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        全血细胞培养染色体技术常用试剂配制

        互联网

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        一、国内实验室应用试剂配制

        (一)培养液

        (1)RPMI1640培养液:称取RPMI培养基9.8g,碳酸氢钠1.9g、青霉素100u/ml,加双蒸水至1000ml,调节 pH7.2~7.4无菌过滤冻存备用。

        (2)小牛血清商品:成都生物制品厂。

        (3)植物凝集素(PHA):自制或成品(重庆药检所)。

        (4)pH调整液:5% NaHCO3溶液高压灭菌(8磅15min),0.1N稀盐酸液100ml。

        (5)秋水仙素:10mg/ml无菌过滤高压灭菌(8磅10min)。

        (6)磷酸缓冲液:pH7.4。

        磷酸氢二钠28.8g(H2O)、磷酸二氢钾2.67g(无水),溶于1000ml双蒸水中,加肝素,终浓度为100u/ml。

        (7)Giemsa染色液:

        Giemsa粉剂           1g

        甘油              66ml

        在研钵中,加入少量甘油油仔细研磨然后放甘油全部加磨,60℃温箱中保温2h,冷却后加入甲醇66ml。装入有色瓶中混合待用。染色时用pH7.4磷酸缓冲液稀释10倍,随配随用。

        (二)固定液

        (1)甲酸:冰乙酸3:1混合即用。

        (2)PBS缓冲液配制:

        NaCl   16g   Na2HPO4(12H2O)   5.65g

        KCl   0.4g  KH2PO4        0.4g

        加双蒸水至1000ml pH7.0。

        取5%胰酶(生理盐水配制)1ml加入50ml PBS液中(最终浓度为0.025%),4℃冰箱待用。

        二、细胞培养(Bhatl B和McGee JOD,1990)

        1.完全培养基

        RPMI             76.0ml

        胎牛血清           20.0ml

        植物凝集素          2.0ml

        抗生素/抗菌素溶液(100

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