细胞技术

研究体外培养细胞成功率．主要针对原代培养的动物和人的组织细胞，由于培养的目标细胞很多是成体细胞和分化终末的细胞，缺乏肿瘤细胞无限增值的能力。容易导致培养失败，为了在实验中提高原代培养的成功率，应注意一下几个方面的因素。一、取材(一) 细胞的种类根据实验的目的和要求，尽可能选择具有分裂增殖能力的细胞，如上皮细胞、成纤维细胞等。原代培养肿瘤细胞较正常细胞容易，成功率也较高。(二) 取材的部位在实验目的和要求允许的情况下．取材应 ...

BioLegend MojoSort™ 磁珠分选实验分享：一、免疫磁珠分选简介免疫磁珠分选是一种从复杂的细胞混合物中分离出高纯度细胞的方法。基于细胞表面抗原能与连接有磁珠的特异性单抗相结合，在外加磁场中，通过抗体与磁珠相连的细胞被吸附而滞留在磁场中，不带有该种表面抗原的细胞由于不能与连接着磁珠的特异性单抗结合而没有磁性，不在磁场中停留，从而使细胞得以分离。有两种分选方式，阴性分选及阳性分选。BioLegend 公司的 Moj ...

1、问：测定细胞生长曲线的意义是什么？答：细胞生长曲线是测定细胞绝对生长数的常用方法，也是判定细胞活力的重要指标，是培养细胞生物学特性的基本参数之一。因为细胞太小，无法测单个细胞的生长状态，所以测细胞群体的生长曲线。2、问：如何选择细胞接种数？答：可根据细胞传代培养过程中接种数及细胞生长周期进行计算，细胞接种数因细胞的不同而不同。3、细胞计数时为什么要用台盼蓝染色？答：加入台盼蓝后，活细胞不着色，台盼蓝着色的细胞呈深 ...

基于细胞的酶联免疫检测实验（Cell Based Elisa）可以：（1）检测高通量的样本，定量细胞膜上或细胞内的蛋白质的表达情况。（2）用于磷酸化蛋白质的检测，易降解蛋白质的检测，少量细胞目的蛋白质的检测。试验方法原理先将细胞种于 96 孔板中，对细胞进行不同条件的处理。待检测目的蛋白时，对细胞进行多聚甲醛的固定、灭活、打孔及封闭非特异性结合位点。根据抗原抗体反应的原理，一抗孵育与目的蛋白质结合，加入酶标记二抗与一抗结合，加入底物 ...

培养细胞的传代及日常维持过程中，在培养器具、培养液及各种准备工作方面都需大量的耗费；而且细胞一旦离开活体开始原代培养，它的各种生物特性都将逐渐发生变化，并随着传代次数的増加和体外环境条件的变化而不断有新的变化。因此及时进行细胞冻存十分必要。现在细胞低温冷冻储存已成为细胞培养室的常规工作和通用技术。细胞储存在液氮中，温度达-196℃，理论上储存时间是无限的。细胞冻存及复苏的基本原则是慢冻快融，实验证明这样可以最大 ...

科幻电影中将冻存若干年的生命体重新解冻复活的情节在生命科学研究过程中每一天都在上演。为了将每一种有生命的细胞较好的保存其原有的细胞特性或者长久的保存种质资源，实验人员往往将细胞用特殊配置的细胞冻存液保存于-196℃ 的液氮，使得细胞暂时脱离生长状态，等到实验需要的时候再从液氮中取出复苏应用。在这一看似神奇的生命存储过程中，我们不禁要问，这是如何实现的呢？其实，细胞冻存和复苏的教科书和实验手册上面都有。小编不想再重 ...

以自建细胞系 (laryngeal squamous carcinoma-1, LSC-1) 第 12 代的某一被细菌污染的细胞株采取救治, 比较效果并分析细胞生物学特性。1.方法 1) 抗生素法: 细菌培养: 用无抗生素完全培养液培养细胞 3 d, 收集上清离心后将沉淀物接种于血琼脂培养基, 35e 培养。所采用的抗生素包括临床常用的 15 种抗生素抗生素最适抑菌浓度筛选: 根据细菌药敏实验结果选出敏感抗生素, 每种抗生素从最低抑菌浓度 MIC 到最高耐药浓度分别配制 6 个浓度梯度。将 LSC-1 细胞按 undefined104/孔种 ...

