细胞技术

sophiaying 有哪位用过SB203580盐酸盐么？说是水溶，但是溶解性很差啊，我按照说明书配成10 Mg/ml，但加生理盐水50度加热了4个小时都没溶啊，期间还无数次涡流震荡，哪位能给些建议么？xiaoxiaoga 用DMSO溶解试试看，先用DMSO溶解成高浓度溶液，再用培养基或者二PBS稀释成使用液selleckchem01 SB203580一般是先用DMSO溶解作为母液储存~使用时在用反应液稀释到相应的浓度。本文 ...

kadvc 我今天打算从组织中提纯线粒体，随后从中提取RNA，但是我今天进行不完，所以我想明天提取RNA，但是如何保存线粒体我不知道。我提纯线粒体用的是QIAGEN的试剂盒，最后要把线粒体放入storage buffer。然后可以保存到明天吗？多少度呢？求大神们帮助，感激不尽！！！！2004seedfive 你好！我是做植物的，不知道你说的质粒提取试剂盒是否适用，谢谢上海丰核信息技术 线粒体提取出来，最好尽快做实验。线粒体是能量合 ...

lin123heng 各位战友前辈，最近在研究一转录因子在细胞分化中的作用。想把课题在深化一下，想查找一下该转录因子的上游。请问应使用什么样的试验方法，有没有相关的参考文献。不胜感激。spyl 同样的问题，希望有人赐教浸润性生长 我也是一个初学者，不知我的想法对不对，供参考。先通过shRNA干扰找到转录因子基因的表达调控因子，再通过CHIP来寻找表达调控因子的基因。liangxiaolei 你这是要往上游推，首先通过UCSC或 ...

stb1986 PCR产物492bp（经过测序验证），可是多次琼脂糖电泳条带却明显比500的marker要大（如图），不知原因是什么呢？GC比例为30%,可是G+C与A+C的分子量差别不大啊，请问有战友试过类似情况不？原因何在？谢谢！liupeiyanxiaohai 我也遇到过， 认为是maker不准，可以换个marker试试qst1981 我也遇到过一样的问题 我想是不是 marker的成分和咱们的loading buffer的成分不一样 ...

silencese 删选了一两个月获得的稳定转染株（带荧光）发现不发光了再删一段时间又发光这是怎么回事大家有没有碰到这样的问题有经验的能不能解答一下，谢谢了雨珠儿 你的问题问的很不清楚啊、、、、、shylook 可能丢失了吧瞬转筛稳转容易出现转移的情况silencese 稳定转染成功的细胞株是一直发光的对吗？本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实验方法的你，都可以成为师兄的好伙伴师兄微信号：sh ...

yun126126 看了不少中药作用机制方面的论文，不少以基于-----信号通路研究---中药的作用机制研究为题目。请问各位老师，信号通路应该存在有不少条，为何选择某一个通路研究，而不选择其他的呢？是不是有什么仪器可以筛选发现药物对这个通路有作用，还是其他的原因呢？本人对这个问题不懂，请各位老师给予帮助，谢谢！fghostyun 先做一个基因芯片，通过Pathway富集分析，获取最重要的几条信号转导通路，然后通过Gene Onto ...

雨米儿 请问各位老师，我在看文献的时候都是看到先加PDTC预处理半小时或一小时，然后换成有激动剂的培养基，请问这个时候还需要继续加PDTC吗？（预实验：我的细胞加入PDTC孵育4小时左右就几乎全部死亡，所以应该加不了24H的PDTC）急盼回复~谢谢catherinechou 我现在也想了解nf-kb阻断剂PDTC的使用方法，想必大师你已经解决，还希望多多指导，如果能有PDTC阻断NF-κB路径的机制的相关文献，那将不胜 ...

forsisiteryu 各位大侠：请问 ERK 1/2 MAPK 抑制剂 PD98059对总ERK 1/2有影响还是只对磷酸化的ERK 1/2有影响了？是否有文献支持？多谢！huaina120 文献有很多，PD98059是ERK通路的抑制剂，而不是MAPK的抑制剂，对其他通路没有影响。别的通路有P38等。你可以去查文献 ，很多的蛋蛋豆豆 抑制总的ERK，不让其磷酸化selleckchem01 PD98059是ERK的抑制剂，主要是抑制靶点的磷酸化水平~ch ...

诬蝳娃娃 我在HEK293细胞中表达的蛋白能在胞质中形成聚集体，我想将细胞裂解，但是又不想让聚集体变性，RIPA buffer含有1% SDS，蛋白变性能力太强了，求能够温和裂解细胞，又不使蛋白变性的裂解液配方~非常感谢！！xhjggl 可以使用附件里的方法诬蝳娃娃 非常感谢~！本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实验方法的你，都可以成为师兄的好伙伴师兄微信号：shixiongcoming

magichunter 研究背景：已知抑制JNK激酶的活性可以实现药效A,这已经是被反复证明的了.而目前我在实验中发现，药物A可以抑制JNK激酶的活性，并且可以实现药效A。我的问题是：如何证明药物A是通过抑制JNK激酶的活性来实现药效A的？我目前只能想到的做法是：采用JNk的特异性抑制剂处理细胞，如果可以实现药效A，则可以旁证药物A的作用途径。但是这并不能提供直接证据，因此求问是否有其他更好的办法？大鹏鸟 药物A有没有 ...

wubin6638 请问有没有操作步骤可以分享一下的MTT要求细胞数量较少而转染的时候要求细胞达到80%以上这个矛盾怎么解决呢？shylook 转染24h后可以传下代最好只做一次传代再传就不推荐了wubin6638 shylook wrote:转染24h后可以传下代最好只做一次传代再传就不推荐了可是是瞬时转染的啊没法传代的吧shylook wubin6638 wrote:可是是瞬时转染的啊没法传代的吧短期是可以的24h传代 8h ...

