细胞技术

各种已被命名和经过细胞生物学鉴定的细胞系或细胞株 ，都是一些形态比较均一、生长增殖比较稳定的和生物 性状清楚的细胞群。因此凡符合上述情况的细胞群也可 给以相应的名称，即文献中常称之为已鉴定的细胞（Certified Cells）。 已鉴定的细胞可用于各种实验研究和生产生物制品。当前世界上已建的各种细胞系（株）已难胜数，我国也建有百种以上，并在不断增长中。 体外培养细胞的种类和命名 体外培养细胞的 ...

体内组织细胞在体外培养时，所需培养环境基本相似，但由于物种、个体遗传背景及所处发育阶段等的不同，各自要求条件有一定差别，所采取的培养技术措施亦不尽相同，现介绍个别组织细胞培养的要点如下: 上皮细胞培养 上皮细胞包括腺上皮是很多器官如肝、胰、乳腺等的功能成分，又由于癌起源于上皮组织，故上皮细胞培养特别受到重视。但上皮细胞培养中常混杂有成纤维细胞，培养时生长速度往往超过上皮细胞，并难以纯化，同时上皮 ...

组织培养肿瘤细胞生物学特性 肿瘤细胞与体内正常细胞相比，不论在体内或在体外，在形态、生长增值、遗传性状等方面都有显著的不同。生长在体内的肿瘤细胞和在体外培养的肿瘤细胞，其差异较小，但也并非完全相同。培养中的肿瘤细胞具以下突出特点： （－）形态和性状 培养中癌细胞无光学显微镜下特异形态，大多数肿瘤细胞镜下观察比二倍体细胞清晰，核膜、核仁轮廓明显，核糖体颗粒丰富。电镜观察癌细胞表面的微绒毛多而细密，微 ...

无菌操作基本技术 1、实验进行前，无菌室及无菌操作台(laminar flow) 以紫外灯照射30-60 分钟灭菌，以70 % ethanol 擦拭无菌操作抬面，并开启无菌操作台风扇运转10 分钟后，才开始实验操作。每次操作只处理一株细胞株，且即使培养基相同亦不共享培养基，以避免失误混淆或细胞间污染。实验完毕后，将实验物品带出工作台，以70 % ethanol 擦拭无菌操作抬面。操作间隔应让无菌 ...

体内、外细胞的差异和分化 1、差异： 细胞离体后，失去了神经体液的调节和细胞间的相互影响，生活在缺乏动态平衡的相对稳定环境中，日久天长，易发生如下变化：分化现象减弱；形态功能趋于单一化或生存一定时间后衰退死亡；或发生转化获得不死性，变成可无限生长的连续细胞系或恶性细胞系。因此，培养中的细胞可视为一种在特定的条件下的细胞群体，它们既保持着与体内细胞相同的基本结构和功能，也有一些不同于体内细胞的性状。 ...

Description Recent advances in the imaging technique electron microscopy (EM)have improved the methodmaking it more reliable and rewardingparticularly in its description of three-dimensional detail。T ...

实验步骤： 1、EB病毒液的制备 复苏B95.8细胞株，使用培养基为10% FCS RPMI-1640 逐步添加培养基至细胞长至对数生长期 细胞计数，调节细胞数量为1×10^6个/ml 在CO2培养箱中继续续培养10天，中间不换液 至第10天收集培养上清，1800rpm，4℃离心15分钟 0.22μm滤器过滤，1ml/支分装，冻存于液氮备用 2、病人外周血液的采集、分离 使用枸橼 ...

器材与试剂： 干粉型培养基、胰蛋白酶，青霉素、链霉素. 纯净水系统、电子天平、PH计、磁力搅拌器。 具体步骤： 一、水的制备 细胞培养用水必须非常纯净，不含有离子和其他的杂质。需要用新鲜的双蒸水、三蒸水或纯净水 二、PBS的制备与消毒（也可用于其它BSS，如：Hanks，D-Hanks液的配制） 1.溶解定容：将药品（NaCl8.0g，KCl0.2g，Na2HPO4•H2O 1.5 ...

贴壁法原代培养 1.1　细胞培养 1.1.1　培养液配制　DMEM（美国Gibco公司），Hepes（15mmol/L），青霉素（100u/ml），链霉素 （100mg/ml），优质胎牛血清（原代培养浓度20%，传代培养浓度10%，美国Hyclone）。 1.1.2　培养器皿　25cm2塑料培养瓶（Costar），培养面积25cm2；直径3.5cm培养皿。 1.1.3　大鼠血管平滑肌细胞培养　动物 ...

单核细胞的分离 基本原理：本文分离单核细胞所用方法是Percoll非连续性密度梯度离心法，主要是根据不同细胞间密度的差别进行细胞分离。此法易操作，且使用通常的实验设备即可完成。 试剂与器材 ·外周血单个核细胞（参见实验1） ·PBS1×和PBS10×（无Ca2+、Mg2+），含0.5mM EDTA ·胎牛血清（56℃，30分钟加热灭 ...

