细胞技术

barin 前期的石蜡IHC结果发现某某基因在指定类型肿瘤中是高表达的。请问用什么指标、方法检测该基因在指定肿瘤细胞株凋亡和增值好呢？barin 看来只好留着自己解决了。ylhuang0502 1. flow cytometry or other techniques to detect apoptosis2. MTT assay for cell proliferationgood luck!barin 谢谢楼上的。chuckdouble barin wrote:前期的石蜡IHC结 ...

shuaierhu 大家好，最近在做悬浮细胞的实验，要观察药物对细胞的杀伤作用，想请问各位高手，除了mtt，台盼兰染色外，还有没有别的方法呢？barin 我想流式是可以的吧？shuaierhu 我们这里流式坏了，现在准备用hoechst试试，谢谢楼上啊！本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实验方法的你，都可以成为师兄的好伙伴师兄微信号：shixiongcoming

woowe97417 要转一个带氯霉素抗性的质粒到DH5α保存，但是发现用的DH5α对氯霉素不敏感，氯霉素是用无水乙醇配的，有做过类似实验的站友帮忙解答一下，谢谢啦！gingivalis 严谨型质粒 25 ug/ml松弛性质粒 170 ug/ml《现代分子生物学实验技术》--P753 (卢圣栋)DH5α应该对氯霉素敏感，如果在上述两个浓度条件下，DH5α能生长，那就是DH5α出问题了，高压灭菌后扔掉，换新的重做。woowe97417 谢谢楼上的， ...

真爱满行囊 我最近在体外细胞做的关于gsk3-beta功能问题，发现药物处理以后，gsk-3-beta的总表达量下调，如果是这样的话1、我是否能够得出gsk-3-beta的活性下调的结论？2、是否还有必要做非活性形式的表达量？我的理解是，基础状态下，gsk-3beta维持的是低活性状态，如果总量都下调了，那应该能够得出活性降低的结论了吧？3、另外，在这种情况下我是否有必要去做gsk-3-beta的216位点的活性形式的表达 ...

shejun1000 如题，图片：有些疑问，如果做细胞粘附方面的研究，可从哪些方面指标入手呢？请前辈们多多指点，谢谢！adamsw 建议你做一个方面的研究之前先把教科书上相关的章节看一下，譬如把molecular biology of the cell上关于细胞粘附和细胞外基质那章看看，之后你看这张信号图就有门路了。adamsw 最常见的和细胞粘附相关的分子integrin，cadherin，selectin等等，你看了我上面说的那本叫 ...

adamsw 请问对于endosome，尤其是early endosome，其形态主要有两种，一种是小点状，vesicle like，另一种是tubular like，请问这两种形态代表着endosome的功能方面有什么不同吗，查了好久了没有查到，有哪位达人有这方面的文献吗，感激不尽。freecell 在图书馆借本这个书看看： Endosomes and lysosomes: a dynamic relationshipadamsw freecell wrot ...

张华高伟忠520 :o)一顿饭 你应该查查文献可以看到吧，老大？就算查到了，不同的实验室或许条件不一样，我还是建议你用比如用5uM,10uM,20uM,50uM,100uM做个梯度，然后用WB检测阻断情况。选择完全阻断最小的剂量做你后面的实验。因为剂量越大，非特异性阻断作用越强，而你得到的数据说服力越小。如果需要可PM我，我有一些关于阻滞剂使用的文献，蛮不错。2008851029 我想问一下，通路抑制剂的贮存液怎么贮存，我买的抑 ...

恬馨儿 focal adhesion turnover比如这三个单词我们都认识，可是三个词连起来是什么？ylhuang0502 楼主提了一个好问题，是否和译为“黏着斑周转”，因为"focal adhesion"不是固定不变的，所以要"turnover", 其实只要理解意思就行啦，至于贴切的译法，就不用太在意啦。恬馨儿 呵呵，谢谢。但是我想引用这句话，所以想要一个贴切的译法。不过你现在的译法译得比我好，谢谢了！恬馨儿 粘附迁移？还是局部粘附迁移？还是粘 ...

free123 请问各位高人，如果ip证实A蛋白与B蛋白有相互作用，如何研判两者的作用是受体配体的作用还是一般的蛋白相互作用？谢谢！gingivalis 我倾向于不要把 蛋白质之间属于受体配体结合还是其他相互作用区分得如此严密。受体配体原指胞外信号分子（主要是化学小分子）与膜受体之间的相互作用。其特点是特异性，高亲和力，饱和性，可逆性，引发生理反应，比如G蛋白。（胞内受体配体也是同样的，比如核受体）从这几点出发，要区分两（多）个 ...

pozeta 我做的是梗阻性黄疸的大鼠模型，想要测定模型的肝细胞内钙离子浓度，有什么具体方法呢？希望园子里的前辈指教！！ylhuang0502 这方面的文献，非常多，自己先看看文献，这方面的文献绝对成千上万。常用的Ca2+ indicator如fura-2, fura-4，你如果要测绝对浓度，则需要钙离子标准液，要麻烦一些。pozeta ylhuang0502 wrote:这方面的文献，非常多，自己先看看文献，这方面的文献绝对成千上万。常用的 ...

