免疫学技术

半抗原是指本身无免疫原性，只具有反应原性的物质。半抗原物质多数为低分子量的化学，例如多糖、多肽、甾体激素、脂肪胺、类脂质、核酸、某些药物（包括抗生素）以及其他化学物品等。半抗原不能直接用作免疫原，只有把这些半抗原和大分子物质结合后，才具有免疫原性，刺激机体产生抗体或致敏淋巴细胞。这种经过人工修饰的半抗原称之为人工抗原，用于偶联半抗原的大分子物质称为载体。 一、常用的载体 1、蛋白质类 蛋白质是一 ...

蛋白质、糖蛋白、脂蛋白、酶类、补体、脂多糖、细菌外毒素和核酸等均为可溶性抗原，它们有相当部分来源于组织和细胞，成分复杂。制备这类免疫原时，首先须将组织和细胞破碎，然后再从组织和细胞匀浆中提取目的蛋白或其他抗原，提纯的抗原需鉴定后才能用做免疫原。 一、组织匀浆的制备 用于制备免疫原的材料必须是新鲜或低温保存的。材料获得后立即去除包膜或结缔组织，脏器应进行灌洗，去除血管内残留的血液，用含0.5g/L ...

获得稳定的杂交瘤细胞系后，即可根据需要大量生产单抗，以用于不同目的。 一、单抗的大规模制备 目前大量制备单抗的方法主要有两大系统，一是动物体内生产法，这是国内外实验室所广泛采用；另一是体外培养法。 1、动物体内生产单抗的方法 迄今为止，通常情况下均采用动物体内生产单抗的方法，鉴于绝大多数动物用杂交瘤均由BALB/c小鼠的骨髓瘤细胞与同品系的脾细胞融合而得，因此使用的动物当然首选BALB/c小鼠。本 ...

一、腹水型单抗的纯化 在单抗纯化之前，一般均需对腹水进行预处理，目的是为了进一步除去细胞及其残渣、小颗粒物质、以及脂肪滴等。常用的方法有二氧化硅吸附法和过滤离心法，以前者处理效果为佳，而且操作简便。 1、二氧化硅吸附法 新鲜采集的腹水（或冻存的腹水），2000r/min 15分钟，除去细胞成分（或冻存过程中形成的固体物质）等；取上层清亮的腹水，等量加入PH7.2巴比妥缓冲盐水（VBS；0.004m ...

目前动物用单抗，在动物疫病诊断和检疫、妊娠检测、性别鉴定等方面有广泛的应用，大多以诊断试剂（盒）的形式提供，其中核心试剂为标记的单抗。下面将介绍最常用的几种标记技术。 一、酶标记 1、辣根过氧化物酶（HRP）标记 辣根过氧化物酶（HRP）标记单抗和多克隆抗体的常用方法是过碘酸钠法。其原理是HRP的糖基用过碘酸钠氧化成醛基，加入抗体IgG后该醛基与IgG氨基结合，形成Schiff氏碱。为了防止HRP ...

对错误信号的处理和检测操作的优化的系统化处理方法的导言。 在近些年来，体外诊断产业（IVD）增加了巨大的投入来开发基于膜技术的快速检测试纸条。类似的的检测已经应用在临床和非临床领域。在早期的论文中 已有一篇是关于这些方法得到广泛应用的综述。 虽然基于膜技术的快速检测试纸条是相当简单的，但是此方法的实行的效果 依赖于大量的关键参数，在《体外诊断技术》的早期论文中已经探讨了金标液（gold conju ...

随着分子诊断学的不断发展，有人认为膜将逐渐失宠。然而，事实绝非如此。 在体外诊断(IVD)的发展过程中，膜材料和微孔材料一直长期占据中心地位。硝酸纤维、尼龙等材料制作成膜，这些膜的使用促进了以抗原抗体相互作用为基础的免疫检测的发展，并使这些测定获得了今天所拥有的市场优势地位。膜的使用也使免疫诊断学向侧流照护点检验的改进成为可能，比如今天人们所熟悉的家用孕检工具形式。 但是，随着分子诊断学逐渐商业化 ...

在以膜为基础的体外诊断试剂中，亲水性粘合剂能够提高测试性能，同时也能维持生产效率。 William G. Meathrel 博士，医药研发团队负责人；Herbert M. Hand Sr. ，医药产品研发科学家；Li-Hung Su医药产品研发化学家，他们都是胶粘剂研发中心（Glen Rock PA）的成员。作者特别感谢David Schaefer和Towson大学（Towson MD）的物理、天 ...

健康保健的大环境在各个领域不断变化的同时，大众对于技术革新的要求却依然很迫切。IVD产业对于健康保健革新的贡献无论是从他们的实践方面还是从用户的反映方面来看都是独一无二的。同时，他们通常不能得到认可，一部分原因是由于他们与临床实验室的密切联系。生物信息、蛋白质组学、基因功能以及网络数据的发展是革新的一部分，而这些革新有望成为患者护理以及以结果为依据的医学的影响指标。 Donal Qu ...

生产企业必须能够克服大量的技术难题才能制备出能应用于诊断领域的免疫金复合物。 免疫金标记技术是一种将胶体金颗粒与包括抗原、抗体在内的许多蛋白质标记形成免疫金复合物的技术。虽然这种免疫金标记技术呈 现出多种多样的应用方式，但目前主要应用是以快速检测试纸盒的形 式使用于疾病的诊断和监测。1 IVD 检测系统中，蛋白与胶 体金（上图）联接制备成的 免疫金结合物是指示试剂。 在过去的十年里， ...

