核酸疫苗目的蛋白基因序列
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1995
核酸疫苗目的蛋白基因序列
1990年，Wolff等将纯化的DNA 直接注射到小鼠肌肉后检测到目的基因的表达产物，此后Ulmer将带流感病毒的核蛋白基因质粒DNA注射到小鼠骨骼肌后，小鼠产生了良好的体液及细胞免疫反应，并对流感病毒有了一定的保护力。同年，Wang也报道了HIV的糖蛋白gpl60基因直接注射小鼠和非人灵长类，产生了免疫反应。这一系列结果引起各国学者的广泛关注。核酸免疫是将编码抗原蛋白的基因片段插入到带有真核细胞表达载体的质粒，通过DNA重组技术构建成真核表达质粒DNA，并将构建好的质粒DNA直接注入机体，使之诱导免疫反应的过程。作为第三代疫苗，DNA疫苗具有诸多传统疫苗所没有的优越性，如成本低廉，贮存和运输简便，可诱导机体产生高效而持久的免疫应答，尤其针对细胞免疫，特别适用于病毒和寄生虫等细胞内感染的清除。核酸疫苗已成为20世纪90年代的研究热点，开辟了疫苗学的最新领域。
保护性抗原基因的筛选是DNA疫苗研制能否成功的首要前提。构建核酸疫苗首先要选择具有免疫活性并能诱导保护性免疫功能的特定抗原的基因序列，它可以是单个基因或多个基因，也可以是表位片段序列。DNA疫苗的设计和制备也像其他疫苗一样，第一步是获得目的基因，然后通过重组DNA技术，将该目的基因定向插入哺乳动物细胞表达载体，并转人大肠杆菌细胞进行增殖，最后经过筛选获得重组克隆。
获取抗原及其编码基因主要通过：
①利用表达文库免疫技术筛选；
②从基因组DNA文库和cDNA文库筛选；
③应用DNA芯片技术筛选；
④人工合成目的基因片段；
⑤PCR扩增筛选。
