免疫学技术

肽库的筛选方法 噬菌体肽库筛选总的指导思想是利用有些生物大分子之间存在着不同大小的亲和力，以生物大分子为靶目标，通过直接或多轮筛选可以从肽库中筛选得到相应的且具有特定亲和力的结合肽。噬菌体肽库筛选方法一般采用生物学筛选技术，又称为生物淘洗(biopanning)，即利用生物操作方法从噬菌体随机肽库中筛选出所需的噬菌体肽。筛选方法可以因筛选靶目标的性质、筛选的规模而不同，并且与操作人员的习惯 ...

编码15肽随机DNA片段的克隆 (1)M13KE载体的大量酶切 双酶切反应体系： M13KE载体(1ug) 2 ul H2O 32 ul 10XNE Buffer 3 4 ul EagI(10 U／ul) 1 ul Acc65 1(

以蛋白分子为靶目标的噬菌体肽库模拟抗原的筛选 (1)将单克隆抗体用包被液CBS稀释，加入酶标板，一般抗体包被浓度为10ug/孔，包被体积为100ul/孔，稍加晃动使孔表面变湿，置于4℃下包被过夜(或37℃慢摇孵育2h)。第二天倾去板中包被液，每孔加入200ul/孔洗板液(PBST05)，静置5rain，甩去洗板液，于无菌干净的滤纸上拍打，以尽量除去剩余的液体，重复洗5次，以下的洗板操作都与 ...

以蛋白分子为靶目标噬菌体肽的鉴定 (1)ELISA鉴定：用牙签轻触筛选到的并单克隆化的含噬菌体单菌落，将其投入已放有1m1 B-Kanl00-Tet40液体培养基的15ml试管中，37℃震荡(270r/rain)培养24h。离心除去菌体，得到上清液，即单克隆的噬菌体，可直接用于鉴定。将单克隆抗体用CBS稀释成一定浓度，以100ul/孔包被96孔酶标板，于4℃下包被过夜(或37℃孵育2 h) ...

以蛋白分子为靶目标的噬菌体肽库筛选的常规实验方法 (1)大肠杆菌KglKan的活化：用无菌接种针从菌种甘油保存液中蘸取少量菌液，划线接种于LB-Kan平板上，翻转平板，于37℃培养过夜；次日培养平板用石蜡膜封口后，在4℃中保存不超过1个月。 (2)大肠杆菌K91Kan感受态细胞的制备：取lmlLB液体培养基于15m1指管中，加入1ulKan(100ug/m1)，从培养平板中挑选大肠 ...

以细胞为靶目标的噬菌体肽筛选结果鉴定 (1)用细胞ELISA鉴定方法：分别将体外培养的肿瘤细胞和正常细胞进行消化、记数后制成相同浓度的细胞悬液。96孔细胞培养板中每孔加100弘1细胞悬浊液，使培养板上、下两个孔分别对应相同浓度的肿瘤细胞和正常肝细胞。37℃细胞培养箱中过夜，使细胞贴壁。每孔加入100ul 3％多聚甲醛固定，1h后用PBST―05、PBST―5分别洗板3次。每孔加封阻液(PB ...

体内噬菌体展示技术筛选肝癌组织特异性黏附肽材料与方法 旨在利用体内噬菌体展示技术，筛选与肝癌组织或细胞特异性亲和的短肽。一方面为临床研究肝癌的发生发展机制提供新的线索；另一方面，也可作为某种诊断、治疗制剂来影响和抑制肝癌细胞的繁殖和转移，减少肿瘤早期诊断的盲目性和治疗过程中抗癌药物对人体自身的损伤。最后由小分子多肽取代传统免疫毒素中抗体成分，大大降低传统单克隆抗体及其片段所造成的免疫原性， ...

体内噬菌体展示技术筛选肝癌组织特异性黏附肽结果1．荷瘤裸鼠肝癌特异性结合短肽的体内筛选 我们把原肽库中噬菌体注入荷瘤小鼠体内，经血液循环，回收肝癌组织中的噬菌体，扩增后作为第二轮筛选的起始物。用1011转导单位启动下一轮筛选过程，共筛选3次。筛选结果用柱形图表示。 三轮筛选中组织噬菌体回收率2．免疫组织化学结果 在第一轮筛选的荷瘤裸鼠各组织中，瘤、肝、脑3种组织出现阳性反应；第二轮筛选 ...

新型疫苗的设计与研制 疫苗的概念是200年前由英国医生爱德华・琴纳(EdwardJenner)首先提出。近代免疫学奠基人巴斯德(pastor)发明了第一种鸡细菌减毒霍乱疫苗，提出为动物接种相同的细菌可以阻止该菌感染的免疫接种原理，从而奠定了免疫理论基础。1949年恩德斯(Enders)发明了组织培养技术，为病毒类疫苗的研究与发明开辟了新的途径。近100年来，疫苗的开发和应用已成为医学科学的 ...

联合疫苗 联合疫苗即数种疫苗抗原联合制成的疫苗。联合疫苗的主要目的是减少注射次数的同时预防更多的疾病。其意义在于提高疫苗覆盖率和接种率，减少多次注射所带来的痛苦，减少疫苗管理上的困难，降低接种和管理费用等。但是必须考虑在联合疫苗中各抗原组分的可溶性、物理兼容性和抗原稳定性，联合疫苗必须避免一些潜在的问题如抗原竞争、表达抑制、不良反应加重等。目前常用的联合疫苗有白喉、破伤风、全菌体或无细胞百 ...

