细胞技术

准备工作：准备酶，一般80ml，（0.1%的胰酶与0.03%胶原酶2，用HBSS配。准备3个中皿（10cm），每皿到入HBSS备用。一盒冰，数个离心管，一个小烧杯（装酒精用），75%的酒精，两个小玻璃瓶，一个小转子，37度水浴，4-6个玻璃瓶，以及手术器材。1。取出乳鼠先在酒精的消毒，而后取出心脏。2。将取出的心脏放入装有HBSS的中皿中，3。将取出的心脏移到第二个中皿中，漂洗会，再移到第三个中皿 ...

以兔软骨细胞为例：①一般根据实验要求，选取不同年龄组的兔子，实际上兔子的年龄越小越好，毕竟幼体组织的活力要高于成体组织的活力，耳静脉空气注射法处死后无菌条件下分离后肢关节软骨和肋软骨，剥离包裹软骨组织的筋膜和软骨膜，放入盛有PBS液的培养皿中。②将分离得到的软骨组织剁碎成0.3-0.5mm的组织块，移入25cm2培养瓶，用含双抗的PBS液冲洗软骨3次。③加入软骨体积10-15倍的0.25%胰蛋白酶 ...

以下是我最近在分离枯否细胞时得出的一点个人经验，仅供大家交流：1，严格的无菌原则2，充分的麻醉效果3，开腹前腹腔注射肝素形成全身肝素化4，插管前先将前灌流液及IV型胶原酶预热37度5，先分离门静脉肝动脉及下腔V，结扎肝A，在门静脉下穿两根线6，门静脉插管双重结扎，以防分离肝脏时硅胶管脱落7，插管成功后，剪断下腔静脉放血，肝脏在体灌注前灌流液20ML/MIN20MIN8肝脏变白后，小心将肝脏游离出腹 ...

选用DMEM高糖培养基。1.取5-7天大鼠心脏，用PBS洗净血液2.用75%乙醇浸泡30s3.用PBS冲洗后，剪碎，用适量0.5%胶原酶在37度摇摆水浴中消化30min，加入适量0.02%胰蛋白酶，用吸管轻轻吹打，37度水浴中消化30min。4.分离下的细胞过200目筛网，过滤液用20%小牛血清DMEM培养基混悬离心（1000转/min，5min），未过网的弃之。5.所得细胞悬于20%小牛血清DM ...

自从1965年chestman和Smith首先开始软骨细胞体外培养用于软骨缺损修复的研究以来［1］，人们开始对关节软骨损伤不能通过自身的软骨增殖修复的概念有了新的认识。实验证明不仅年幼且年老的关节软骨标本仍可在体外培养出新生透明软骨［2］。虽然软骨细胞增殖能力有限，其质与量直接影响体外培养扩增效果，软骨细胞生长环境不同所表现出的生物学特性也有差别。软骨细胞在悬浮培养或半固体琼脂培养基中生长 ...

原理分析转化的功能和表达需要DNA稳定转染至宿主细胞染色体。外源基因进入细胞后，部分能够通过细胞质进入细胞核内，根据细胞类型，至多80％的进入核内的外源DNA得到瞬时表达。极少数情况下，进入细胞的外源DNA通过系列非同源性分子间重组核连接，形成巨大的**结构最终整合进细胞染色体。细胞基因组自由部分表达，所以整合并不一定意味着表达，只有整合到表达区的基因才会表达，而且整合到不同的染色体区段的外源基 ...

微载体细胞培养法 1.微载体选择：先用利用三种小量微载体做培养实验，观察细胞在一定时间内细胞的吸着率和计算细胞数，以得到最大量细胞为佳。 2.水化：称一定量的微载体放入容器中，按每克微载体加50～100ml的比例，加入无Ca2＋和Mg2＋的磷酸缓冲液（PBS），室温下放置应不少于3小时，并不时轻微搅动，然后再用新鲜PBS洗一次。 3.消毒：可采用高压蒸汽消毒，也可在水化后用70％酒精浸泡消 ...

球体细胞培养 1.琼脂铺底的培养瓶：30ml无菌培养瓶，每瓶中加5ml2%琼脂培养基，冷却，形成平坦底层后备用。 2.取生长状态良好已连接成片的细胞，用弯头吸管伸入瓶内，把细胞纵横割划成若干小区后，倒出培养液。 3.加入0.25%的胰蛋白酶液，在倒置显微镜下边消化边观察，当细胞小区边缘微卷起后便立即终止消化，倒出消化液，用Hanks轻轻漂洗一次，加入新培养液3~5ml，用吸管把已松动的细胞 ...