您还在为买不到高效能进口血清苦恼吗？请试用我们的全新血清替代物BSSubTM-XF 细胞培养添加剂BSSubTM-XF 细胞培养添加剂BSSubTM-XF 是细胞培养添加剂，能够很好的替代细胞培养基中的 FBS（胎牛血清），是专为各种哺乳动物细胞的体外培养而开发的。 BSSubTM-XF 已用于各种原代细胞和细胞系的培养。BSSubTM-XF 无异源动物成分，不含牛或其它动物来源蛋白。特色和优点性价比高，无异源/血清替代物细胞生长的天然营养 ...

HUVEC 分离自脐带静脉，一般用于生理学和药理学研究，例如大分子转运、血液凝固、血管发生和纤维蛋白溶解作用。PromoCell 提供取自单个供者的 HUVEC,混合来源的则混合有至多四个不同供者。（Human Umbilical Artery Endothelial Cells （HUAEC） from the same donor are available on request.）此外，根据信号传导研究的不同，可以为血管生成研究和其他依赖 VEGF 的信号通路研究（相 关内皮生长 ...

非血清、非动物来源之免疫细胞培养营养补充剂UltraKURETM 為非血清、非动物来源之细胞培养补充剂，经实验证实能取代人类血清，在 CIK 细胞培养有极佳表现效果。来自美国最先进製造技术。每批次 UltraKURE™ 皆经严格测试，品质保证。批次间稳定性高。UltraKURE™ 优点• 无动物来源/无血清之细胞营养补充剂• 仅需 2.5 % 即可获得比 5% 人类血清更高的生长倍数• 提供免疫细胞自然生长环境• 可与多种培养基搭配使用，均可获得极佳的结果• 严格的安全性管控:− 细菌 ...

由于欧盟关于化学物质的毒性风险评估（REACH EC No. 1907/2006）法规的改变，以及目前不断发展的替代方法的需求，以取代动物实验为目标，在体外模型基础上进行肺毒性的评估的技术，显然是非常有必要的。迄今为止，国内外的细胞体外毒性测试实验研究中，仍多采用浸没式细胞培养方法进行。然而，在浸没条件下的颗粒物暴露并不符合在细胞体内的真实情况，并可能影响研究受试物（颗粒物、气体等）的物理化学性质。早在 1999 年，德国 Aufderh ...

Transwell 小室在细胞实验中很常用，共培养实验、趋化实验、细胞迁移、细胞侵袭以及药物转运实验都会用到，但小室的规格有很多种，不同的实验需要用到的小室规格也不同。根据 transwell 板的不同，transwell 小室可以分为 6 孔板小室、12 孔板小室和 24 孔板小室以及和 transwell 皿配套的 75 mm 直径的小室；根据孔径的不同，从小孔径到大孔径又分为 0.4μm 规格、3μm 规格、5μm 规格、8μm 规格，不同实验对小室孔径的要求也不一样。小于 3μm 孔径的 ...

1. 大脑与神经元人类大脑由大约 100 亿个神经元组成，神经元之间通过突触相互连接成复杂的功能网络，因而大脑是人体最复杂的器官。目前，人们对大脑的功能机制的认知还停留在较低的水平，研究大脑的功能也成为科学家的终极目标。2013 年 1 月，人脑工程成为欧盟「未来新兴旗舰技术项目」之一，未来 10 年内将获得 10 亿欧元的科研经费。随后，奥巴马宣布将从 2014 财年的政府预算中拿出 1 亿美元，启动"人脑活动图"项目研究（Brain Activity Map project）。 ...

六、MTT 结果分析关于如何计算 IC501、改良寇式法：lgIC50=Xm-I(P-(3-Pm-Pn)/4)Xm:lg 最大剂量I:lg(最大剂量/相临剂量)P: 阳性反应率之和Pm: 最大阳性反应率Pn: 最小阳性反应率举个例子：各药物浓度作用于某肿瘤细胞后所得 MTT 值如下公式中的最大最小阳性反应率就是最大最小抑制率抑制率=1-加药组 OD 值/对照组 OD 值，如对于 100ug/ml 的药物，其抑制率=1-0.080/0.614=0.869，各组抑制率如下：代入计算公式：Pm=0 ...