MTT分析法以活细胞代谢物还原剂3-(4，5)-dimethylthiahiazo (-z-y1)-3，5-di- phenytetrazoliumromide， MTT噻唑蓝为基础。MTT为黄色化合物，是一种接受氢离子的染料，可作用于活细胞线粒体中的呼吸链，在琥珀酸脱氢酶和细胞色素C的作用下tetrazolium环开裂，生成蓝色的formazan结晶，formazan结晶的生成量仅与活细胞数目成 ...

培养基历史 体外培养（ in vitro culture ）包括：组织培养（ tissue culture ）、细胞培养（ cell culture ）、器官培养（ organ culture ）。顾名思义，就是将活体结构成分（如活体组织、活体细胞或者活体器官等）从体内或其寄生体内取出，放在类似于体内生存环境的体外环境中，让其生长发育的方法。广义组织培养与体外培养同义。 体外培养已经历了约一百 ...

进实验室这么长时间了，每一天都好像过得很艰难，每一项实验的完成都很辛苦，其中的每一个细节都不能大意，不然做得一切都要前功尽弃。 实验室里没有人做细胞爬片，我连见都没见过，老板的实验却要求这个东西，只能自己摸索。查资料 搜信息，自己实践，终于做出了可以用来后期实验的细胞爬片。 总结经验如下： 首先是玻片的处理，普通的盖玻片用砂轮划成自己要的大小的小方块，先用洗衣粉洗干净，用水冲静烤干，然后泡酸过夜， ...

常用设备 准备室的设备： 单蒸馏水蒸馏器、双蒸馏水蒸馏器、酸缸、烤箱、高压锅、储品柜（放置未消毒物品）、储品规（放置消毒过的物品）、包装台。配液室的设备：扭力天平和电子天平（称量药品）、 PH 计（测量培养用液 PH 值）、磁力搅拌器（配置溶液室搅拌溶液）。 培养室的设备： 液氮罐、储品柜（存放杂物）、日光灯和紫外灯、空气净化器系统、低温冰箱（ -80℃ ）、空调、二氧化碳缸瓶、边台（书写实验 ...

四唑盐（MTT）商品名为噻唑蓝 操作步骤 一、接种细胞 1、用胰蛋白酶消化汇合的单层细胞，将细胞收集到含血清的培养基中。　　2、离心细胞悬液，使细胞沉积下来。用培养基重悬细胞，计数。　　3、将细胞稀释至2.5×103-50×103 个/ml，每个微滴定板可容纳20ml细胞重悬液。　　4、用加样器在平底96孔板中间十列的各孔中加入200μl细胞悬液，每孔加0.5&tim ...

（一）培养板的清洗和消毒 培养板一般为一次性使用，尤其在接触了有毒、有害等物质后更应该处理后丢弃。但如果要反复使用则一定要进行正确的清洗和消毒，以保证细胞培养的效果。 问：只有紫外照射可以保证无菌吗?可不可以从清洗方面做点工作? 答：看你什么用途了，一般贴壁生长的细胞用重复利用的培养板效果不是很好，因为培养板表层在生产时涂有一层促进细胞贴壁的物质，在清洗后多半会失去。悬浮或是半悬浮生长的细胞还可 ...

第一节 培养细胞学 cultural cytology 何谓是培养细胞学？ 指细胞在体外培养的特定条件下，通过对离体细胞的研究，获取的研究结果与细胞生物学具有三个学科相似的信息。 细胞生理学： 研究细胞生命活动规律，如何从环境中摄取营养，经过代谢获得能量，以促进生长、分裂及其表达功能的。 分子细胞学： 从遗传信息 (DNA—RNA—蛋白) 角度研究胞内遗传物质的结构和表达的 ...

细胞凋亡（apoptosis）的命名主要是根据某些单个细胞死亡时细胞碎裂如花瓣或树叶散落般的形态学特征。目前对细胞凋亡的认识正不断得到深化，检测凋亡细胞的方法也逐渐增多，但形态改变仍是确定细胞凋亡的最可靠的方法。 一、光学显微镜观察 凋亡细胞的主要特征为核染色质致密深染，形成致密质块，有时可碎裂。在HE染色的组织切片中细胞体积缩小，胞质致密、嗜酸性染色增强，并可形成凋亡小体。在组织中凋亡细胞常以分 ...

细胞凋亡（Apoptosis），又称细胞程序性死亡（PCD： Programmed Cell Death），是指细胞在一定的生理或病理条件下，遵循自身的程序，自己结束其生命的过程。它是一个主动的，高度有序的，基因控制的，一系列酶参与的过程。细胞凋亡概念提出至今还不到30年的时间，但由于它在保证多细胞生物的健康生存过程中扮演着关键角色，对个体的正常发育及细胞凋亡紊乱在病理学研究中的重要作用，引起了人 ...

一、形态学观察方法 （一）HE染色、光镜观察：凋亡细胞呈圆形，胞核深染，胞质浓缩，染色质成团块状，细胞表面有“出芽”现象。 （二）丫啶橙（AO)染色，荧光显微镜观察：活细胞核呈黄绿色荧光，胞质呈红色荧光。凋亡细胞核染色质呈黄绿色浓聚在核膜内侧，可见细胞膜呈泡状膨出及凋亡小体。 （三）台盼蓝染色：如果细胞膜不完整、破裂，台盼蓝染料进入细胞，细胞变蓝，即为坏死。如果细胞膜完整，细胞不为台盼蓝染色 ...