细胞技术

miaoduan 本人刚刚开始做实验，有关wnt通路的检测，想请教激活wnt通路的方法，看资料主要有三种：1，加wnt蛋白2，LiCl抑制gsk3β3，转染wnt质粒或者点突变的β-catenin质粒不知哪种方法可行，具体如何操作呢非常感谢！！！edwardellen 加wnt3a，看过一篇CANCER CELL是这样激活的liubodoctor 我也准备做关于wnt通路的，我做侵袭方面的。楼主可否多多交流。向你学习？QQ674 ...

lsdcfhyj 以及检测PARP的裂解前后蛋白水平用的抗体是否都是一样的？edwardellen 有两者都识别的，也有专门识别剪切体不识别酶原的，用过cell signal的，两种都很好用。PARP也有可以同时识别全长和剪切体的抗体。magichunter 检测caspase-3和激活型的caspase-3分别需要两种不同的抗体，一般CST公司卖的分别包括：cleaved-caspase-3（#9664）和原形态的caspa ...

xyqtf 如题！那么NF-κB属于哪一类？谢谢！xyqtf 啊，这个研究信号转到的版块，还没有兄弟分清这个概念吗，还是太简单不消一顾。谢谢能帮助我一下。doctormy xyqtf wrote:如题！那么NF-κB属于哪一类？谢谢！NF-κB是核转录因子，不属于炎症介质or炎症因子。查阅了最新版的八年制病理教科书，只找到炎症介质的定义，未找到炎症因子的定义或提法。zfyyzz00 doctormy wrote:NF-κB是核转录因子，不属于 ...

wowis 研究生复试结束老板给个任务叫找些研究signal pathway的大牛的文章先读读可是我不知道如何获取这些大牛们文章请知道的前辈告诉几个这方面的大牛或者告诉一下如何自己去找到先谢谢了！haonan_1985 可以先用信号通路signal pathway为关键字在google学术或pubmed等数据库中搜索找到影响因子在15分以上的文章，里面的作者基本上可以称为信号通路牛人了ylhuang0502 其实这个老 ...

ssair 各位，请问质粒pFLAG-CMV2中的pFLAG是什么意思？hyjtb 如果没有估计错的话，应该是从一种有鞭毛的菌中提取出来的治理改造过的载体，如果有谁知道得更确切，指点一下大家。。赫赫。。zhujoker 只是载体上的一个标签，可以用于构建融合蛋白，以便于检测抗体不好的蛋白。yabxxh 严重同意版主的签名本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实验方法的你，都可以成为师兄的好伙伴师兄微信 ...

wangbing2053688 哪位大侠有CHO细胞偏爱密码子，请不吝赐教，谢谢！freecell http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/17086290http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/9358069wangbing2053688 非常感谢！wangbing2053688 不知哪位大侠能不能将表格发给我啊？文章下不下来啊！wangbing2053688 没有人理我啊？有没 ...

cdongni 我测蛋白质用的是Bradford法，实验室的酶标仪只有570nm 没有595，请问大家，用570测稳定吗？准确吗？我现在的R2只能到96！zhujoker 这个问题你只能问公司了？最好还是找一个595nm测吸光度的。但是做流失时像这种差距还是能做的，但是不知道是不是也适合测蛋白？dlzhangyu 可以的。以下是来自碧云天的说明书：使用说明：1. 完全溶解蛋白标准品，取10μl稀释至100μl，使终浓度为0.5mg/m ...

shuaibo2008 新手请教各位高手，我准备做AngII的相关实验，不知道如何分装保存，是买来的全都-20°C分装保存，还是先称取一部分分装，如果是称取部分的话，能用0.22um的滤器滤过吗？说明书很不详细啊。期待帮助哦，太感谢了zhujoker 你一部分分装也是分，还不如全分装。只要分装无菌完全可以不过滤的。侠骨仁医 如果不是在短期内使用的话，我建议你分装粉末，而不要溶解，因为溶解稀释后，浓度相对较低比较容易降解；如果万一 ...

luowen__ 各位前辈：小弟是刚开始做实验的研究生，老板要我检测组织中的BCL-2，Bax和caspase-3的表达。但是检测方法却没有具体说明。我想请教各位前辈有没有做过以上三种因子的检测，是用WB、RT-PCR检测，还是买专门的试剂盒检测，或者还有其他的方法？另外，什么方法检测比较便宜（我老板的经费不多）？小弟在这里先谢谢了！magichunter （1）经典的方法还是做WB，当然抗体比较费钱。（2）有专门测定caspa ...

summityoung 请问大家，用最普通的HEK293细胞能包装慢病毒码？谢谢freecell 从文献上看，已经有多篇文献报道了用HEK293来包装细胞。但是包装的效果可能没有其它293衍生细胞好。例如293FT来源于293细胞，293FT和293T细胞一样，都是转化了SV40大T抗原的293细胞的一个衍生物。这些细胞系具适宜的包膜和高表达反转录酶，能提高逆转录病毒的滴度。与293T细胞相比，293FT生长的更快， ...

longytu 将两种荧光蛋白质粒导入细胞，观察FRET信号，怎么样给相互作用的两种蛋白定量？应该从哪个角度着手，荧光强弱，表达浓度？大家有没有更好的方法来活体细胞内定量蛋白质？版主freecell留言:自己提出解决问题的方法，然后请别人点评，这才叫“讨论”。你这个帖子纯粹就是求助，何故冠以“讨论”之名？freecell 质粒转染细胞后，可以通过流式或者WB，对蛋白进行粗略的相对定量。longytu 谢版主的回复。。。除了流式和WB ...

zj000718 想请问各位大虾 如果损伤致凋亡模型中，经典凋亡途径（caspase-3为代表）表达很好，还会有AIF等非caspase依赖性通路存在吗？(怎么验证他们之间是否存在交互效应呢)如果想从体内抑制caspase通路 什么方法比较可靠呢？基因敲除、局部注射siRNA、局部注射广谱caspase通路抑制剂？？？是否有比较确切的方法呢？？？请做过这方面研究的大神们指教，谢谢!!!freecell http://www.google. ...

