细胞技术

吸出培养瓶中的培养基，用PBS液洗涤1-2次； 加入已经在37度预热的消化液(0。25%胰酶+0。02%EDTA)少量(估计可以平铺培养瓶底部即可）； 在镜下看到细胞退缩变园，立即给予少量培养基终止消化，我一般的消化时间就在1分钟之内很好消化； 再用弯管吹打细胞成单细胞悬液后，按1：2或1：3分瓶即可。 ...

【求助】G418 原代细胞筛选 参与者：lxwgww 在论坛看了很多关于G418的帖子，正在做原代细胞转染的筛选，不知道是否可以使用G418 筛选？是否可以筛选到稳定的细胞株？？ 请做过相关研究的战友指教！！ 参与者：zhaolifei 分析转化的功能和表达需要DNA稳定转染至宿主细胞染色体。外源基因进入细胞后，部分能够通过细胞质进入细胞核内，根据细胞类型，至多80%的进入核内的外源DNA得到瞬时 ...

细胞复苏后，在显微镜下观察大约有80%~100%的细胞已经贴壁时用新鲜的培养基换掉原来的培养基，去除DMSO对细胞的毒害，估计复苏到换液的时间为0.5~1.5h。 2~3d细胞长满后传代，传代前先把培养基和0。2%的胰酶从冷库放到室温1~2H，由于冷库中的培养基温度与在温房的温差很大，这样做可以防止细胞"感冒"，然后把培养瓶中的废液倒掉，加入约5~10ml胰酶，把培养瓶平放使胰 ...

大鼠骨髓经ficoll分层后培养。一周换液2次。三周后，可以传代了。然后大约7天可以传代一次。跟das1977网友的方法稍微有点不同。 1. 弃去旧培养液。 2.预热的PBS液轻缓漂洗细胞两遍，尽量洗去残余血清，弃去PBS 3 加0.25%胰酶0.05%EDTA于37度条件下消化，约两到三分钟，倒置相差显微镜下观察，细胞缩成圆形漂浮为准。我还用手轻轻击打培养皿的两侧，希望可以加速其消化。实验室里的 ...

【求助】不同细胞siRNA转染效率，如何检测？ 参与者：SmallDonkey 最近在做RNAi，用的siRNA，然后Real-Time PCR，发现抑制率仅20-30%左右，与说明书说的70-90%相去甚远 咨询一些相关人员后，认为可能是转染效率的问题，如果转染效率仅有20-30%，那抑制20-30%也就不少了。 因此想请教一下，一般不同细胞通常转染效率是多少？ 我用的是MT4（悬浮）、CEM（ ...

HEK 923 subculture method in CELL Biology 1. prepare the devices in the hood such as the pipette and flask(T-75) petri dishes(4undefined10) 2.prewarm the CDMEM DPBSTE(the combination solution by trysine and ...

人胃腺癌细胞MNK-45体内传代及接种实体瘤的详细步骤： 1、收集对数增长期的MNK-45细胞若干瓶制备成瘤细胞悬液undefined10^8个/ml左右接种到裸鼠胁部皮下。 2、待肿瘤生长到0.8g左右时，选择1-2只荷瘤（瘤块必须要求生长良好且无破损）裸鼠，颈椎脱臼处死，置75%酒精浸泡1-2分钟后裸鼠置超净工作台，于无菌条件下，剥取瘤块并将瘤块置200目细胞筛用玻璃棒研磨后用生理盐水或培养液冲洗，并用1容 ...

Bcap-37和MDA-MB-435细胞都是人乳腺癌细胞，培养液用DMEM或1640均可，小牛血清10％就足够，不过感觉435细胞用DMEM长得更旺一些。 两种细胞都很好养，Bcap-37可称为是最漂亮的乳腺癌细胞，一个个成排列均匀的瓜子状，形态规则，长得也快，一般1：2传代后2－3天即可长满。435长的较慢，需4－5天。 传代常规用0.25％的胰酶消化后用含血清的培养基终止消化，视消化程度而决定 ...

【求助】不同细胞siRNA转染效率，如何检测？ 参与者：SmallDonkey 最近在做RNAi，用的siRNA，然后Real-Time PCR，发现抑制率仅20-30%左右，与说明书说的70-90%相去甚远 咨询一些相关人员后，认为可能是转染效率的问题，如果转染效率仅有20-30%，那抑制20-30%也就不少了。 因此想请教一下，一般不同细胞通常转染效率是多少？ 我用的是MT4（悬浮）、CEM（ ...

【求助】关于CHO-K1细胞稳定转染和瞬转COS的问题急 参与者：sisars 各位大虾小弟我最近一直在瞬转COS细胞分泌表达上清一直没有表达也浓缩过再做ELISA WB 都没有啊时间挺长了实在等不及了就想稳定转染cho-k1细胞系通过MSX来筛选加压25UM的MSX 结果还不到两个星期CHO全死了不知道怎么回事如果有表达的话应该是分泌表达的怎么我总是做不出来呢很是一个郁闷阿 质粒纯度和浓度都应该 ...

