细胞技术

　　细胞系开发和单克隆性的保证是生产生物药物分子（例如单克隆抗体）过程的关键步骤。该过程开始于将编码目的蛋白的基因递送至靶细胞。在分离出能稳定表达目的蛋白的单个活细胞之后便可建立细胞系。该过程中的一个重要里程碑是记录克隆性证明，以确保细胞系的遗传可复制性。随后的步骤包括对克隆进行表征以提高生产力（效价），质量和稳定性（图1）。当前细胞系开发中的工作流程具有许多限制，包括细胞活力低，单细胞分离效率低和克隆性证据有限。有 ...

Ficoll：一种已灭菌的，特定密度的密度梯度离心介质。被广泛用作从外周血、骨髓及脐带血中分离高活性的单个核细胞。Ficoll-Paque溶液包含：Ficoll PM400：由高分子量蔗糖（Mr 400K）聚合物与表氯醇聚合合成(凝集红细胞)泛影酸钠：使溶液在低粘度下具有高密度EDTA二钠钙Ficoll的保存：开盖前保存在4℃~30℃（避光），开盖后保存在 4℃~8℃（避光）Ficoll 产品细分如下：使用Ficoll (1.077g/ml) 分离 ...

小鼠脑神经瘤细胞概述及培养方法！ 一、细胞介绍克隆 Neuro-2A 是由 R.J.Klebe 和 F.H.Ruddle 经 A 株白鼠的自生肿瘤建立。该细胞产生大量微管蛋白，此蛋白在神经细胞中起应答轴浆流动的收缩系统作用。二、基本信息平台编号：bio-73109拉丁属名：Neuro-2a细胞名称：Neuro-2a （小鼠脑神经瘤细胞）种属：小鼠 年龄（性别）： 组织来源：脑神经母细胞瘤，神经母细胞 生长特性：贴壁 细胞形态：神经细胞样、阿米巴样 背景描述：Neuro-2a细胞是由R· ...

1 介绍用于生产治疗性重组蛋白的哺乳动物补料批次细胞培养物的性能和产量取决于细胞对变化的培养环境的反应。广泛报道的一种提高哺乳动物细胞生产力的策略是基于在高渗条件下培养细胞的。例如，通过加入无机或有机渗透剂（如 NaCl 或山梨糖醇）来增加渗透压。但是，细胞比生产率的提高与细胞生长的降低相结合，通常不会在产品产量方面带来整体收益。双相分批培养或逐渐增加渗透压、渗透保护成分和随后的继代培养已被成功地用于克服细胞生长抑制的 ...

肿瘤干细胞对肿瘤的存活、增殖、转移及复发有着重要作用。从本质上讲，肿瘤干细胞通过自我更新和无限增殖维持着肿瘤细胞群的生命力。一、肿瘤干细胞的特性1、具有无限增殖和分化潜能肿瘤的发生是一个长期的突变积累过程，在皮肤及肠黏膜上皮等肿瘤的高发部位，衰老细胞不断地死去并脱离机体，只有干细胞是唯一可以长期存在的细胞，有可能积累多次突变而生成肿瘤干细胞，进而最终形成肿瘤。。2、比例小肿瘤干细胞主要通过两种方式分裂：一种是对称 ...

就如上新手进阶要点总结之后，笔者总结了一下免疫荧光需要特别关注的细节，以期作出更完美的图片效果。1、了解及预测蛋白的定位例如：下图使用肺动脉内皮细胞（ BPAE）观察线粒体的显色，采用 405nm，488nm，561nm 的激光，100x NA 1.49 的物镜对细胞内线粒体的分布进行简单的观察，此图可见，单纯的 mito-tracker 并不能清晰看见线粒体内部的结构和蛋白相关关系，因此，明确蛋白定位，根据所需分辨率选择显微镜、相应的荧光蛋白和 ...