Author: Nanci DonackiSource: Contributed by Nanci DonackiAbstract: Procedure for establishing hybridoma in one step Reagents(StemCell Technologies Inc. # 03800) Medium A - Pre-fusion Medium and Hybrid ...

Mitshison Lab Department of Systems Biology Harvard Medical School http://mitchison.med.harvard.edu/protocols/chr1.html Buffers:Swelling Buffer (PME): 5 mM PIPES pH 7.2 5 mM NaCl 5 mM MgCl2 1 mM EGTA ...

Yu-Li Wang LabUniversity of massachusetts Medical School(UMASS)http://ylwang.umassmed.edu/protocol/cfs/glutar.htmMaterials vol (for 500 ml) of stock mg ...

Dr. William H. Heidcamp Biology Department Gustavus Adolphus CollegeExercise 10.3 - Extraction of ChromatinLEVEL II Materials Bovine or porcine brain0.25 M Sucrose containing 0.0033 M calcium aceta ...

流式细胞仪是进行流式细胞分析的仪器，集电子、计算机、激光、流体理论于一体，被誉为试验室的“CT”。 流式细胞术（Flow CytoMeter FCM）是一种在功能水平上对单细胞或其他生物粒子进行定量分析和分选的检测手段，它可高速分析上万个细胞，并能同时从一个细胞中测得多个参数，与传统荧光镜检查相比，具有速度快、精度高、准确性好等优点，成为当代最先进的细胞定量分析技术。 工作原理 将待测细胞染色后制 ...

1．流式细胞仪的分析速度：一般流式细胞仪每秒检测1000～ 5000个细胞大型机可达每秒上万个细胞。2．流式细胞仪的荧光检测灵敏度：一般能测出单个细胞上个荧光分子两个细胞间的荧光差＞5%即可区分。3．前向角散射（FSC）光检测灵敏度：前向角散射（FSC）反映被测细胞的大小一般流式细胞仪能够测量到0.2μm～0.5μm。4．流式细胞仪的分辨率：通常用变异系数CV值来表示，一般流式细胞仪能够达到这也是 ...

Protocol for Frozen Sections:Warm 150ml 4% Paraformaldehyde/1x PBS to RT. Fix slides in it 20 min. RT. 1x PBS rinse 2 times. 1x PBS 30 min. RT. Begin chilling Triton/SSC on ice. 0.1% Triton/ 0.1% Sodi ...

（一） 原理 细胞凋亡的发生，是由于钙-镁依赖性核酸酶进入核小体间切割DNA产生180bp～200bp或其倍数的核小体片段。而核小体由于与组蛋白H2A、H2B、H3和H4形成紧密复合物而不被核酸内切酶切割。采用双抗体夹心酶免疫法，应用小鼠抗DNA和抗组蛋白的单克隆抗体，与核小体片段形成夹心结构，可特异性检测细胞溶解物中的核小体片段。（二）材料与试剂1．采用Boehringer Mannheim公司 ...

Materials 8% (w/v) paraformaldehyde stock solution: Dissolve 8 g of powdered paraformaldehyde in 100 ml water. Heat and stir (55-60 C � do not go higher). Add a few drops of 2 N sodium hydroxide until ...

1）成纤维细胞培养用人或动物胚体为好；动物可用小鼠或鸡胚，去头和内脏，剪成小碎块后，用胰蛋白酶消化法培养；如为人胚，可取皮肤培养。幼儿包皮是培养成纤维细胞的很好对象。 ...

一、流式细胞术常规检测时的样品制备 (一)直接免疫荧光标记法 取一定量细胞(约1X106细胞／ml)，在每一管中分别加入50μl的HAB，并充分混匀，于室温中静置1分钟以上()再直接加入连接有荧光素的抗体进行免疫标记反应(如做双标或多标染色，可把几种标记有不同荧光素的抗体同时加入)，。孵育20-60分钟后，用PBS(pH7．2―7．4)洗1-2次，加入缓冲液重悬，上机检测。本方法操作简便，结果准确 ...

一、国内实验室应用试剂配制（一）培养液（1）RPMI1640培养液：称取RPMI培养基9.8g，碳酸氢钠1.9g、青霉素100u/ml，加双蒸水至1000ml，调节 pH7.2～7.4无菌过滤冻存备用。（2）小牛血清商品：成都生物制品厂。（3）植物凝集素（PHA）：自制或成品（重庆药检所）。（4）pH调整液：5% NaHCO3溶液高压灭菌（8磅15min），0.1N稀盐酸液100ml。（5）秋水仙 ...