细胞技术

结合绿色荧光蛋白表达的细胞周期分析广泛的用于研究绿色荧光蛋白标记的细胞的细胞周期分布。这个方案是一种用绿色荧光蛋白标记的斑马鱼胚胎来分析细胞周期的方法。材料与试剂1. PBS（Invitrogen公司14040）2. 胎牛血清3. 乙醇4. PFA（USB）5. Hoechst 33342 溶液（请加目录编号）6. ...

用无血清培养基把细胞悬液稀释到200～2000个/毫升，在0.1毫升的细胞悬液中加入0.1毫升的0.4％的台盼兰溶液。轻轻混匀，数分钟后，用血球计数板计数细胞。活细胞排斥台盼兰，因而染成蓝色的细胞是死细胞。Trypan Blue 台盼蓝 购买链接：http://www.biobars.cn/shop/goods.php?id=1705 (责任编辑：大汉昆仑王) ...

血球计数板每一大方格长为1mm，宽为1mm，高为0.1mm，体积为0.1mm3，可容纳的溶液是0.1l，那么每ml溶液中所含细胞数即是视野中每一大方格中数出的细胞数的10000倍。实验步骤（一）准备计数板：用酒精清洁计数板和盖玻片，然后用吸水纸轻轻擦干（二）制备细胞悬液：用胰蛋白酶消化单层培养细胞或收集悬浮培养细胞，制成单个细胞悬液。要求细胞密度不低于104/ml，若细胞数很少，应将悬液离心 ...

一、原理培养的细胞在一般条件下要求有一定的密度才能生长良好，所以要进行细胞计数。计数结果以每毫升细胞数表示。细胞计数的原理和方法与血细胞计数相同。计算细胞数目可用血球计数盘或是Coulter counter 粒子计数器自动计数。 血球计数盘一般有二个chambers，每个chamber 中细刻9 个1 mm正方形再细刻16 个小格，深度均为0.1 mm。当chamber 上方盖上盖玻片后，每个大正 ...

问：细胞计数过程，用或者不用台盼蓝染色计数有啥区别？？不用台盼蓝染色的情况下，计数细胞还是数那些亮细胞？视野下，活细胞怎样判定？同一个标本，再用台盼蓝染色计数即等倍稀释后，看到的亮细胞明显减少，两种计数方法结果不一致是为什么？答：1、用或者不用台盼蓝染色计数有啥区别？？准确些。台盼蓝可以穿透死细胞的细胞膜，将细胞核染色。活细胞不着色。2、不用台盼蓝染色的情况下，计数细胞还是数那些亮细胞？视野下，活 ...

问：不小心把盒子里面的冻存管撒进液氮了，好几十支怎么取出来呀，是大液氮罐，里面液氮还比较多，而且还冻了很多其他的细胞，怎样把撒进液氮里面的冻存管取出来呀，而且不损伤其他冻着的细胞。急啊，老板知道了会把我骂死，求求各位了，我为了做实验都愁的内分泌失调了，现在又出了这档子事，没法活了呀，说实话自杀的心都有了。求求各位帮帮我吧，谢谢大家了答：我也干过这种事，如果有备用液氮罐那样比较好办，把架子倒过去，在 ...

问：现在刚刚开始做干细胞，想自己计数白细胞，用的是Sigma的0.4%台盼蓝，1:1混合，从2分钟开始细胞死亡越来越多，例如2分时有10%死亡，到5分钟就死一半了，到底是几分钟计数最准确呢？&还有一个问题，看到有1:1使用，也有1:9的，用哪种浓度最好呢？答1：0.4%应该是1:1混合的，1:9的是4%浓度的，这个染色的时间不应该太长的，因为对于胎盘蓝这种大分子，不能渗透就如细胞膜，但是如果染色时 ...

当冻存管储存在液氮液相中而没有使用CryoFlex Tubing 时，如何正确的溶解复苏细胞？在整个操作过程中必须穿戴保护服，包括手套，脸罩等。冻存管从液氮液相取出后必须在液氮气相中储存24h，这样可以使得液氮从冻存管中慢慢的蒸发和逃逸，从而降低冻存管中的压力。等在液氮气相储存24h后，将冻存管放入水浴槽，同时用毛巾覆盖，等熔融复苏结束后转移冻存物。 (责任编辑：大汉昆仑王) ...

一、细胞凋亡与细胞坏死的的区别细胞程序性死亡 概念：细胞程序死亡(programmed cell death，PCD)也常常被称为细胞凋亡，是生物体发育过程中普遍存在的，是一个由基因决定的细胞主主动的有序的死亡方式。具体指细胞遇到内、外环境因 子刺激时，受基因调控启动的自杀保护措施，包括一些分子机制的诱导激活和基因编程，通过这种方式去除体内非必需细胞或即将发生特化的细胞。而细胞发生程序性死亡时，就 ...

