细胞技术

酵母免疫荧光1）细胞制备1．培养5ml酵母至对数生长早期（106～107细胞/ml）。2．直接加1/10体积的甲醛到培养基里固定细胞（加入的甲醛终浓度为3.7％，标准母液是37％）。3．细胞在甲醛中培养至少1小时。4．离心收集细胞，用0.1mol/L磷酸钾（pH7.5）洗一次。5．把细胞悬浮在1ml的50mg/ml消解酶100T或50单位/ml的溶细胞酶溶于含有2ml/ml 6-巯基乙醇的0.1m ...

固定化细胞的肌动蛋白染色1．培养细胞到对数生长期（约107细胞/ml）。2．直接取0.1ml甲醛加到含有1ml培养物的离心管中固定细胞（甲醛浓度为3.7％；标准母液是37％）。3．在甲醛中培养细胞30分钟或稍长时间。4．用PBS洗两次，离心5分钟收集细胞。5．用50μl的PBS悬浮细胞，加5个单位的罗丹明或荧光素连接的鬼笔环肽。6．用PBS洗3次，重新悬浮在小体积的封固剂中。7．用罗丹明或荧光素滤 ...

PCR介导基因破坏法1．反应混合物：5μl 10×Taq缓冲液5μl 25mmol/L MgCl22μl 10mmol/L dNTPs10~100ng 模板DNA25pmols 引物（每种引物）0.5μl Taq DNA聚合酶（2U

酵母菌落PCR方法1．在冰上配制反应混合液：2μl 10×菌落PCR缓冲液1.2μl 25mmol/L MgCl20.4μl 10mmol/L dNTPs10pmol 引物（每一种引物）0.2μl

H脱氧胸苷摄入法测定细胞数1．用RPMI-1640培养液洗涤对数生长期（培养3天）的CTLL-2细胞两次，每次250×g离心10分钟，洗去培养液中残存的IL-2。2．用台盼蓝（1％ Trypan blue）染色法计数细胞并决定细胞的活力，用10％小牛血清的RPMI-1640培养液悬浮细胞至1×105/ml。3．在96孔细胞培养板中每孔加0.1ml倍比稀释的标准IL-2或待测样品，每个稀释度三个复孔 ...

细胞调亡的流式细胞仪检测技术一、固定细胞的染色方法1）PI单染色法方法一1．收集细胞（1～5）×106个，500～1000r/min离心5min，弃去培养液。2．3ml PBS洗一次。3．离心去PBS，加入冰预冷的70％的乙醇固定，4℃，1h。4．离心弃去固定液，3ml PBS重悬5min。5．400目的筛网过滤1次，500～1000r/min离心5min，弃去PBS。6．用1ml PI染液，4℃ ...

hoechst33258染色，他们认为细胞发生凋亡时，染色质会固缩。 所以Hoechst染色时，细胞核会呈致密浓染，或呈碎块状致密浓染。正常细胞核刺激后有致密浓染的凋亡细胞 AO-EB染色法：The image below shows human lymphoma cells treated with the chemotherapy agent camptothecin. The cells ...

信号通路研究工具 促细胞分裂原活化蛋白激酶(MAP kinase)是一类丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶，由于不同的细胞外刺激或介导细胞表面至细胞核的信号转导而被激活。 结合其它信号途径，它们能够改变转录因子的磷酸化状态。受控的MAPK级联反应系统参与细胞增殖和分化，但当其活力失控时会导致肿瘤。据报道，三种主要的MAPK级联反应类型在哺乳动物细胞中与不同的上游信号协同反应。现今研究最广泛的级联反应系统是ER ...

信号通路研究工具 促细胞分裂原活化蛋白激酶(MAP kinase)是一类丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶，由于不同的细胞外刺激或介导细胞表面至细胞核的信号转导而被激活。 结合其它信号途径，它们能够改变转录因子的磷酸化状态。受控的MAPK级联反应系统参与细胞增殖和分化，但当其活力失控时会导致肿瘤。据报道，三种主要的MAPK级联反应类型在哺乳动物细胞中与不同的上游信号协同反应。现今研究最广泛的级联反应系统是ER ...

血清热灭活�您是否在浪费时间？血清的热灭活是很多培养者感兴趣的话题，价格不菲的血清中含有诸如生长因子，维生素，氨基酸等珍贵物质，而将它们置于50℃以上的温度长达30分钟是完全没有必要的。尽管如此，在大多数实验室之中血清的热灭活还是作为常规来执行，多数实验者并没有考虑热处理对血清中的生长因子，氨基酸等成分带来的负面影响，在我们的技术热线中最常被提到的就是否该对血清进行热灭活，下面我们就对胎牛血清的热 ...

