细胞技术

aoe3721 请问 在信号转导过程中 参与信号转导的各种蛋白与通路激活前相比有什么变化啊。其在细胞内的含量会发生改变吗。还是仅仅是发生蛋白结构上的改变。谢谢。selleckchem01 两种情况都可能发生~细胞内含量变化的例子：当Wnt蛋白于细胞表面Frizzled受体家族结合后的一系列反应，包括Dishevelled受体家族蛋白质的激活及最终细胞核内β-catenin水平的变化。 Dishevelled (DSH) 是细胞膜相关W ...

meilixue 如题。poly(rC)中的r代表什么？谢谢。terryxiaolei r代表RNA上的胞嘧啶，即核糖核酸胞嘧啶，不带r的是脱氧核糖核酸胞嘧啶呗……poly(rC)即为多聚胞嘧啶xuezhishui 我觉得poly (rC)应该就是polyribocytidylic acid的缩写，同样的poly (rI)就是polyriboinosinic acid的缩写。其中r代表ribo。不知对否？本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的 ...

吃鱼不吐刺 有哪位前辈制备过AGE-BSA？我制备的AGE-BSA三个月已经出现明显褐色，但是由于不知道如何透析，及怎样测定制备的AGE浓度，实验一直不能进行……哪位战友能够告知下，不胜感激johnchen416 你是如何做的？透析可选用密理博的透析袋，孔径接近但必须小于白蛋白分子量67kd就可以了。用透析袋装AGEs-BSA，封闭严实，放在PBS液中，磁力搅拌器搅拌过夜即可。如果费用可以，可以直接买管子低温超速离心。su ...

zhangyinghua8106 研究A药处理对经典Wnt/beta-catenin信号通路的影响，结果发现A处理以后gsk-3 beta 总蛋白量减少，磷酸化gsk-3 beta也减少，而beta-catenin总蛋白增加，磷酸化beta-catenin也增加，这该怎么解释呢？不能说明beta-catenin的增加是由于gsk-3bata的减少吧？我该怎么解释这两个分子之间的关系呢？焦急等待中！望高手指点，谢谢了！！zhangyi ...

hetingcopy 大家好，我现在正在做慢病毒包装，用的是CLONTECK的包装系统，第一次感染293T细胞后，荧光很亮，48H后收集病毒上清，离心后冻于-80度，一天后感染靶细胞，什么都没有？请问大家是怎末做的？谢谢。大鹏鸟 看到荧光并不代表包装成功,它代表的只是你的质粒转进去了。做慢病毒包装时必须要搭配好几个质粒的比例。转染之后要能看到细胞形态的病变。收集上清的时候要注意尽快分装保存。有可能的话最好把细胞也裂解一下， ...

涛声依旧神游天下 你好，我想问下，对于转膜，干转，半干转，湿转，它们适应的分子量是多大的蛋白呢？比如我的目的蛋白是192KD，那么用哪种转膜方式较好呢？什么条件？依据是什么呢？谢谢cfss0925 现在一般都选择湿转的吧。selleckchem01 需要湿转3H以上，这么大的分子半干很难转过去；如果蛋白丰度有比较低的话，基本是检测不出来的~cherrycherry 湿转，90V，120min，依据不同转膜液配方，转膜时间可能有所不同 ...

dangyonghui2 大侠们，我现在用的是promega公司的cAMP测定试剂盒，按照说明书上面要求做的标准曲线，可是我做了几次出来和说明书上面都不一样，是怎么回事？求解！！！现在有测cAMP的同志们一起讨论下，我的Q:1186130200bianbenjamin 我们用的是PE的盒子LANCETM cAMP 384Kit（PE公司）1.检测原理：该试剂盒是一种时间分辨的荧光共振能量转移免疫分析，该反应是一个竞争免疫反应，即 ...

wudan821 最近一直在研究mTOR信号通路，看了很多文献发现这个信号通路是目前抗肿瘤的热点，很多文献已经明确指出mTOR的下游分子是P70S6K和4EBP1，但是在这 两个下游分子后就很少有人去研究了，我对这个信号通路也只是了解个皮毛，想求助战友谁知道在这两个下游分子之后还能研究什么？这两个下游分子是这个信号通路的终结吗？我最近看了很多信号图谱，发现JAk-PI3K-AKT-mTOR-STAT3这一信号通路，这 ...

mahaizhi 各位前辈，请教一下在国内能不能购买到ATCC的原装细胞，有没有哪家公司或者什么机构是ATCC在国内的指定代理。如果有的话，请不吝赐教联系方式。谢谢。ddh382 我也想知道veimojie ATCC 在中国的总代理是北京中原公司 比较放心 都是ATCC原装干冰包装发给客户 有兴趣可以去公司主页看看 网址http://www.sinozhongyuan.com/index.aspxiaojianmao 同中原，我们上回说要定一个， ...

dery 谁有pJim19 vector map and it's sequence呢，贡献一下吧！！！！freecell 耶鲁大学的邓教授实验室有此质粒。可以写信求助：Xing Wang Dengxingwang.deng@yale.edu版主dachong99留言:欢迎前辈常来坐坐...dery 请问你有这方面的信息吗，网上怎么找不到？seank 扣扣1843439339本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实验方法的你，都可以 ...

