细胞技术

mirror122 大家好，下面这篇文章我在PUBMED上找不到全文，大家谁能找到全文麻烦传给我吧，非常感谢！Blood. 2011 Jul 14;118(2):413-5. Epub 2011 May 20.CirculatingmicroRNAs let-7a and miR-16 predict progression-free survival and overall survival in patients with myelodysplastic syndrome.zzjjzhoujing ...

流产 请教各位高手，我初涉信号转导方面的实验，想用EGFP表达一段编码信号蛋白的真核序列，这样就会使GFP蛋白和信号蛋白融合在一起，好处是转染的时候比较方便，不用大量的做验证工作，但GFP蛋白相对较大，我担心GFP蛋白会影响信号蛋白的空间结构，使得不能发挥正常的生物学功能，请教有经验的高手，有什么建议？请赐教paroxysm 融合蛋白可能会影响目的蛋白的亚细胞定位这也是标签蛋白为什么都很短的原因之一大鹏鸟 标签蛋白太大 ...

xiangcate 做动物血管免疫组化结果显示药物能抑制nf-kb通路，并下调MCP-1的表达，但对同样是nf-kb通路下游的IL-8，ICAM-1没有下调作用，如何解释？谢谢！xiangcate 有人知道吗！microlabm300 可能IL-8有其他通路的串话调控paroxysm 很正常。严谨的话，需要染色质免疫共沉淀来确定NFkappaB的下游基因的调控。xiangcate paroxysm wrote:很正常。严谨的话，需要染色质 ...

Drnw 我在紧接翻译区后的3‘UTR区发现一个突变，但如何预测3‘-UTR区的突变是micoRNA结合位点，并与基因的表达有关。急求！！万分感谢！！lide658 把这个基因的名字输入到microrNA预测软件中，然后看你所发现的突变位置是否有microrNA结合，然后再看是不是突变位于种子序列中，如果是可以进一步研究突变与否是否会影响microrNA的结合，进而影响到基因的的表达。Drnw lide658 wrote:把这个 ...

wangch84 最近要构建miRNA的表达质粒，要设计引物从基因组中扩增目的基因，发现一些文献里设计引物时用的模板序列是基因组DNA模板序列的反向互补序列，不知具体原理，请赐教。大鹏鸟 DNA是双链啊，PCR扩增出来就都包括了wangch84 to大鹏鸟，有些miRNA位于正链，有些位于负链，具体原理找不到liangpz 这个跟载体有很大关系，取决于载体promoter的方向。如果载体promoter是反向的话，就是这样了 ...

xun梦中 各位大侠好，想请教一下，DNA跑完琼脂糖凝胶电泳，EB染色之后还能做切胶回收吗（排除毒性问题）？在此先谢过各位侠们了啊hdlhq 可以 没有问题shylook 就是得EB染色后你才能看到条带切胶回收呀。。。xun梦中 恩，用Loading buffer作指示的话就得染色。先谢过了啊本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实验方法的你，都可以成为师兄的好伙伴师兄微信号：shixiongcoming

summer027 各位站友，小弟打算做干预手段对Akt、TSC1/2、Rheb、mTOR、4E-BP1、P70S6K、AMPK磷酸化表达的影响，不知道有没站友知道做这样的实验大概要花多少钱呢？主要是试剂方面的。另外，请问判断mTOR信号通路的变化是用磷酸化表达还是用mRNA表达来反映更好呢？请各位大大指点！！！谢谢！！！zhibinx2007 试剂主要是磷酸化抗体，每种大概3-4000左右，做mTORx信号通路主要是用AKT ...

dongfangzhizi06 打算培养成骨向诱导BMSCs，请问：诱导剂是溶于培养基中保存（4度和-20度）呢，还是单独保存每次用时再混于培养基中呢？如果是后者，又该在什么温度下保存？dongfangzhizi06 自己顶一下！ruiteluoshuixiu 我觉得是要单独保存啊，如果混了的话，容易影响效果的dongfangzhizi06 谢谢！本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实验方法的你，都 ...

小红赛 Lentivirus shRNA-mediated Knockdown of NF-2FG12 lentiviral vector, with an independent open reading frame of green fluorescence protein (GFP), was used to produce small, double-stranded RNA (siRNA) to inhibit target gene expression in targeting cells. To construct the hairpin s ...

我是风儿 请教各位大侠：最近准备用腺病毒作为载体，将某受体的hs-RNA 尾静脉注射干扰肝脏组织的该受体表达，好像hsRNA干扰用于动物模型的研究不是太稳定，请问有哪位高人做过类似实验，给予指点：1、这种干扰方法的效率如何；2、这种干扰作用持续的时间？如果想保持这种干扰作用更长时间，需再次注射？请高手给予指点！谢谢师兄师姐们。乐观自信 你好！有个疑问你从尾静脉注射腺病毒怎么能保证在肝脏组织高表达该ShRNA？为何不直接注射到 ...

zhoujianheng 求助哪位大侠有完整的雄激素受体（AR）信号通路图，请提供帮助小熊and大熊 楼主现在有了么？能分享一下吗？zhoujianheng 楼主雄激素受体信号通路怎么才能看到呢？candyyoung 楼主如今是否找到？能否共享给晚辈，谢谢感激不尽！ ***版主dachong99留言:园子不允许留邮箱，站内消息沟通即可xvyipeng 求转发雄激素受体（androgen receptor,AR）信号通路图，×××××版主dach ...