sakura042 本新手欲研究nfkb引起内皮细胞凋亡的机制：是否通过jnk通路。这是否是一个信号通路串话的问题？我们用特异性抑制剂阻断nfkb后发现jnk活性下降，是否就能说明nfkb促进内皮细胞凋亡是通过jnk通路呢？还需要再阻断或者过表达jnk通路来反证吗？这个问题困扰了我好久，请教各位高手。sakura042 自己顶一下三叶虫 请问一下你是通过什么方法检测NF-kB的活性的?sakura042 我就做western ...

edwardellen 求助！！！本人菜鸟，最近开始接触凋亡相关信号，在HepG-2中做实验，有一点很困惑，HepG-2中的p53是野生型的还是突变型的？还是两者都存在？查了一些资料，有些文章之间表达的意思模凌两可。困惑啊！哪位好心的达人能给我一个确定的答案呢？另外，是否有做p53相关的牛人能告诉我P53在哪些实验用肿瘤细胞系中是野生型的，在哪些是突变型的？谢谢！谢谢！谢谢！doctormy HepG2是p53野生型的。如果你 ...

wxhong 大家好，最近加入了一个课题，由于本人经验很浅，于是上 来向大家讨教经验。我把我们的实验流程写下了，大家帮忙看看，给写建议，谢谢大家对细胞染毒----CCK-8法测IC50-----以 IC50为最高浓度递减对细胞染毒----通过Western blot做目标蛋白的表达量变化----使用重叠PCR法将TAP基因立连上目标基因----构建pcDNA3.1/重组载体----荧光定量PCR和 Western Blot检测组合蛋白的表达-----用TAP法 ...

antonio2001 调节细胞增殖 的信号通路有哪些？ 那个最重要！！sakura042 Akt通路？ylhuang0502 PI-3K/AKT肯定可以，但问题是，谁最重要？还真是一个好问题？！期待高手回答。chuckdouble antonio2001 wrote:调节细胞增殖 的信号通路有哪些？ 那个最重要！！这个问题好比,一个光棍在找对象时问别人"好女人都有哪些,哪个最好?":D:Dylhuang0502 chuckdouble wrote:这个问题好比, ...

bailamo27 这个问题可能是因为我基础不好吧，所以一直没弄懂，在研究中DNA/mRNA/蛋白水平的研究有何不同？为什么有些时候用PCR，有时候用RT-PCR，有时候用Western blot？例如，对于某个信号蛋白，文献报道有突变体，即在其某个外显子上有几个氨基酸的缺失，那么要研究这个突变的蛋白的功能应该在哪个层面呢？应该用WB吧，看其下游信号通路蛋白的表达变化？那有的文献又报道下游通路的关键蛋白的mRNA的变化， ...

fukota 如果A抑制B,B抑制C，能否证明他们在一条通路上？A通过B抑制C?这种逻辑好像很奇怪耶~fukota 怎么没人说话哩bianbenjamin 信号传导通路实际是一个异常复杂的网络，是网络，不是单线图，一个蛋白与多种蛋白有相互作用，尤其是一些关键节点蛋白，如激酶，磷酸酶等等，所以你说A抑制B，B抑制C就说它们在一条通路上，好像没有什么意义。我们目前所知道的信号传导通路都是在大量文献总结和大量实验验证下推理出来的， ...

山百合 最近想测细胞内钙离子的变化，由于实验室条件有限，只能去外单位用别人的共聚焦显微镜看。但我的老师提出了问题，钙离子浓度是实时变化的，是否在处理之后有累积效应？我担心的则是处理后用Fluo-3 AM负载后到去外单位检测中间至少有半小时到1h，胞内钙离子会不会变化？（因为我的处理因素是磁场）这段时间是否荧光会有淬灭？我想了想，是否可以用固定剂将细胞固定上？查了些资料，貌似钙离子都是要借助通道或载体来运输的，固定好的细胞 ...

不要太懒哦 请教各位高手，如果在细胞的消化传代过程中，我想以EDTA替代胰酶对细胞进行消化的话，EDTA的配方？？？浓度？？多谢！！佳杰宝贝 EDTA可以代替胰酶吗？黑糊糊2000 EDTA 不能代替trypsin,EDTA是螯合剂结合钙离子的，钙离子可以抑制胰酶的作用，所以采用胰酶和EDTA一起来作用，当然EDTA 因为对螯合细胞结构之间的钙离子的作用，所以对细胞有一定程度的离散作用，一般多用的浓度是0.02% 可以用不含钙镁的平衡盐溶 ...

rainbubu 想研究β-catenin在某肿瘤中和细胞增殖和预后的关系，材料用存档的蜡块和冰冻，想用免疫组化来检测β-catenin的表达情况，然后想检测β-catenin的表达和细胞增殖的关系，能不能简单的看β-catenin和PCNA、ki-67之间的关系，有统计学意义就得出β-catenin和细胞增殖有相关性。但是也不能说明细胞增殖就是β-catenin表达异常的结果啊那么怎么才能说明β-catenin和 ...

hljzyydx 最近看到一篇文章，里面提到了5'-deoxyribose-5-phosphate(5'-dRP) lyase以及5'-dRP/AP lyase的概念但是我查了半天也没搞明白这到底是指什么，请各位好朋友指点！！谢谢大家了。。freecell http://www.brenda-enzymes.org/php/result_flat.php4?ecno=4.2.99.B1http://www.pnas.org/content/95/21/ ...