mirror122 大家好，我从中山大学发表的论文中看到，他们没有提取RNA，而是直接用特异的引物对其中的microRNA进行反转录，然后再做定量PCR，不知道大家有人用过这种方法吗？可行吗？haidaweishengwu 我也在座microRNA的提取，有机会交流一下mirror122 好呀，不知道你是怎么提取RNA的？huahuaxxh66 现在检测血浆microRNA都很昂贵，请问国内目前有没有相对合适的方法吗？或者哪 ...

mirror122 请问大家谁做过从血浆中提取总RNA 包括microRNA，我要对里面的microRNA进行定量检测。请教一下实验方法，哪个公司的试剂盒比较好。谢谢！906003500 takara 或者 英潍 都挺不错的。2004112841 我们用的是MRI的TRI REAGENT BD，货号是TB-126，做的还可以，也有文献用这个。clothilde 2004112841 wrote:我们用的是MRI的TRI REAGENT BD，货号是TB-126， ...

SYendocrine 想请问各位大虾，sonic hedgehog通路的特异性激活剂是什么？（附加：另外有没有哪位知道该通路在肾小球系膜细胞中是否表达，如果想测是否表达通过RT-PCR测SHH，通过Elisa法测shh蛋白就行了么？）请各位大虾不吝赐教！！大鹏鸟 好像只有SHH能激活，没看到有文献说有其他激活剂的。想测表达与否还是通过传统的方法,RT-PCR ,WESTERN，ELISA等SYendocrine 大鹏鸟 wrote:好 ...

bigyo 急求解决！有谁给大鼠注射过SB203580，怎么用DMSO溶解后，再用PBS稀释又析出沉淀呢？yxj360367100 你好。除了用DMSO溶解，SB203580还能用其他的溶剂溶解吗？zhaichao_1 我的也是这个样子，于是我就将药物这样悬浮打入，结果老鼠死了xiye616 请问你的析出问题解决了么 我们遇到同样问题 比较着急 感谢zcbpaul 我也是同样问题啊，怎么解决呢bigyo 毕业了，解决不了，换公司吧本文由丁香园论 ...

qulinyd 最近在做hsv tk,所用前药为粉末状GCV（购自sigma），但不知道怎么溶解合适，还请各位帮帮忙哦freecell 你从sigma买来的东西，应该有个datasheet吧：Preparation InstructionsSoluble at 10 mg/ml in 0.1 N HCl.Storage/StabilityStore desiccated at 2-8 °C. Under these conditions the product is stable for 3 years.说明 ...

hanrui1009 各位同仁：对于大于5KB的片段如何选择合适的载体进行克隆？为什么？什么公司的什么产品尽可能详细！fengye_liu 一般的T VECTOR作为克隆载体是可以胜任的！hanrui1009 是吗？可是很多前辈都说 不好做啊！成功率不高啊！纠结啊！ylong12 hanrui1009 wrote:各位同仁：对于大于5KB的片段如何选择合适的载体进行克隆？为什么？什么公司的什么产品尽可能详细！克隆 好像大都用T vector 一般大于 ...

iiyuan 有人用invitrogen的trizol 提取哺乳动物组织蛋白吗？效果如何？O(∩_∩)O谢谢 回复wangke80 这个问题我刚好前段时间检索过，你可以参见两个丁香园的帖子：1：http://www.dxy.cn/bbs/thread/4474660#44746602：http://www.dxy.cn/bbs/thread/6296746#6296746另外的我其它地方查到的内容摘抄如下：在用酒精沉淀出DNA（DNA抽提中的 ...

myskite 实验证实，某个miRNA促进细胞凋亡（casp3升高，bcl2降低）。我看pubmed上这方面的文献，都是，miRNA抑制了凋亡通路的某个基因，导致促进或抑制凋亡。可是，我做的这个miRNA，经过预测，并不调控凋亡通路上的任何一个基因。我该怎么办呢？zhangshukui 参考下这篇文章MiR-25 regulates apoptosis by targeting Bim in human ovarian cancer。还有就是你选择的是m ...

能nca 要菌摇了一整夜早上才发现摇床培养箱的温度不对，本来应该是37度，可是昨天晚上，昨天晚上做实验太忙了，只在28度呆了一整夜，早上看菌都没有很大的变化，怎么办啊？我现在把温度该过来，正在37度接着摇菌呢。能nca 十分的着急，希望大家快点来帮忙ylong12 取菌 重新摇 28度摇的菌活性不好 后即实验很难进行能nca 谢谢了本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实验方法的你，都可以成为师兄的好伙伴师兄 ...

霍一刀hxs 在 一篇论文的实验步骤中，其buffer添加了P.I.，我不知其为哪种试剂的简称。希望有高手可以指点。急！谢谢！大鹏鸟 什么实验？说清楚点好帮你啊natprod 是做细胞周期或凋亡试验的吗，propidium iodide (PI) 染DNA用的。xzx8066 如楼上所说，最好说清楚点。我仅提供一个参考。PI染色法（活细胞染色）检测细胞凋亡碘化丙啶（Propidium Iodide, PI）是一种DNA 结合性染料，其激发和发射波长分别为536 ...