烟雨无心客 请问大家有知道炎症信号通路中TNFa的特异性抑制剂是什么的吗？如果有文献最好。万分感谢！xiaoxiaoga Lenalidomide (Revlimid)Pomalidomide这两个是TNF-ALPHA的抑制剂，xiaoxiaoga References on Lenalidomide (Revlimid): H Quach et al. Leukemia. 2010, 24:22–32 http://en.wikipedia.org/wiki/Lenalid ...

penghu 各位同道老师好.本人近期做了一组肿瘤NimbleGen HG18_CpG_Promo Microarray Methylation芯片筛选，结果出来后，有些问题向大家讨教：问题1：发现有的基因启动子甲基化有多个结果，实验人员说是不同转录本的问题。以CITED1为例：但是我不清楚 1、该基因启动子到底有没有被甲基化；2、只有这三个转录本的结果都显示甲基化了才能认为该基因因启动子甲基化而沉默了吗？问题2：在pubmed上， ...

能nca 第一次，自己配了DEPC，还没来得急摇匀，老师就让我们泡上枪头了。实验失败了无数次，要了命了，没找出原因。这次准备重新处理枪头，有几个问题想问问各位师兄师姐：1.装枪头的盒子怎么处理，用DEPC水多擦洗几次烘干行不行？2.那个DEPC水是不是按比例配好之后摇匀一整夜，就可以使用了？3.我把枪头和EP管直接泡在DEPC水里，浸泡24小时候，手带着干净的手套然后一个个的插到枪头盒子里行吗？gjs713 我们这里都是这 ...

飞一闪 本人是全新手，现在手上有一些作为对象的miRNA，想要预测它们的靶基因，具体操作到底应该怎样呢？这段时间经过自己摸索，知道是要用mirbase,tagetscan,starbase来达到目的，也去过这些网站上操作过，但所得结果到底该如何用实在是不知道啊，而且，也不知道自己的这些操作到底有没有意义。虚心求助各位高手，能帮我就下面这个例子解释一下，说说具体流程，感激万分啊！例如：现在想对 let-7 miRNA家族的miR ...

zhll4000 弱弱的问问：我买的miRNA试剂是以nmole为单位的，说明书上说以pmol为单位与lip2000（lip2000以ul为单位）混合，不知道该如何量取pmol？或者pmol可以换算成ul计算吗？急急急。。。。芍药香 1nmol=1000pmol，可以看看总量，计算下浓度，再做稀释。zhll4000 谢谢谢谢，总共是5nmol的miRNA，但还想问下：我就是不知道要用什么仪器来量取这个miRNA？这个要怎么办啊？ ...

wubin6638 我自己配的溶液按的是这样的步骤1.收集400ml菌液的沉淀于50ml离心管中，加入7ml冰预冷的STE，震荡至彻底悬浮。（此时，共收集了4管细菌沉淀）2. 2管合为1管，然后，4000-5000g，4℃离心15min，弃上清，倒置，使液体流净。3.将收集的菌体用8ml溶液I悬浮，混匀。4.加入16ml新鲜配制的溶液II，盖紧离心管盖，温和上下颠倒混匀5-7次，室温放置（最好冰上放置）5min，切忌延长时间，可适当 ...

magichunter 目前我想证明某个药物分子抑制了蛋白A和蛋白B之间的相互作用，初步打算用Co-IP的方法验证加药前后两个蛋白的相互作用情况，请问有没有其他的办法也可以证明这个设想呢？aberrant 如果有A、B两个蛋白的荧光质粒可以做一下FRET，目前为止，Co-IP和FRET是最直接的方式，前者量化后者直观shylook 首先做下IP 是比较直接和成本合适的实验FRET做不做倒真无所谓 现在文章很少用倒是可以做个共 ...

13406538020 受体型酪氨酸酶激酶的作用方式有以下几种(1)激活磷脂酶C，(PLC，)介导的膜磷脂磷脂酰肌醇一4，5二磷酸水解并产生细胞内第二信使信号通路；(2)激活磷脂酰肌醇一3激酶(P13K)，①产生脂磷脂酰肌醇一3，4二磷酸或脂磷脂酰肌醇一3，4，5三磷酸信号通路，②产生细胞内强氧化物过氧化氢(H：Oz)信号通路；(3)激活Src激酶等细胞内非受体酪氨酸激酶信号通路；(4)激活小G蛋白Ras-丝裂原活化蛋白激酶(mi ...

walterxp 各位前辈，我想请问一下pet32a用什么受体菌做表达比较好，我只有DH5α。谢谢花生剥了壳 可以用Rosetta或者BL21，表达的都挺好。walterxp 好的谢谢 我用BL21了guoda11 BL21，我看行！用pET32a作为表达载体，我们实验室很多真核蛋白都实现了可溶性表达！本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实验方法的你，都可以成为师兄的好伙伴师兄微信号：shixion ...