五、MTT 法实验步骤1. 胰酶消化对数期细胞，终止后离心收集，制成细胞悬液，细胞计数调整其浓度至 5~10×104/ml。细胞详细计数方法请参照易生物实验技术中的相关文章。对于初学者而言，要使细胞达到 5~10×104/ml 往往不知从何处着手，我在这里向大家提供一个简单的方法以初步确定细胞数量。以一般细胞培养常用的 25 cm2 为例，1) 细胞密度在长到约 80%~90%（下图所示为 80%~90% 密度时细胞的大致状态），消化离心收集后，将上清去掉，加入 3 ml 培养基使其 ...

四、实验所需材料1．MTT 溶液的配制通常 MTT 配成的终浓度为 5 mg/ml, 须用 PBS 或生理盐水做溶剂。市面上一般 MTT 的包装为 100 mg,250 mg 或 1 g1.1 对于 100 mg 这样的小包装，厂家都是将 MTT 放入小管中的，个人建议不要再用天平称量分装，而应该一次性将其全配制成溶液，如 100 mg 用 20 ml PBS 来溶解。具休做法：预先在 50 ml 离心管（没有的话，可用培养瓶替代）加入 20 ml PBS，从中先吸取 500-1000ul PBS 装入含 MTT 的小管中，吹打若干次后将其移入 50 ml 离心管，然后再混匀。可以重复 ...

一、MTT 是什么MTT 是一种粉末状化学试剂，全称为 3-(4,5)-dimethylthiahiazo(-z-y1)-3,5-di-phenytetrazoliumromide，汉语化学名为 3-(4，5-二甲基噻唑-2)-2，5-二苯基四氮唑溴盐，商品名：噻唑蓝。是一种黄颜色的染料。二、MTT 法用来做什么简单地说：是一种检测细胞存活和生长的方法。MTT 主要有两个用途1．药物（也包括其他处理方式如放射线照射）对体外培养的细胞毒性的测定；2．细胞增殖 ...

MTT 原理MTT 全称为 3-(4,5)-dimethylthiahiazo(-z-y1)-3,5-di-phenytetrazoliumromide，汉语化学名为 3-(4，5-二甲基噻唑-2)-2，5-二苯基四氮唑溴盐，商品名：噻唑蓝。是一种黄颜色的染料。MTT 比色法，是一种检测细胞存活和生长的方法。其检测原理为活细胞线粒体中琥珀酸脱氢酶能够代谢还原 MTT，同时在细胞色素 C 的作用下，生成蓝色（或蓝紫色）不溶于水的甲臜（Formazan），甲臜的多少可 ...

1.一体化小室——细胞培养&显微成像两用玻片/皿细胞免疫荧光实验你是怎么做的？还在用小玻片，先泡酸、再晾干、再 coating、再种细胞、染色、最后封片成像？那您太 out 了吧！使用 ibidi 产品，先养细胞、然后直接固定、染色、成像，在培养皿/玻片上全部搞定！绝对能帮您把细胞养好、又帮您省时省力的获得漂亮的成像结果（见图 1）！图 1. 传统爬片方法与 ibidi 产品免疫荧光实验比较2.ibidi 产品底部媲美盖玻片厚度，为高分辨率显微成像而设计的光学特性德国 i ...

过去十年，几乎每个生命科学者都知道“凋亡”这个概念且有意无意地将自己的研究工作与之挂钩，催生了大量文章。同样我们有理由坚信未来十年“自噬”也会变成另一个“万金油”和生命科学的“闪亮新星”。下面将为大家介绍“自噬”的精彩内容。细胞自噬自噬（Autophagy）是普遍存在于真核细胞中的一种高度保守的代谢过程，是细胞内的一种“自食（Self-eating）”现象。它作为细胞内的主要降解途径，将胞内物质运输到溶酶体内降解。它主要有 ...