疫苗的分类(一)按疫苗原分类 1．减毒活疫苗 此类疫苗是将病原微生物(细菌或病毒)在人工训育的条件下，促使产生定向变异，使其极大程度地丧失致病性，但仍保留一定的剩余毒力、免疫原性和繁衍能力，如麻疹、风疹、腮腺炎疫苗等。 2，细菌或病毒灭活疫苗 细菌或病毒灭活疫苗是细菌、病毒或立克次氏体的培养物，经化学或物理方法灭活制成，便之完全丧失对原来靶器官的致病力，而仍保存相应抗原的 ...

结合现代技术研制的新型疫苗 1．基因工程疫苗 基因工程疫苗是用基因工程方法或分子克隆技术分离出病原的保护型抗原基因，将其转入原核或真核系统，由此表达出该病原的保护型抗原，制成疫苗，或将病原的毒力相关基因删除，使其成为不带毒力相关基因的基因缺失苗，如多肽或亚单位疫苗、颗粒载体疫苗、病毒活载体疫苗、细菌活载体疫苗、基因重配疫苗、基因缺失疫苗等。大量的候选疫苗同时预防的疾病因子包括包桑螺旋 ...

疫苗的主要成分 疫苗的基本成分包括抗原、佐剂、防腐剂、稳定剂、灭活剂及其他活性成分。疫苗抗原成分的免疫功能、免疫原性应该长期保持并有很好的稳定性，疫苗及其配伍剂在使用后不良反应越少越好。 1．抗原 抗原是疫苗最主要的有效活性组分，是决定疫苗的特异免疫原性物质。抗原应能有效地激发机体的免疫反应，包括体液免疫或(和)细胞免疫，产生保护性抗体或致敏淋巴细胞，最后产生抗特异性抗原的保 ...

新型疫苗设计的技术要求 疫苗设计是疫苗策略的基础，其目的在于通过对病原体及免疫系统的深入研究，以确定体液免疫或细胞免疫为主的方针，并辅之以细胞因子及合理有效的疫苗输送系统，从而达到最佳、最理想的疫苗设计。通常的疫苗策略应考虑以下几个方面。(一)抗原的选择原则 一个候选疫苗的选择是疫苗设计中最为关键的步骤，对所要研制疫苗的病原体的生物学结构、基因结构、生物化学、生物学技术性状、抗原特征 ...

核酸疫苗的免疫接种途径 DNA疫苗接种后所诱导免疫保护力的强弱取决于该疫苗的细胞转染效率以及在被转染细胞中的表达水平和维持时间。DNA疫苗接种的靶组织主要包括肌肉、皮肤、皮下组织和黏膜等。 (1)肌内注射：作为DNA疫苗接种的主要靶组织，肌肉组织具有血流丰富、转基因容量大、摄取外源DNA能力强、所表达的特异性疫苗组分可随血流播散等优点。同时，肌肉组织的肌纤维是有丝分裂后细胞，不会使 ...

核酸疫苗目的蛋白基因序列 1990年，Wolff等将纯化的DNA直接注射到小鼠肌肉后检测到目的基因的表达产物，此后Ulmer将带流感病毒的核蛋白基因质粒DNA注射到小鼠骨骼肌后，小鼠产生了良好的体液及细胞免疫反应，并对流感病毒有了一定的保护力。同年，Wang也报道了HIV的糖蛋白gpl60基因直接注射小鼠和非人灵长类，产生了免疫反应。这一系列结果引起各国学者的广泛关注。核酸免疫是将编码抗原 ...

核酸疫苗载体及表达调控元件 基因免疫载体常用真核细胞表达质粒，如能在哺乳动物细胞中高效表达真核启动子的质粒，包括长末端重复序列(LTR)、猴空泡病毒(SV40)及巨细胞病毒(CMV)等启动子等。基因免疫载体由3个部分组成：①目的蛋白基因编码序列；②细菌质粒骨架元件，包括复制起点、多克隆位点和选择标记；③转录表达调控元件，包括真核启动子／增强子、转录终止／多聚腺苷酸化信号序列。表达抗原蛋白能 ...

多肽疫苗 多肽疫苗具有抗病毒、抗肿瘤、抗细菌、抗寄生虫感染功能。由于多肽疫苗价廉、安全、特异性强、容易保存和应用的优点，越来越受到重视。但也因其免疫原性差、功效低以及半衰期短等不足影响了免疫效果。可被CTL识别的肽表位对预防感染和慢性病的免疫治疗是一种非常有用的免疫原。在设计中应注意：①是否激发细胞毒性T细胞和辅助淋巴细胞。②选择性结合MHC―I／MHC―Ⅱ类分子，刺激辅助性T细胞的功 ...

多糖疫苗 细菌的细胞膜结构中存在着荚膜成分，其主要成分是多糖类物质，这类多糖常常在细菌侵袭机体的过程中表现出特定的抗原特性。另外，在某些细菌如革兰阴性菌的细胞壁外膜中，也含有脂多糖的成分，它由脂质和多糖组成，也与荚膜多糖成分相同，是细菌在侵袭机体过程中表现特定抗原特性的主要成分之一。这类脂多糖存在一定的毒性，对机体有较大影响。细菌外膜蛋白和多糖物质均存在强烈的免疫原性，例如流感杆菌菌苗的活 ...

蛋白质疫苗 对于机体免疫来说，蛋白质疫苗为较好的疫苗抗原，可被T细胞反应和B细胞反应同时识别。蛋白质疫苗抗原包括有天然蛋白质、经化学灭活的类毒素。采用定点突变方法灭活的毒素和重组技术克隆的蛋白质等。 在此类疫苗的设计中，其基本的技术要求如下： ①维持目的蛋白质的空间结构，尽量保持抗原位点的关联和可能的构象； ②具有能够诱导保护性免疫反应的抗原表位； ...