细胞技术

yangxiexun 请教各位，看文献说stat3是与肿瘤的侵袭转移有关，我现在只测stat3和其活性形式在高转移肿瘤细胞中的表达情况，这能否说明其与肿瘤的侵袭性有关，此外还需补充什么才能说明问题thomas531 结论可以用POSSIBLE ,MAYBE,之类的词语,在你所检测的肿瘤中如果高于他的正常组织,可以下这样的结论zfyyzz00 建议选几个受stat调控的基因能对肿瘤转移有作用的进行研究，这样才可以说明的的观 ...

hbqh 我想做NF-KB的WB，我买的抗体是NF-KBp65抗体，不是磷酸化抗体，是不是我需要做细胞核的NF-KBp65的量变化，另外我是不是必须选择细胞核内参呢？哪位前辈知道啊，在线等待，谢谢hbqh 自己顶一下hbqh 怎么没有人顶啊，快点回复吧amygdala 相关回答见http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=74&id=12180349&sty=1&tpg=1&age=0本文由丁香园论坛提供，想了解更 ...

flyhigh2007 最近订抗体，TRAF-6，石蜡切片免疫组化，upstate和abcom都有合适的，但是两家公司给的application image彻底把我弄懵了，两张图一模一样，都说是用的自己公司的抗体做的，而且同一张图一家公司说是 colon adenocarcinoma，另一家却说是prostate carcinoma。看来只能通过以往的信誉来选择了。这两家公司抗体的信誉如何啊，谢谢啦xdb86 真有这样的事情啊，我只 ...

小niuniu 有谁测过细胞的钙流啊？您是用什么仪器检测的？我们用荧光分光光度计（LS-55）测量时总是有些不合适，有没有人知道这台仪器适合测钙流吗？junjiexiao 用confocal啊燃料用Fura-2、fluo-3、fluo-4都是可以的啊前面一个为340和380激发后面两个用488就可以了zhengxd 想发高点影响因子的文章的话，最好用膜片钳，如果细胞合适的话！完全的Ca2+电流不是很好测；也可以用钙激活钾电流（I ...

wywdxfsh 我看一般都用细胞系，但是细胞系不能代表正常生理状态下的细胞，所以想用原代细胞转染，不知道行不行...wangp249 可以 难度很大tangboyzu 用脂质体转质粒难度可能比较大，amaxa 公司有一种新的电转仪，可以选购针对不同类型的细胞（包括很多原代细胞）的转染试剂，我转过T细细胞，转染效率还行，就是有很多细胞会死，还是需要摸索条件的；另外一个办法就是选用病毒，根据不同类型的细胞，选对了病毒就没问题本文由丁香 ...

zxlbaby 干扰一个基因表达后，EGFR的表达及tyr1173磷酸化都降低，如何分析？能说此基因具有调节EGFR的表达和磷酸化作用吗？还是磷酸化减少是因为表达减少？郁闷中。求助。amygdala 用WB检测以后最好用条带扫描软件做一个量化统计分析，看看总EGFR和Tyr1173降低的比例是否一致，这样就可以知道是哪种情况了。lilili1979 同意楼上的,可以考虑用磷酸化的/总蛋白的值, 通过此值的比较来分析磷酸化的减 ...

gaolei 我看到一片paper是研究某个蛋白通过抑制ER信号通路，抑制乳腺癌细胞增殖。为了证明这一点，作者向不表达ER的293T细胞中转染ER，ER reporter vector和这个蛋白的表达载体。我想问的是，他为什么不向乳腺癌细胞中转染质粒呢？是因为乳腺癌细胞本身表达ER吗？这有什么影响呢？micaixing 外源的大量转染只是为了确定一下现象在过表达中是否存在，乳腺癌细胞中ER 阴性或者阳性时ER的含量，不同细胞系 ...

fanyi701019 请问U0126对哪种肿瘤细胞比较敏感，用药的终浓度是多少？用药时间是多少？amygdala U0126对MEK-ERK信号的抑制作用很明显，一般的细胞株都可以使用。终浓度10 μM左右，预处理15-30min。可以根据实际情况作适当调整。feiqi 怎么我看到一篇nature medicine上的一篇论文上是U0126 0.5 μM处理48小时啊？paulin98122 版主您好，请问如何预处理，如果我要长期观察MEK ...

fanaipinger 我想用LPS刺激THP-1细胞 用NF-kB-luc报告基因来检测nfkb的激活 ,这个试验费事吗？大概需花费多钱，我是学临床的，问这个问题可能比较弱智，请予回答，不胜感激！seagate 我个人认为实验的难点在于如何把NF-kB-luc报告基因转染入悬浮细胞。niu_ren 本人正在做方面的实验,可以共同学习.共转THP-1,293T细胞.fanaipinger 那咱们可以共同交流了，很高兴遇到你。我的QQ号是86 ...

aaaa2576477 奥运会,使国外邮寄的质粒始终到不了的,很烦人的,不知道有谁知道哪里有的买的.急用!谢谢.其实表达克隆也不太懂的.最好有装好目基因的表达克隆:).fghostyun 复能基因有卖的，广州的。我以前买过，不过买回来最好测序一下验证为好aaaa2576477 谢谢!我看到了.很方便的..太感谢拉..本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实验方法的你，都可以成为师兄的好伙伴师兄微信号：s ...

