细胞技术

tjmedwnn：请问25uM的氯喹是这样配的吗？？？？ 大家好，我做质粒转染，说明书上说转染前要加25uM的氯喹。我买的氯喹分子量是515.86，请问大家如果换算成质量这怎么计算啊，是不是25/515.86=0.048μg然后称取0.048μg加进去啊，请大家多教教我，谢谢！ 丁香园网友szcsyan认为： 一般配成stock，浓度高一点。比如25mM。用的时候再稀释。 看你买的是多 ...

feiniao2005038：测序本人拿菌液让生工测序，结果是双峰，是什么意思？怎么回事？重组的质粒用酶切鉴定没有问题， 丁香园网友zhaochengling认为： 1.有可能是基因重复，重复的两个拷贝之间有一个硷基的差异 样品本身被污染，这常常发生在样品为质粒和菌液的情况中。当使用通用引物测序时，如果刚好和样品中的几个质粒均能结合，那么就会出现这种情况，而且在同一位置上还可能有不止两个峰形； 2 ...

jc_484190：咨询3β-HSD的染色配方 请问有谁做过3β-HSD的染色啊？这种染色的配方是什么啊？南京的同学有没有在做得啊？ 丁香园网友jfeiharry认为： 刚刚baidu了一下，看了一点相关资料，希望对你有些帮助 3β-HSDH反应溶液 脱氢表雄酮（DHEA）10mmol溶于丙酮0.5ml 尼克酰胺（1.6mg/ml）1.0ml 硝基蓝四唑（NBT）（1 ...

问：请问提取细胞RNA的方法？答：细胞总RNA的提取：1、6孔板细胞汇合度为90-100%时，取出无菌室，去其上清，用PBS洗两次后，每孔加TRIZOL试剂 1 ml，摇匀，无菌罩内消化3-5 min。2、将各孔内消化好的细胞裂解液吸到一DEPC处理过的1.5 ml EP管中，加新开的氯仿0.2 ml，轻摇15 s。3、室温静置2-3 min后，12000 rpm，15 min，4 ℃，离心。然后 ...

flybaker：请教有关胰腺石蜡切片制作方法的问题 按照普通石蜡切片的制作流程做出的大鼠胰腺组织切片，能被染上的细胞很少，而且细胞间的空隙很大。我自己分析可能是由于胰腺厚薄不均，导致透明时间没掌握好，透明过度组织变脆。再加上胰腺形状不规则，切片时没切到整个面。不知道有没有人做过胰腺的石蜡切片，和普通组织的石蜡切片制作方法相比有没有什么需要特别注意的？？ 丁香园网友zgxsea认为： 是正常的大鼠 ...

phoolishkate：脂质体转染后必须用不含抗生素的培养基吗？ 我的培养基都加了青链霉素，转染后是不是不能用？ 丁香园网友applezph认为： 由于脂质体转染对细胞存在一定毒性，一般说来转染前的一次传代就应用不含抗生素的培养基，转染后的话我觉得也不应该加青链（我都是这么做的） 当然如果对自己的操作实在没有把握的话，我认为你可以考虑试试转染后加，但不要太早，4-6小时换液用无抗生素的，可以24 ...

p猫：稳定转染之后的细胞为什么荧光强度会有很大的不同？ 在建立稳定株的整个过程中都存在这个问题，理论上说同一个细胞克隆出来的细胞团里面的每个细胞表达蛋白的水平应该是一样的吧，可是为什么荧光显微镜下看荧光强度差异却很大呢？这样的稳定株能用来做后续的实验吗？ 丁香园网友lhczj认为： 如果不考虑荧光强度，细胞能够长时间保持有荧光，可以继续实验 我周围很多做稳定转染的也有这种情况 丁香园网友dtlxj ...

zy_dalian：请问Lipofectamine2000使用高手：转染后多久加药物? 加LIPO2000后，我选择4小时后换培养基. 那大家是换液后多久加药进行研究的呢?（根据自己研究的不同，药物是不同的）； 先谢谢啦！ 丁香园网友silentjill认为： 说明书上不是说的48-72小时后就可以了么？ 丁香园网友出来混的认为： 我是根据转的效率加药的 丁香园网友applezph认为： 一般Li ...

guoguoloo：彗星试验电泳前的细胞应该用什么方法保存 最近要做大鼠脑组织细胞和血淋巴细胞的彗星试验。因为取完组织细胞后不能立刻跑电泳，请问脑组织该如何保存，4度，-20度，-80度或液氮？ 丁香园网友hjhj4604认为： 比较麻烦，冷冻或低温都会对细胞造成DNA损伤，影响结果。 建议现取现做，实在不行暂放４度，时间不可过长。 丁香园网友djhmily认为： 请问，我把细胞收集了（PBS离心 ...

xiangyu_16888：关于稳定转染的若干问题 1 转染后24小时以1：10的稀释比例加入新鲜的含G418的培养基中，其目的是什么? 2 此时换液是否将DNA-脂肢体复合物去处? 3 加入G418的量是按体积加还是按细胞数加? 4 转染后培养基除了G418是否也加入双抗? 谢谢各位大虾了！ 丁香园网友bigbang_0_0认为： 1.利于两周后挑取单克隆. 2.是. 3.按体积加. 4.是. ...

shilei5794749：透明菌落OR 乳白色菌落？ 重组质粒做完转化后，板上长出来的菌落有透明的，有乳白色的．听说重组质粒长出来的菌应该是乳白色的，而透明的菌落很有可能是杂菌？？请问各位战友，这种说法有根据吗？？ 丁香园网友applepie118认为： 这种说法，至少在我作转化来看没有什么根据。 为什么会是乳白色得，难道是插入得片断引起了表型得变化，但是并不是每个插入片断都正好插入到质粒中影响 ...

