Lipofectamine2000的相关问题

zy_dalian：请问Lipofectamine2000使用高手：转染后多久加药物?

加LIPO2000后，我选择4小时后换培养基.

那大家是换液后多久加药进行研究的呢?（根据自己研究的不同，药物是不同的）；

先谢谢啦！

丁香园网友silentjill认为：

说明书上不是说的48-72小时后就可以了么？

丁香园网友出来混的认为：

我是根据转的效率加药的

丁香园网友applezph认为：

一般Lipofectamine 2000转染后4-6小时换液是指去除含有转染因子的培养液，避免其作用时间过长对细胞产生毒性，但是质粒或RNA转入细胞后仍需要一段时间才能真正观察到效应，一般来说是48-72小时后可以检测到mRNA和蛋白水平的变化。

不太明白你说的加药是怎么回事，只能举个例子吧：

比如做肿瘤细胞KB-A1的MDR基因的转染以抑制其对化疗药物的耐药性，在转染siRNA48-72小时后，可以检测MDR基因在mRNA和相应蛋白水平有无下调，并作药物敏感性试验，观察药物IC50的变化，或者进行其他生物学活性的检测。

希望我的回答能对你有帮助！

丁香园网友zy_dalian认为：

首先感谢大家的热情回答！

我理解说明书上的意思是48-72小时后是可以收获细胞的.不知是不是这样?

我的意思是在转染后进行药物干预，我的药物是能和转染的质粒进行反应的，质粒中带有药物反应元件的.

我的问题也就是在转染后具体何时进行药物干预?其后维持多久可以收获细胞?（当然是在72小时之内）

丁香园网友silentjill认为：

我的理解是４８小时转染后的细胞已经开始表达目的质粒，故应该在４８小时后就是可以得到目的质粒，也就是可以加药干预了．至于加药干预多久收获细胞，当然是与你所用的药物的动力学，信息的传导途径以及质粒的性质等等有关的了．

丁香园网友zhanglei2423认为：

Lipofectamine2000说明书上不是写着：在检测转基因表达前，将细胞在37º；C CO2培养箱中孵育18－48小时吗？？？

为何一定要等到48小时侯再给予干预或刺激？？？我是在24小时侯就把细胞拿来处理了，可以吗？质粒表达时间应该够了吗？？谢谢！！！

丁香园网友applezph认为：

你对说明书的理解是正确的。

对于你所说的药物干预，我认为你需要进行预实验摸条件，转染后什么时候转染的质粒表达量达到最高？如果质粒表达水平可测，找出时间浓度曲线，如果不可测，就做不同时间与质粒药物反应的效应的曲线，何时收获也是一样。通过预实验的优化，你才能找到最适当的加药时间和收获时间！

希望我的意见能对你有帮助！