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        在体多通道记录技术的应用及实验流程

        东乐自然基因

        15507
        大脑与神经元

        人类大脑由大约 100 亿个神经元组成,神经元之间通过突触相互连接成复杂的功能网络,因而大脑是人体最复杂的器官。目前,人们对大脑的功能机制的认知还停留在较低的水平,研究大脑的功能也成为科学家的终极目标。

        2013 年 1 月,人脑工程成为欧盟「未来新兴旗舰技术项目」之一,未来 10 年内将获得 10 亿欧元的科研经费。随后,奥巴马宣布将从 2014 财年的政府预算中拿出 1 亿美元,启动"人脑活动图"项目研究(Brain Activity Map project)。这两大脑科学研究计划势必将掀起神经科学研究的热潮。

        神经元,又称神经原或神经细胞,是构成神经系统结构和行使功能的基本单位。神经元是具有长突起的细胞,它由细胞(Soma)和细胞突起-轴突(Axon)和树突(dendrite)构成。

        神经元与神经元之间会发生频繁的信号传递与交互,从而构成非常复杂的神经网络。神经元之间的信号传递依赖于细胞膜上的离子通道(Ion channel)。离子通道的开闭会引起膜内外离子的交换,如 Na+/K+ 离子,从而引起膜电位的变化。

        所以说神经元的信号传递会伴随着电活动,当达到一定阈值时,便可引发动作电位(A c t i o n p o t e n t i a l)。检测神经元动作电位的发生变成为研究神经活动的主要方法,比如传统的膜片钳技术。

        在体多通道记录技术(in-­‐vivomultichannelrecording)

        传统的膜片钳技术是一种离体的记录方法(in-vitro), 主要是针对离体培养的细胞和脑片进行记录,而且大多是单通道记录,一次只能记录一个细胞,通量不高。随后发展出了 MEA 技术,即 Multi-ElectrodeArray,利用多电极阵列对细胞或脑片进行记录,这样就变成了多通道记录,解决了通量的问题。

        然而,离体状态下的记录与动物的本来状态还是相去甚远,尤其是研究动物在某种活动状态下的神经活动更加是不能实现。所以在体或活体状态的多通道记录便是迫切需要。

        在体多通道记录(in-vivo multichannel recording)是在活体状态下研究动物神经活动的一种方法。将电极阵列植入动物的大脑某皮层或区域,电极后续接入高灵敏度的放大器及记录系统,将记录到的模拟信号转换成数字信号,在配套的记录软件上变可以观察到放电信号。

        现在国际上已经有非常成熟的用于在体多通道记录的系统和产品,比如美国 Neuralynx 公司研发的 DitgialLynx 系统,其高速的采样率和 A/D 转换率、超低的噪音、最高可达 512 通道、超大的记录范围、简便易用的软件等方面,给研究者在神经科学研究方面带来极大的帮助!

        在体多通道记录的实验流程

        在体多通道记录主要包括动物手术、电极植入、信号记录采集及数据分析等步骤。

        (1)动物手术:

        以大小鼠为例,将实验动物麻醉,常用戊巴比妥钠或水合氯醛静脉注射的方法,有条件也可使用气

        体麻醉。去除动物头顶处的毛,将动物固定在脑立体定位仪上,然后将头皮剪开,将组织清理干净,

        露出头骨,可以比较清晰的看见骨缝。利用骨缝进行定位,确定电极植入的位置。

        用颅骨钻在颅骨开天窗,一般方形的窗比较常用。小心取下骨片,再在天窗对侧脑区打下几个螺钉

        孔,用来固定颅骨螺钉,一般打 2 至 4 个。用 1 ml 注射器针头小心去除硬脑膜,尽量避免出血。

        (2)电极植入:

        先固定颅骨螺钉,使得螺钉接触到脑组织,但又不过分压迫。用电极夹持器夹住电极,先定位在

        天窗上方,将电极的地线缠绕在颅骨螺钉上。讲电极尖端紧挨脑组织表面。然后,用微推进器缓慢向

        下推进(建议使用高精度的电动微推进器),使得电极进入脑组织。注意推进的速度,使电极缓慢到达

        想要记录的脑区。

        (3)信号记录:

        连接好记录系统,包括 headstage,主机,电脑等。打开记录软件,观察放电信号。Neuralynx 的 DitgialLynx 系统配备 Cheetah 采集软件,可以同时显示高频 Spike 信号及低频信号,如 LFP/EEG/EMG,记录原始的未滤波信号,可在软件设置 input range、filter、thresholds 等参数,操作简单方便,界面友好。

        待观察到稳定且信噪比较高的信号,便可开始记录。在记录同时还可以同时接入其他外源事件和刺激,如电刺激、光刺激。

        除了麻醉状态下记录,还可以让动物清醒状态下进行记录。这样便可结合动物行为学,让动物完成各种任务并同时进行记录。

        (4)信号分析:

        记录好数据之后,便可进行数据分析。Neuralynx 提供 SpikeSort3D 进行 Spike Sorting。SpikeSort 3D 是一款用于 Spike 波形在线和离线的分类工具。它集成在 Cheetah DAS 软件中,同时也可以作为独立的程序。在 2D 和 3D 界面中,使用者可以轻松的手动定义不同的放电聚类,清晰明了。

        SpikeSort 3D 提供主成分分析 PCA,并有多个特征值 features 可选,并提供 Cluster quality

        measures-isolation distance 和 L-ratio

        Sorting 之后,Neuralynx 还提供 NeuroExplorer 进行数据分析软件。NeuroExplorer 现在已经是第四代版本,可以提供最完整的一套 Spike 分析方法。研究者可以从多个角度分析连续的信号数据和神经元的数量。强大的内置的脚本语言,让许多分析工作的自动化,同时其开放式的分析环境,您可以使用其他程序来扩展其功能。

        NeuroExplorer 可以读取多种文件格式,包括许多流行的数据采集系统,文本文件,Excel 电子表格和 MATLAB 创建的数据文件。为了帮助出示您的分析结果,NeuroExplorer 创建完全可编辑,达到出版质量的表格和图表。

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