由于细胞已经在生长培养基中悬浮，所以无需酶的作用使其从培养容器表面脱离，方法简单。材料准备：1、装有悬浮细胞的培养容器。2、完全生长培养基，预热至 37℃。3、37℃ 培养箱，充有二氧化碳浓度为 5% 的湿化空气。传代流程：一、直接传代法1、待悬浮细胞长满至 80%～90%（细胞悬液变黄），即可传代；2、用吸管吸弃细胞悬液 1 / 2～1 / 3；3、加入适量的新鲜培养基，继续培养。二、离心传代法（在发现有细胞碎片的情况下）1、将细胞悬液转移到离心管内；2、150 g 离心 5 min，弃 ...

贴壁细胞需要用到一种特定的试剂——蛋白酶，其作用是切断细胞和容器之间，细胞与细胞之间的相互粘连，用蛋白酶处理细胞的过程叫做「消化」，「消化」之后的下拨会形成单细胞并从容器底部掉下来。最常用的蛋白酶是胰蛋白酶。材料准备：1、预热培养用液：把已经配制好的装有培养液、PBS 液和胰蛋白酶的瓶子放入 37℃ 水浴锅内预热；2、用 75% 酒精擦拭经过紫外线照射的超净工作台和双手；3、正确摆放使用的器械：保证足够的操作空间，不仅便于操作而且减少污染；4 ...

我们可能都有过这样的经历：辛苦呵护的细胞，怎么也不愿意贴壁；贴壁了又很容易成块或者成团掉下来；原本贴壁的细胞，复苏后细胞不贴壁了；........遇到这样的问题你都如何解决？这次我们就来聊聊，为啥你的细胞为这么矫情，不愿贴壁呢？体外培养细胞贴壁与什么有关？首先并不是所有的细胞在体外培养的情况下都会贴壁，但大部分来自实体组织器官的细胞都会贴壁。贴壁的过程可能是这样的：细胞首先分泌细胞外基质，这种细胞外基质黏附在支持物的表面 ...

我养细胞有 8 年历史了，现在我的细胞已成为大家参观和崇拜、学习的对象。好的经验要分享，这就将我这几年来养细胞的经历和感想跟大家交流一下。启蒙老师的重要性一般进实验室都有师兄师姐带着做，他们就是你做细胞的启蒙老师。他们的操作手法、细节、理论讲解就成了你操作的准则，如营养液、细胞瓶的摆放位置；灭菌处理程序；开盖手法；细胞吹打手法等等。要学会他们的正确操作，在第一次的时候就要重视。好细胞要及时保种细胞要分批传代，这样即使有一批 ...

很多小伙伴在养细胞的时候，总是会出现这样或那样的问题，很多时候，那是因为你没有注意以下的细节问题，现在我们一起来看看：细胞培养前的准备在您带上手套开始细胞培养之前, 先检查一下移液管和瓶子的数量是否充足, 以免在开始实验后再次出入操作台，这样可以降低细胞污染的风险。细胞培养基也应先预热, 选择只预热部分培养基而非整瓶加热, 不但可以节约实验时间, 而且可以避免因反复加热培养基而造成的蛋白质降解。结束操作后, 别忘了培养基对光敏感, 应尽可 ...

目前，细胞冻存最常用的技术是液氮冷冻保存法，主要采用加适量保护剂的缓慢冷冻法冻存细胞。细胞在不加任何保护剂的情况下直接冷冻，细胞内外的水分会很快形成冰晶，从而引起一系列不良反应。如细胞脱水使局部电解质浓度增高，pH 值改变，部分蛋白质由于上述原因而变性，引起细胞内部空间结构紊乱，溶酶体膜由此遭到损伤而释放出溶酶体酶，使细胞内结构成分造成破坏，线粒体肿胀，功能丢失，并造成能量代谢障碍。胞膜上的类脂蛋白复合体也易破坏引 ...