【求助】如何运输细胞 参与者：fengxue19840112 我要从烟台把干细胞带回北京，路上大约需要20个小时，烟台这边的老师说可以把克隆挑下来悬浮在培养液里，放在一个EP管中带回去.然后再给它接种到新的滋养层细胞上.不知道有没有人这么做过，效果如何?可以的话请将答复发到我的邮箱里，非常感谢. 参与者：zhangzhanli2008 可以用干冰保存快运，一般１０公斤干冰３－４天应该没问题 参与者 ...

【求助】钙离子的测定 参与者：99shaoshuai 请问各位师兄，师姐，用Fura-2/AM标记，荧光双波长测细胞内钙离子浓度时，悬浮细胞时，悬浮液里含不含Ca2+，Mg2+离子？如果含Ca2+，Mg2+离子的话，会不会影响细胞内钙离子的测定？为什么？非常感谢！ 参与者：yangchunzhang1 AM基团可以特异的标记细胞内游离钙离子，因而不用担心外液的影响。具体机制请参照染料的说明书。 没 ...

【求助】骨髓瘤细胞的体内接种问题 参与者：qj_82 请教各位：骨髓瘤细胞如果要进行乳鼠或者大鼠的体内接种，是采用腹腔注射，还是皮下注射？还是直接注射在脾脏上？细胞密度要达到多少才有比较理想的接种效果？ 参与者：zhangzhanli2008 皮下１１０的７次方－３１０的７次方/ml 腹腔１１０的６次方/ml ...

根据作者E-mail地址，向作者索要。这是一种看似麻烦，实际非常有效的办法。为了更方便大家向作者索取原文，特意写了一份英文信函的模板，您只要把作者姓名、文章标题等等加上就成了。拜托您使用时稍加改动，避免千篇一律。信的内容如下： Dear Mr./Mrs.： ________（作者名） I am a graduate student of NanJing Medical University i ...

【求助】sf9，空斑试验，滴度测定 参与者：xiaoniziwendeng 我用的是bac-to-bac系统表达的目的蛋白。加上荧光底物后，96孔板读数，野生病毒和目的病毒相差不大，而且细胞感染后脱落严重，我该如何做呢？很希望能得到大家的帮助 参与者：yangea 以下问题请参考排除： 1、是挑取的单空斑进行病毒扩增的吗？ 2、荧光底物是否摸索了浓度梯度，即是否找到了作用最为明显的使用浓度； 3、 ...

免疫组织化学又称免疫细胞化学，是指带显色剂标记的特异性抗体在组织细胞原位通过抗原抗体反应和组织化学的呈色反应，对相应抗原进行定性、定位、定量测定的一项新技术。免疫组织化学的方法有多种，其实都大同小异，不同点只是在于显色基团！ SP法 1）脱蜡、水化； 2）PBS洗2～3次各5分钟； 3）3%H2O2（80%甲醇）滴加在TMA上，室温静置10分钟； 4）PBS洗2～3次各5分钟； 5）抗原修复 ...

【求助】HEK293细胞中是否能查到p53蛋白 参与者：yuncheng1973 请问各位同行，正常的人胚肾HEK293细胞做免疫细胞化学染色是否能测到p53蛋白呢？因为p53蛋白在正常细胞中含量很低，所以担心会测不到，有谁做过可以告诉我吗，谢谢！ 参与者：louise3653 你的问题提得好。 HEK293的详细资料请参看美国ATCC网： http://www.atcc.org/common/c ...

【求助】关于血管生成实验 参与者：erik 想设计一实验研究一蛋白对肿瘤细胞血管生成的影响，但不知道需要几种实验方法同时运用才能说明问题，或者说哪几种是常用的（最好简单易行），我是外行，谢谢指教！ 参与者：viv2005 动脉环，小管生成，鸡胚，这几个比较常用，要么就是直接上动物 参与者：erik 我的意思是同时做哪几个就可以说明问题，呵呵，谢谢您的回复！ 参与者：viv2005 我们都是一起做的 ...

【求助】悬浮细胞的免疫组化 参与者：joveandjuno 各位前辈，我想做悬浮细胞的免疫组化，看帖子说应该滴片，滴完片子怎么做组化呢？ 用不用固定什么的？ 我想要看的抗原在细胞膜上。还有，贴壁细胞做免疫组化的话，观察细胞膜上的抗原，应该用什么固定？ 谢谢～ 参与者：laugh 用多聚赖氨酸包被片子来滴片，滴片后离心，去除多余液体，一般用甲醛或多聚甲醛固定，也可以视情况用其他固定剂如冷的丙酮或乙醇 ...

【求助】谁知道液体闪烁仪的探测下限啊 参与者：joytcm 哪位知道液体闪烁仪的探测下限啊，最小能测多少微居呀，多谢啦 参与者：fishbody 这很难说。不同的仪器对不同的核素的测量效率是不一样的，而且液闪的测量还由闪烁液转换光子能量效率的因素。 另外，液体闪烁仪测量到的是cpm（count per minute），而不是uCi。 一般，0.01uCi甚至更低的放射性量就可以测量的。 参与者：j ...