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        【求助】瞬时转染的细胞,再做间接免疫荧光,期间血清是加还是不加啊

        丁香园论坛

        2420
        刚刚做了PC12细胞瞬时转染NF-kB-decoy的DNA,之后加药刺激,然后想要做间接免疫荧光检测其表达,因为转染之后的细胞已经铺满达100%,不是自然伸展的状态了,是不是要把细胞消化下来,重新铺到盖玻片上啊,这时候需要贴壁24h还是要48h呢,因为PC12细胞在贴壁24h后,还不能完全达到自然伸展的状态,而瞬时转染这时候已经过了3-4天了,会不会已经看不出瞬时转染的效果了?哪位师兄师姐做过类似的实验,给我点建议吧,十分感谢
        细胞系转染实验时,应在细胞没有长满时进行。

        如果仅仅是简单的组化、WB分析转染产物表达结果,则在细胞70%长满时进行。

        如果还有后续实验,则可以在50%满时进行转染。

        在观察转然后细胞细节改变时,在30%满时转染。
        如果是瞬时转染的细胞,是很脆弱的,恐怕经不起消化的.一消化,估计直接就变细胞碎片了

        本文由丁香园论坛提供,想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实验方法的你,都可以成为师兄的好伙伴

        师兄微信号:shixiongcoming

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