血清热灭活�您是否在浪费时间？血清的热灭活是很多培养者感兴趣的话题，价格不菲的血清中含有诸如生长因子，维生素，氨基酸等珍贵物质，而将它们置于50℃以上的温度长达30分钟是完全没有必要的。尽管如此，在大多数实验室之中血清的热灭活还是作为常规来执行，多数实验者并没有考虑热处理对血清中的生长因子，氨基酸等成分带来的负面影响，在我们的技术热线中最常被提到的就是否该对血清进行热灭活，下面我们就对胎牛血清的热 ...

细胞凋亡是目前细胞生物学的研究热点之一，其研究方法有形态学，生物化学，酶联免疫分析以及分子生物学等等不胜枚举，本文着重对形态学方法中的姬姆萨（Miasma's)染色，荧光（Hoechest 33342)加典化丙啶（PI）排斥分析法以及台盼兰排染法等加以分析比较，找出以上各方法之特点，以便在凋亡细胞的光镜分析中择其所长，避开局限，灵活进行联合或选择性运用。点击浏览该文件细胞凋亡相关产品及资料肿瘤抑 ...

Cell number speed and trivial details affect cytospin . Basic protocol: Prepare a cell suspension of not more than 0.5 x 106 cells / ml of protein-containing medium. Pre-label the slides. Procedure fo ...

注：感谢哈佛大学医学院果蝇RNAi筛选中心的支持和提供本实验方法I. MEDIUMA. S2 S2C Sundefined S2R+ S3 l(2)mbn Kc(167) & DL2 cells: Schneider's/ 10% FBS/ PS450 ml Schneider's medium (Gibco #11720-034)(pour off 50 ml into Falcon to save as s ...

细胞培养的基本知识(网友帖子精选)整理了一下以前网友的帖子把有代表性的帖子列了出来希望对新手有所帮助!欢迎大家常来细胞区交流!国内细胞库统计http://www.bioon.net/dispbbs.asp?boardID=89&ID=20498细胞培养一般方法http://www.bioon.net/dispbbs.asp?boardID=89&ID=32272无菌操作http://www.bio ...

1、全血样本的保存：一般来说，血液样本必须在6个小时内处理，最晚不得超过12小时；做完染色后，需要放在多聚甲醛中保存，一般可以存放3天左右。多聚甲醛的质量直接影响保存的效果。所以多聚甲醛的制备也非常重要！！注意：如果是MOUSERAT的全血样本，不建议用多聚甲醛保存；效果非常不好；不信你可以试试，后果自负！！2、培养细胞的保存：培养的细胞当然可以用多聚甲醛保存，但是效果没有全血样本好！！3、做DN ...

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1、全血样本的保存：一般来说，血液样本必须在6个小时内处理，最晚不得超过12小时；做完染色后，需要放在多聚甲醛中保存，一般可以存放3天左右。多聚甲醛的质量直接影响保存的效果。所以多聚甲醛的制备也非常重要！！注意：如果是MOUSERAT的全血样本，不建议用多聚甲醛保存；效果非常不好；不信你可以试试，后果自负！！2、培养细胞的保存：培养的细胞当然可以用多聚甲醛保存，但是效果没有全血样本好！！3、做DN ...

在园子里浏览了很多次，发现关于乳鼠心肌细胞培养的资料还是几年前的比较多，不知道是不是这几年已经做得很少了。我是今年刚开始做的，发现虽然说方法已经很成熟了，但是做起来还是会有很多的问题的，所以把自己所犯错误总结如下：心肌细胞搏动差，取材后2、3天细胞活力明显下降。当时我们一开始出现这个问题的时候，首先考虑是不是消化过度的问题，我们用的是0.1％的胰酶消化的，每次的时间都是6分钟左右（消化几次后，组织 ...

在园子里浏览了很多次，发现关于乳鼠心肌细胞培养的资料还是几年前的比较多，不知道是不是这几年已经做得很少了。我是今年刚开始做的，发现虽然说方法已经很成熟了，但是做起来还是会有很多的问题的，所以把自己所犯错误总结如下：心肌细胞搏动差，取材后2、3天细胞活力明显下降。当时我们一开始出现这个问题的时候，首先考虑是不是消化过度的问题，我们用的是0.1％的胰酶消化的，每次的时间都是6分钟左右（消化几次后，组织 ...