1057244563 我的重组质粒测序是对的，但是转化到另外一个大肠杆菌里涂板后长出来一片，阴阳对照都是这样，根本没有单菌落，一个划线的平板上却长出很多细小的菌落，这是什么原因啊？shylook 转化到另外一个请问另外一个 是对照哪一个讲的？一个划线的平板 是指什么lz提的问题 太模糊了不知道怎么回答你1057244563 不好意思，没说清楚。我的连接产物转化到一种大肠杆菌里，长的很好，提出质粒并PCR，测序结果是正确的。但是把提出 ...

sin_007 本人近日做TOPflash实验检测wnt通路的激活情况，遇到些许问题，希望做过TOPflash assay或了解wnt通路的战友解疑答惑。1、看了些相关文献，既有分别转染TOPflash和FOPflash，结果用TOP/FOP值来表示的；也有只转染TOPflash，然后就用TOP值来表示的。不知这是什么原因，在什么情况下不用FOP？ 我因为刚刚接触，用的是分别转染TOPflash和FOPflash，但遇到了 ...

chaleneg 对RNA正在学习中，有点搞不明白microRNA和siRNA了，两个有多少不同点呢？请高手指教啦！lwx920 推荐你去看一下，这个帖子，里面楼主归纳了很多关于miRNA知识！http://news.dxy.cn/bbs/thread/10069790?keywords=非编码RNA的研究现状PPT#10069790liubingood 我查了点资料，共同学习：小的干涉RNA（small interfering RNA; s ...

折翼的老鼠 各位大侠，我是一个新手。最近看NFκB通路，想知道测NFκB的mRNA表达量有意义么？还是IκBα的mRNA表达量可以代表NFkB的。希望不吝赐教！折翼的老鼠 丁香园里面的大虾们，咋都不见了呢。ronaldo_zj 楼主您好！对于NFκB通路以及您的问题，我有以下几点建议吧：1. 我不知道楼主您是单纯想看NFκB通路有没有激活还是NFκB的表达量的改变？两者其实还是有区别的，因为单纯的NFκB量的改变（无论是mRNA ...

syzh1030 如题，看到一篇文章，讲Cux1蛋白的。其中讲到Cux家族成员有p200、p110、p75、p90，等，p200有三个cut重复域（CR）一个同源结构域（HD）,想请问下这个p多少到底怎么理解谢谢~woxingwosu 那是命名一个新蛋白的时候，就干脆用p代表protein，以及蛋白的分子量大小来命名，形象直观。liangjian9007 是，同意上面楼主说的mannitolzju 同二楼本文由丁香园论坛提供，想了解 ...

wolfdance 我同事从植物提取物中获得了一个小分子化合物，已经证实这个化合物可以跟A受体结合从而引起相应的效应。我同事现在想知道该化合物在A受体的结合位点。估计要用到点突变技术，请问哪个实验室或者公司有类似的外包业务。价格大概多少。除此之外还可以采用什么方法。请各位专家不吝赐教！谢谢！laforet 自己买引物和Pfu酶就可以做点突变了，很简单的，只需要最基本的分子克隆知识。wolfdance laforet wrot ...

淡墨留痕 我们最近在培养ＨＣＴ１１６细胞，发现其状态不是很好，很容易扎堆生长，用胰酶消化的时候也是一团一团地被消化下来，很难把它们吹散成一个一个细胞。而且长得也挺快也挺不均匀的，传代的第二天，有些地方就长得满满的了。想请教一下这是为什么呢五月鱼 你好， 我养的细胞和你一样，消化下来也是一团的，但吹打以后就没有这样的情况了。建议你分皿前还是要吹匀，分皿后在镜下看一看，移动培养皿的时候尽量动作轻，避免晃动。tianyayangg ...

ww_e00 我要研究Akt、PTEN蛋白在接受处理因素后的变化情况。参考一些帖子和文章，看到：5min-120min用于研究受体传递放大信号；2h-48h用于研究细胞接受信号后出现细胞周期变化、出现特定生物行为等。于是我设计了几个时间点：15min, 30min, 60min, 2h, 4h, 8h, 16h, 应该足够研究细胞接受处理后出现的短期长期变化情况了吧？fungicider 既然你查文献中是到48小时，为什么你设计的最长是到16小时？ww_ ...

drmine 假设某基因的DNA序列是：5'-GAACT-3'3'-CTTGA-5'问题一： 对 该DNA进行体外转录，得到的RNA序列是什么？问题二： 该序列对应的mRNA序列是什么？假设mRNA序列是5'-GUUCU,问题一：由该mRNA反转录得到的cDNA序列是什么？问题二： 针对该mRNA的siRNA序列，sense strand是什么？谢谢。lifz2001 1.到的RNA是5'-AGUUC3'基因组DNA在转录后经过剪切和拼接得到mRNA。 ...