摘要：凋亡信号是接受特异性的刺激才产生的，因此细胞凋亡具有特异性细胞生长到一定时期时，由于各种自身或外界因素的影响，导致细胞自身的一种应答反应，是属于正常的细胞生理现象，要凋亡的细胞会产生凋亡信号，凋亡信号传递给一些巨噬细胞吞噬要凋亡细胞或者刺激自身DNA的转录翻译从而产生凋亡蛋白来指导细胞自身的降解，这些反应需要有凋亡信号才会发生，凋亡信号是接受特异性的刺激才产生的，因此细胞凋亡具有特异性。 ...

摘要：细胞凋亡也帮助我们理解一些病毒和细菌侵袭人体细胞的机理。除了 A IDS，另外一些疾病，如神经变性性疾病、中风、心肌梗塞和自身免疫疾病等都是由于很多正常细胞被不正确地启动了程序性死亡过程而造成细胞过量死亡。无论在发育期还是在成人体内，既有大量的新细胞产生，也有大量的旧细胞死亡，这是生物体的一种自然现象。为了维持机体组织中适宜的细胞数量，在细胞分裂和细胞死亡之间需要一种精确的动态平衡。由于这种 ...

细胞凋亡的特点：细胞变圆，染色质凝聚、分块，胞质皱缩。之后整个细胞通过发芽、起泡等方式形成一些球形的突起，并在其基部绞断而脱落形成大小不等内含胞质、细胞器及核碎片的凋亡小体，然后被周围细胞吞噬。其他的特征：1. 由基因控制，2. 不引起炎症。3. 质膜不破裂，4. 染色质DNA的有控裂解 ...

按照起始caspase的不同，可将哺乳细胞的凋亡分为三种基本的途径。一种称为外在途径(extrinsic pathway)，由细胞表面的死亡受体如Fas和肿瘤坏死因，子受体家族(tumour necrosis factor receptor，TNF-R)引发;另一种称为内在途径(intrinsic pathway)或线粒体途径(mitochondrial pathway)，由许多应激条件、化学治疗 ...

细胞程序性死亡 概念：细胞程序死亡(programmed cell death，PCD)也常常被称为细胞凋亡，是生物体发育过程中普遍存在的，是一个由基因决定的细胞主主动的有序的死亡方式。具体指细胞遇到内、外环境因子刺激时，受基因调控启动的自杀保护措施，包括一些分子机制的诱导激活和基因编程，通过这种方式去除体内非必需细胞或即将发生特化的细胞。而细胞发生程序性死亡时，就像树叶或花的自然凋落一样，凋亡的 ...

细胞凋亡信号通路图 ...

摘要：细胞凋亡是指为维持内环境稳定，由基因控制的细胞自主的有序的死亡。细胞凋亡与细胞坏死不同，细胞凋亡不是一件被动的过程，而是主动过程，它涉及一系列基因的激活、表达以及调控等的作用，它并不是病理条件下，自体损伤的一种现象，而是为更好地适应生存环境而主动争取的一种死亡过程。 细胞凋亡是指为维持内环境稳定，由基因控制的细胞自主的有序的死亡。细胞凋亡与细胞坏死不同，细胞凋亡不是一件被动的过程，而是主动 ...

摘要： 细胞凋亡与坏死是两种完全不同的细胞凋亡形式，根据死亡细胞在形态学、生物化学和分子生物学上的差别，可以将二者区别开来。细胞凋亡的检测方法有很多，下面介绍几种常用的测定方法。 一、细胞凋亡的形态学检测 根据凋亡细胞固有的形态特征，人们已经设计了许多不同的细胞凋亡形态学检测方法。 1 光学显微镜和倒置显微镜 (1) 未染色细胞：凋亡细胞的体积变小、变形，细胞膜完整但出现发泡现象， ...

张韧，王建超，陈文庆，刘华杰，高飞，徐舸辰，林龙飞 （北京清大天一科技有限公司，北京102200） 反应器悬浮培养技术是目前国内外疫苗生产的热点之一，它可以极大提高疫苗的质量和生产率。介绍了该技术在国内外疫苗生产中的研发和应用现状，表明国内该技术目前已经在口蹄疫疫苗生产中获得成功应用，利用MDCK、Vero等细胞培养生产禽流感疫苗的技术也正在积极研发中，并将逐步替代传统的鸡胚生产 ...

由于上次求助无人回应，一气之下遍找资料，汇总出菌体/细胞裂解的常用方法和配方，希望能对其它求助兄弟有所帮助。 一、反复冻融法： 1. 将细胞在-20度以下冰冻，室温融解，反复几次，由于细胞内冰粒形成和剩余细胞液的盐浓度增高引起溶胀，使细胞结构破碎。 2. 至少3次以上冻溶。 http://www.dxy.cn/bbs/actions/archive/pos ...

陈文庆 王建超 刘华杰 高飞 张韧 （北京清大天一科技有限公司 102200 ） （《中国兽药杂志》 2010.44 （ 10 ）： 37-41 ） 【摘要】采用反应器全悬浮培养BHK21细胞生产口蹄疫病毒与微载体悬浮培养Vero细胞生产狂犬病毒分别与相应的转瓶培养工艺生产案例对比分析，比较悬浮培养工艺与转瓶培养工艺的生产效益。分析显示，与转瓶培养工 ...