本文总结了细胞趋化实验的原理及存在问题，并阐述了一种新型可视化细胞趋化实验工作原理及流程，同时介绍了相应的解决方案和系统搭建过程，并对该方法的优势进行了分析

养细胞是医学研究生的基本功。我养过骨髓 MSC、心肌细胞、心肌成纤维细胞、AD293 腺病毒包装细胞、PA317 逆转录病毒包装细胞。养得最多的是 MSC。有三个小经验和大家分享一下：1. 不要烧瓶口。大多数人都喜欢在酒精灯的火焰上关瓶子，觉得这样可以避免污染。不知道大家是不是有培养基怎么越用越发紫的困惑？知道为什么吗？烧瓶口烧的。培养基一般都是用碳酸 / 碳酸氢跟作缓冲体系。瓶口在火焰上的时候，炽热的空气进入瓶内。塞紧塞子放入冰箱后，空气变冷 ...

台盼蓝是细胞活性染料，常用于检测细胞膜的完整性，检测细胞是否存活。活细胞不会被染成蓝色，而死细胞会被染成淡蓝色。机理 正常的活细胞，胞膜结构完整，能够排斥台盼蓝，使之不能够进入胞内；而丧失活性或细胞膜不完整的细胞，胞膜的通透性增加，可被台盼蓝染成蓝色。通常认为细胞膜完整性丧失，即可认为细胞已经死亡，这与中性红作用相反。因此，借助台盼蓝染色可以非常简便、快速地区分活细胞和死细胞。台盼蓝是组织和细胞培养中最常用的死细胞鉴定 ...

1、 外泌体已成为生命科学/基础医学研究一大热点2018 年国自然基金评审结果已尘埃落定，其中医学科学部共计有 9830 项获得了基金委资助。从数据来看，热门的几个方向依然火热：外泌体、非编码 RNA、表观遗传、肠道菌群、m6A、CRISPR/Cas9 技术等，其中，涉及到外泌体的研究项目 401 项，总资助经费 1.7 亿元。哈尔滨医科大学李悦教授「外泌体 miRNAs 介导细胞间应答网络调控心房代谢重构在心房颤动中的作用与机制」获得了重点项目资助。外泌体中标项 ...

Fab-TACS® Gravity column 细胞分选重力柱应用实例Fab-TACS 技术简介Fabs-TACS 无痕亲和细胞分选技术 (traceless affinity cell selection, Fab-TACS), 以 Fab 片段为基础，基于 IBA Lifesciences 独家的 Strep-tag®/Strep-Tactin®蛋白纯化系统，进一步发展而来。Fab-TACS 运用免疫亲和层析的原理，使用细胞表面抗原分子 CD marker 中的 Fab 片段，进行捕捉及释放目标细胞。 ...

手动细胞计数弊端颇多，不仅耗时、费力，而且有明显的限制条件。工作中，常常会遇到「我刚刚数到哪了」之类的问题。现在，科学家们都开始青睐自动细胞计数了，因为这项功能不仅解放了人力（太棒了！），而且消除了手工处理的种种「误差」。Vi-CELL XR全自动图像式细胞计数及活力分析系统一切设计皆为消除细胞计数过程的种种「误差」Vicell Phase 1-2自动染色孵育：体积时间·精准「无差」百图连续拍摄：多点取样·置信「无差」标准程序判读：逻辑规 ...

细胞凋亡是一种在基因控制下的细胞主动死亡过程，通常表现为核浓缩，起皱，膜发泡以及DNA片段化。WB是研究细胞凋亡机理的基本方法之一，但是WB也不是谁都能做成功的，因为有可能你的第一步就做错了！用WB做细胞凋亡研究样品制备是第一步，样品制备方法至关重要否则会得到错误的结果和结论。样品制备，看你是不是这样做的：自配裂解液或者购买RIPA，加上样品研磨啊研磨，孵育啊孵育，然后离心扔掉沉淀（RIPA不可溶组分），取上清（R ...

据统计约30%细胞系被交叉污染或错误辨识，因使用了交叉污染或错误辨识的细胞而导致研究结论错误、结果不可重复、临床细胞治疗灾难性后果……，这浪费大量时间、精力和金钱。Everything was going along fine until they discovered their HeLa cell line expressed Y chromosome markers因此近年NIH、ATCC、Nature和Science等对此多次发出呼吁，要求研究者对细胞进行鉴定 ...