Emmanuelle：用于转染的培养基有何要求? 为什么用于转染的培养基不能含有血清? 丁香园网友rissa999认为： 这个能不能含血清是要看你用什么转染载体的，其实有些阳离子脂质体和高分子聚合物类的转染载体可在有血清的培养基中进行转染。 一般情况下，用无血清的培养基主要是因为转染载体带正电荷，而血清中含有大量负电性的成分会竞争结合正电性的载体，导致载体与DNA复合物的稳定性降低，从而使转染效率 ...

问：Tris饱和酚和重蒸酚的区别和配制方法 答：Tris饱和苯酚（Tris saturated phenol）也称Tris平衡酚(Tris balanced phenol)，是添加了抗氧化剂8-羟基喹啉，tris pH8.0充分平衡的苯酚，呈黄色。常用于DNA抽提和纯化等。 重蒸酚是苯酚在182度蒸馏的组分。 tris配制方法：1、取出重蒸酚，室温放置68度水浴溶化，切勿立即放入68度的水浴中，以 ...

1.建立某种细胞株所用的培养基应该是培养这种细胞首选的培养基。可以查阅参考文献，或在购买细胞株时咨询。 2.其它实验室惯用的培养基不妨一试，许多培养基可以适合多种细胞。 3.根据细胞株的特点、实验的需要来选择培养基。如小鼠细胞株多选 RPMI1640 。 4.用多种培养基培养目的细胞，观察其生长状态，可以用生长曲线、集落形成率等指标判断，根据实验结果选择最佳培养基，这是最客观的方法，但比较繁 ...

1.干粉，买了后一定要保存在4度。有人保存在－20度我认为没有必要。但4度是非常必要的。保证期是有提示的。 2.配好的无血清培养基一定保存在4度，保存不要超过3个月。用时根据提示要加入谷胺酰胺。 3.加入血清的培养基，最好保存在4度不要超过1个月，从时间太长，活性下降。当然稍微长点也不一定出问题。但是根据细胞而定；如果原代培养，最好新鲜，如果是肿瘤细胞，或仅维持传代就不太要紧。但是原则是越新越好。 ...

注意事项 1.认真阅读说明书。说明书都注明干粉不包含的成分，常见的有NaHCO3、谷氨酰胺、丙酮酸钠、HEPES等。这些成分有些是必须添加的，如NaHCO3、谷氨酰胺，有些根据实验需要决定。 2.配制是要保证充分溶解，NaHCO3、谷氨酰胺等物质都要等培养基完全溶解之后才能添加。 3.配制所用的水应是三蒸水，离子浓度很低。 4.所用器皿应严格消毒。 5.配制好的培养基应马上过滤，无菌保存 ...

1.MEM细胞培养基系列 2.DMEM细胞培养基系列 3.RPMI-1640细胞培养基系列 4.199细胞培养基系列 5.水解乳蛋白细胞培养基 6.欧氏平衡盐 7.F-10F-12细胞培养基系列 8.其它类型细胞培养基 ...

无蛋白培养基（protein free midiumPFM）:即不含有动物蛋白的培养基。无血清培养基仍含有较多的动物蛋白，如胰岛素，转铁蛋白、牛血清白蛋白等。从生物技术发展的趋势来看，不含动物蛋白的培养基又广泛的应用前景，许多利用基因工程技术重组的蛋白质最终要应用于人体，如果再生长过程中使用了含有动物蛋白质的培养基，纯化过程就比较复杂，最终要达到一定的质量标准也有一定的难度。无蛋白培养基就是为了适 ...

无血清培养基(serum free mediumSFM):是不需要添加血清就可以维持细胞在体外较长时间生长繁殖的合成培养基。但是它们可能包含个别蛋白或大量蛋白组分。虽然基础培养基加少量血清所配制的完全培养基可以满足大部分细胞培养的要求，但对有些实验却不适合，如观察一种生长因子对某种细胞的作用，这时需要排除其他生长因子的干扰作用。而血清中可能含有各种生长因子；又如需要测定某种细胞在培养过程中分泌某种 ...

合成培养基是根据天然培养基的成分，用化学物质模拟合成、人工设计、配制的培养基。它有一定的配方，是一种理想的培养基。目前合成培养基多达10多余种，有的培养基仍在不断进行改良。早期组织培养是利用天然培养基，目前合成培养基已经成为一种标准化的商品，从最初的基本培养基发展到无血清培养基、无蛋白培养基，并且还在不断发展。合成培养基的出现极大的促进了组织培养技术的普及发展。 基本组分 1.无机盐：CaCl2 ...