helsman 我阅读文献中发现在检测某个受体的信号通路是否激活时，用的配体浓度是例如100ng/ml,而在检测具体的功能时却用不同的配体浓度例如200ng/ml,请高手指点，谢谢！amygdala 提高浓度无非是因为200ng/ml时具体的功能更加明显，而100ng/ml的浓度对于激活相关通路已足够，但具体的功能尚不明显。一般不提倡随意改变浓度。helsman 非常感谢本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的、有意思的前沿 ...

semiboat 我想阻断此信号通道，在文献中我看到采用了STAT3显性负性技术，是否也可以用STAT3mRNA干扰阻断，但经费都很高，有没有抑制剂什么的能阻断掉，IL-6/MAKP通道我看文献都用抑制剂直接阻断。还有个位有没有作P-STAT3的，我看做信号通道是大家都是用了p-STAT3抗体，为什么不检测STAT3而是检测p-STAT3，非常感谢！！semiboat 望做过的高手解答，非常感谢！！zhuqueleee 1，理论 ...

snowxyh 刚刚做了PC12细胞瞬时转染NF-kB-decoy的DNA，之后加药刺激，然后想要做间接免疫荧光检测其表达，因为转染之后的细胞已经铺满达100%，不是自然伸展的状态了，是不是要把细胞消化下来，重新铺到盖玻片上啊，这时候需要贴壁24h还是要48h呢，因为PC12细胞在贴壁24h后，还不能完全达到自然伸展的状态，而瞬时转染这时候已经过了3-4天了，会不会已经看不出瞬时转染的效果了？哪位师兄师姐做过类似的实 ...

gcc19800119 因为一直没有筛选到突变IkBa质粒的稳定转染株，决定用NFkB抑制剂抑制通路后继续做实验。 因为要做体内和体外实验，目前用PDTC，但是有专家提出，PDTC不是特异性的NFkB抑制剂，研究结果可能有偏差，不能很好的说明问题，现在有点犹豫了。看了专家建议的MECRK产品，关于NFKB的抑制剂也有很多种，有很多也是化学试剂，总觉得也不是特异性的抑制。但是有两种，一种SN50和IKK的多肽片段作为NF ...

xueerzsc 我准备检测UV诱导后细胞的凋亡情况，我选用不同剂量的UV诱导细胞，然后24小时收集细胞，准备进行流失分析细胞的凋亡情况，可是我在收集细胞的时候把漂在培养液中的死细胞都扔掉了。请问漂在培养基里的死细胞要不要一起收集啊？？？lee800265 最好是一起收集，因为这部分细胞也算是UV后的反应，因此收集起来更能真实的反应细胞凋亡状态，而您也可能考虑到由于细胞培养而漂浮的死细胞，也可以通过收集正常组的漂浮细 ...

semiboat 请问用显性负性STAT3质粒转染阻断IL-6/gp130/STAT3通道和STAT3 mRNA干扰阻断此信号通道有什么差异，在阻断此通道时是否都可以使用，园内各位XDJM有谁知道，非常感谢！！bacchante miRNA干扰比较现代化一些。显性负作用似乎还要考虑内源蛋白的影响，如果你的启动元件活力不够高，那么你就抑制作用可能就不明显。另外，似乎不能rescue，也就是说，似乎显性负还无法排除非特异因素。以 ...

xungufeng820 各位大侠：小弟是新手，师兄们也没做过的，不知western-blot测NF-KB、FLT3是用总蛋白提取试剂盒吗？急盼回复！万分感谢！snowxyh 我用过总蛋白提取试剂盒提蛋白，之后western-blot检测NF-KB，但是感觉这样得到的蛋白浓度很稀，需要比较大的上样量才能检测出来，个人感觉，还是用传统的细胞匀浆裂解，离心提取上清，这样得到的蛋白浓度大，做试验结果好shiying0517 自己配置 ...

99shaoshuai 请问各位师兄，师姐，用Fura-2/AM标记，荧光双波长测细胞内钙离子浓度时，悬浮细胞时，悬浮液里含不含Ca2+,Mg2+离子？如果含Ca2+,Mg2+离子的话，会不会影响细胞内钙离子的测定？为什么？非常感谢！sdyutg 悬浮细胞时，悬浮液中应不含Ca2+和Mg2+，否则会影响到细胞内钙离子浓度的测定99shaoshuai 谢谢谢谢本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实验方法的 ...

prophe 小弟最近要做线粒体信号传导途径方面的研究，能否介绍这方面的全面的文献综述即介绍线粒体的全部信号传导途径的综述或信号传导图片，谢谢！hualinpiaoxue 文献综述自己在网上查找即可，而且还更贴近自己的要求我这里有几个线粒体的信号传导图片，希望对你有用！线粒体凋亡通路hualinpiaoxue 线粒体在细胞凋亡中的作用hualinpiaoxue 线粒体的电子传递链示意图fsq6666 这篇文章不错版主doc ...

li2005wh 用蛋白激酶C-alpha抑制剂或蛋白激酶C-epsilon抑制剂来灌流组织块可行吗？蛋白激酶C-alpha抑制剂或蛋白激酶C-epsilon抑制剂能透过细胞膜吗？文竹竹 应该查阅相关试剂的说明书看看能否通过细胞膜wzc2004 li2005wh 您好！我也做信号转导，我有几种蛋白酶抑制剂和活化剂，可以和您交换您的蛋白激酶C-alpha抑制剂和蛋白激酶C-epsilon抑制剂吗？也可以买您的，我需要很少，只做几 ...