徐州往事 我想做大鼠的p38MAPK的试验，需要用到SB203580干预，请问在大鼠中，SB203580的给药途径和剂量，最好能提供相关文献。谢谢piaopiao5556 彼此彼此 ，我也做这个的 各个文献用量不一样，尤其关于大鼠的很少，看到一篇要用到50mg/kg。实验1小时前给药，哪来这么多钱啊？624980241 侧脑室 给药的量是 多少啊 ？ldmin 貌似从1mg/kg——10mg/kg都有人在用。。。大鼠。。。。我也在查，，我打算用1mg/kg ...

lifengna 各位战友，最近在做雷帕霉素对mTOR通路的抑制试验，培养的是C2C12细胞，在分化阶段进行干预，其中一组单独添加50 um/L雷帕霉素，奇怪的是不仅没有抑制C2C12的分化，反而比空白组更好，这是怎么回事呢？排除实验操作中的问题。谢谢大侠出手相救！zhm1212 你做雷帕霉素50 um/L，这个浓度难道不高吗？有报道称全血中雷帕霉素安全有效的浓度窗为5．5～16．4 nmol／Lbubu88 你是用的哪个公司的雷帕霉素？ ...

forevercan 想请教下园子里的各位xdjm们一个问题，那就是LY294002：PI3K/AKT阻断剂的问题，LY294002是PI3K通路的阻断剂，他到底是阻断了PI3K的蛋白表达，也就是说使PI3K的蛋白得表达下降了；还是阻断了PI3K蛋白的磷酸化，说明书只是说体外培养的细胞加入该阻断剂后，可以抑制AKT的磷酸化，但是对PI3K的蛋白及其磷酸化PI3K蛋白的改变未提及。请指教。forevercan 自己顶一 ...

tang1227 绿色荧光转基因小鼠的皮肤移植到普通小鼠身上N天后，肉眼看到皮肤明明还在，但是荧光显微镜下却看不到荧光，这是为什么？是不是荧光会自身淬灭？还是有其他原因？zjubell GFP小鼠荧光很强的，见附件，我这只是全身表达GFP的。在UV下照，裸露的皮肤都能看到荧光。怀疑你的皮肤已经坏死了，那不表达这个蛋白了，自然就没荧光了。bigbang_0_0 zjubell wrote:你的皮肤已经坏死了纠正一下，是你的小鼠的皮肤 ...

brainpower 对大鼠进行体内转染，Muramatsu等报道在材料一致的情况下，电穿孔法的基因导入和表达效率明显高于其它方法，且适用于多种组织的操作。可是现在又不提倡电穿孔法了。因为实验经费的问题，我又不能去将一些转染方法进行对比。求助体内转染哪个方法转染效率更高？freecell 体外转染取决于细胞系，体内转染取决于组织和转染分子，不能一概论之。brainpower 谢谢你的解答。我是想转染到大鼠的腓肠肌上。那么 ...

einstan001 最近本人正在做缺氧复氧诱导细胞凋亡实验，实验对象为贴壁细胞，诱导完凋亡后须收集细胞提RNA和蛋白并检测一些凋亡相关酶的活性与表达，在缺氧复氧后出现大量漂浮变圆的细胞，由于我采用采用胰酶消化的方法收集细胞后提RNA和蛋白，由于消化前需将原培基倾倒掉并用PBS洗涤细胞，因此这些漂起来变圆的细胞大量丢失，请问这些漂浮变圆的细胞我需要收集吗？这些细胞的丢失对我的实验结果影响大吗？谢谢hggjoy 需 ...

jchent 有意研究wnt信号通路，但是生手不知如何下手。看到一篇文献做的是鸟的wnt相关基因表达，我想换一种动物模型，比如将鸟换成小鼠，将来可以比较二者的不同。不确定这是否可算作是科研创新？意义大吗？非常感谢！！qingguyouquan 我认为不算科研创新，是跟在别人后面走而已。不过也可以了，如果结果好的话毕业时没问题的。严格意义上的创新基本上是别人没怎么做或者没怎么涉及的，而你从另一个角度独辟蹊径，取得了一定成果 ...

cathrynyy 请问各位大侠：我想做Fn铺板的细胞粘附实验，可是查了半天，发现有好多种，究竟用哪种型号的？哪家公司又便宜，又好用呢？谢谢！freecell Fn=纤维连接蛋白 ？究竟哪种好用，取决于所在实验室条件。同样的东西，在不同的实验室有不同的结果。一般用这个： Fibronectin, bovine plasma (Sigma, cat. no. F1141)cathrynyy 谢谢！可是我做的是人的肿瘤细胞，得用人源的吧？bovine plasma可以么 ...