理解了胶体金生产中的涉及到的一些关键工程学问题，就能优化金标成份（译者注：指胶体金）的品质和稳定性。 早在二十世纪初，人们就已经可用化学法生产出不到10nm的胶体金溶胶颗粒，然而直到1971年Faulk和Taylor发明免疫金染色方法后，胶体金这种无机胶体才用于蛋白标记。从此，借助电子显微镜，用纳米金颗粒对目标分子，特别是蛋白分子的标记技术彻底革新了细胞和组织成分的显影方法。银增强方法又进一步将金 ...

一、实验目的 1. 初步掌握从血清中提取纯化IgG的方法步骤。 2. 了解辛酸-硫酸铵法纯化IgG 的原理。 二、实验原理 辛酸-硫酸铵法分两步进行。第一步用辛酸沉淀杂蛋白，辛酸为短链脂肪酸，在酸性条件下可沉淀血清或腹水中的白蛋白或其他非Ig蛋白质；第二步利用硫酸铵盐析将Ig沉淀下来，操作步骤如图3-10所示。经SDS-PAGE电泳检测能得到电泳纯度较高的Ig。 三、仪器、原料和试剂 仪器　　磁力 ...

利用酶标记抗原（抗体）和待测抗体（抗原）在电场中向一定方向移动，在比例适当的地方形成沉淀线，通过酶作用底物而显色，指示沉淀线的存在。该法的敏感性大大高于对流免疫电泳。本试验以检测血吸虫抗体为例。

将放射性元素标记的抗体（或抗原）与相应的抗原（或抗体）沉淀时，沉淀线通过自显影而证实。所谓自显影，就是通过复合物中的标记同位素在蜕变过程中放出的射线，作用于感光材料的卤化银晶体而产生潜影，再经过显影把“像”显示出来。这样，能检出肉眼看不见的沉淀线，从而提高反应的敏感性，这种方法可应用于凝胶中的所有反应。

定量的抗原加入到含有一定量的相应抗体的琼脂糖凝胶中，在电场作用下，引起抗原抗体的迁移和相互反应，当比例合适时形成肉眼可见的沉淀峰，由于电泳继续进行，样品孔不断有抗原移向抗原抗体复合物的沉淀峰，因抗原过剩使沉淀溶解而在前面又形成新的抗原抗体复合物的沉淀峰。如此反复向前，直到再无游离抗原而反应终止，形成上行火箭状的沉淀峰，其沉淀峰高度和抗原的浓度成正比，与同样条件下的已知浓度的抗原血清比较，即可求得待测血清的抗原含量。

目的 研制成镧系元素发光时间分辨荧光分析中的关键试剂。方法 用过碘酸钠法研制成辣根过氧化物酶标记链霉亲和素,用戊二醛二步法研制成碱性磷酸酶标记链霉亲和素和用化学合成法研制成 5 - 氟水杨酸磷酸酯等关键试剂。结果 HRP 标记 SA 总蛋白回收率为29.8% ,纯度为 97% 。ALP 标记 SA 的总蛋白回收率为 56% ,纯度为98% ,分子量为159kD,其中 ALP 分子量为 94kD, 生物活性良好。5 - 氟水杨酸磷酸酯, 测得熔点为 157℃ ～159℃、纯度为 99.43% ～100% 、红外吸收光谱、紫外吸收光谱及核磁共振谱等特性鉴定与文献记载一致。结论 研制成的各种关键试剂质量良好,已成功地应用于科研中。

基于膜的检测试剂研发人员应该严格考虑影响蛋白质在硝酸纤维素膜上结合众多因素，其中包括原材料的固有属性和处理过程等。 随着胶体金标记技术的发展、研发人员对胶体金快速检测技术深入研究，市场上基于膜的快速免疫层析检测产品的种类迅速增多。 虽然免疫层析产品的包装设计种类繁多，实际上目前主流的商品化检测试剂盒主要下面两种形式。最常用的检测形式为侧向层析 或者层析定量，这种检测形式通常应用于诊所或者由直销客户 ...

在新型免疫诊断产品的开发阶段，为保持蛋白质试剂在干燥和溶解状态下稳定而进行的实验至关重要。 对于IVD厂家来说，保持产品的质量和可信度是至关重要的。为确保他们生产出高质量的产品，公司实行严格的质量保证体系， 关键步骤符合国际质量体系标准，如原材料采购、生产、软件验证。 另一个同样重要的任务是确保在产品生产出来后一段长时间内，最终用户都能享受到高质量产品。公司为保证产品质量，在运输、仓储和产品使用过 ...

免疫诊断产品开发的基础——蛋白质，是一种生物大分子，它根据希腊神话中一位多变的艺术形象——Proteus（希腊海神）而命名。如同他们共通的名字所展示的那样，蛋白质具有改变自身构型的能力，不过这也导致了其活性的丧失。因此，例如抗体、凝集素、酶等蛋白质试剂所具有的特异性结合、催化反应功能，对在预处理、贮存、使用加工等操作过程中存在的潜在有害影响非常敏感。 ...

选择适当的胶粘层有助于厂商改善基于膜的诊断产品的加工处理并延长该产品的效期。 用于层析诊断检测的材料有两个共同特性：多孔渗水并有相关脆性。为弥补该类材料的物理强度的不足，该类材料通常会依靠胶粘剂的作用装配到特定支架上（见图1）。以前，产品开发者用过几乎所有种类的胶粘剂来装配这些物质，包括热固性胶粘剂。 现在，随着胶粘剂技术的发展，一系列适用于层析检测应用领域的胶粘剂已被制造出来。通过选择一种能将应 ...