固反应发生与血栓形成等多种重要生物学活性。越来越多的研究提示，检测血液MP水平与性质有助于监测病情、指导治疗与疗效判 ...

Q:构建了载体表达目的基因+GFP的融合蛋白(用的是PEGFP-N1)转染48小时后处理细胞百分之七十乙醇固定过夜PI单染上流式测周期!由于转染效率太低通过了流式设门分别圈出了阴性和阳性细胞再分别测其CELL周期变化!!!!结果如附图!!有几个问题想和大家一起讨论一下:1在一些SCI文献中报道通过MTT法此目的基因表达促进一些细胞(非我用的细胞系我用的转染CELL之前没有报道!)增殖但是从周期图来 ...

Q：石蜡切片能用于做流式吗 A：石蜡包埋组织流式细胞仪DNA含量分析是石蜡包埋组织切片与流式细胞术（flow cytometry，FCM）结合使用来测量DNA含量及倍体分析，这一结合是流式细胞仪在临床应用中，特别是在肿瘤研究方面开拓了新的研究途径。FCM是激光、电子和电子计算机、流体喷射技术的综合发展应用，是快速定量分析细胞的技术，要求被检细胞呈悬浮状态。目前已可测量细胞的大小、体积、DNA含量、 ...

请帮忙分析一下第一张是未转染的第12代，第二章是转染后的第22代。能说明转染后的细胞增值能力强了吗，怎么看出来的。 第一张图：增值率S（合成期）＋G2/M（合成后期/分裂期）：21.7％第二张图：增值率S（合成期）＋G2/M（合成后期/分裂期）：19.6％据此分析两者的增值没有明显的差别。虽然第二张图比第一张图的S期有所增高，但G2期下降了。细胞周期是基于细胞处于不同分裂时期具有不同的DNA含量而 ...

Q：准备用FITC，PE和APC进行三标，检测三标细胞占待检测细胞的百分比。预实验摸抗体浓度时，用单标管与相应的同型对照管比较，在二维散点图上，发现部分指标除在检测通道上偏移，在无关通道上散点也有偏移，我想这就应该是补偿需要做的事情了吧。根据预实验的结果，我发现荧光的部分干扰现象，如PE检测影响APC和FITC，FITC影响APC，而APC不影响PE和FITC等。我的问题：1，很奇怪的是FITC和 ...

血小板在各种诱导剂作用下释放其颗粒内容物，产生生物学效应，在初期止血过程中发生粘附-变形-释放-聚集等反应，这些血小板的基本反应，统称为血小板活化反应。血小板活化的检测对血小板相关疾病的诊断有重要价值。然而，检测的方法常常是有争议的，通常是由于方法本身不完善或应用不当导致医源性血小板激活，影响临床诊断的价值。这就要求建立一种灵敏、精确、快速、简便，最好可用于临床常规检测血小板活化的方法。近几年来， ...

Fluo-3-Am为一新型的高度特异性Ca2+荧光指示剂，可以灵敏地反映细胞内游离钙离子浓度的变化， Fluo-3-Am进入细胞后经非特异性酯酶脱去Am酯，成为脂溶的Fluo-3留在细胞内，当Fluo-3与细胞内游离 钙结合后，其荧光强度是Fluo-3本身的40倍以上，当用480nm波长激发时，其荧光强度与游离钙离子 浓度成正比.具体如下，① 钙荧光探针负载；取细胞悬液，加Fluo-3-Am至 ...

钙离子是机体的重要元素，同时作为细胞内第二信使通过与钙调蛋白（Calmodulin，CaM）结合激活多种蛋白激酶（如腺苷酸环化酶、磷酸二酯酶、钙调蛋白激酶等）及诸多蛋白水解酶和核酸酶，从而参与包括细胞代谢、细胞周期等多种细胞功能的调节，在细胞的许多生命活动中担当着重要的角色。因此，钙离子测定在医学实验研究中有着重要意义。 　　钙离子测定技术得益于两种近代实验技术，一是钙激活蛋白及荧光指示剂（或称荧 ...