生物化学技术

BamHⅠBglⅡEcoRⅠEcoRⅤHindⅢKpnⅠMluⅠNotⅠSacⅡSalⅠSfiⅠXhoⅠ (责任编辑：大汉昆仑王) ...

影响酶切的几个主要因素：1. 质粒DNA的质量1）质粒DNA的质量是决定酶切效率的最最要的因素。通常在克隆时，如果反复优化酶切条件后，都不能实现完全酶切，最可能的原因就是质粒DNA的质量有问题。2）DNA的质量监测通常有两个方法：首先OD260/OD280比值应该在1.8左右（1.7-1.9），否则意味着DNA样品中存在大量的蛋白质或RNA污染。其次，琼脂糖电泳分析时应主要以超螺旋条带为主。最多不 ...

HPLC常见问题及对策1.用HPLC进行分析时保留时间有时发生漂移，有时发生快速变化，原因何在？如何解决？关于漂移问题：① 温度控制不好，解决方法是采用恒温装置，保持柱温恒定② 流动相发生变化，解决办法是防止流动相发生蒸发、反应等③ 柱子未平衡好，需对柱子进行更长时间的平衡关于快速变化问题① 流速发生变化，解决办法是重新设定流速，使之保持稳定② 泵中有气泡，可通过排气等操作将气泡赶出。③ 流动相不 ...

本人长期以来从事PCR及载体的重组构建有什么问题大家可以一起讨论交流关于PCR的一些问题：1．简介寡聚核苷酸引物的选择，通常是整个扩增反应成功的关键。所选的引物序列将决定PCR产物的大小、位置、以及扩增区域的Tm值这个和扩增物产量有关的重要物理参数。好的引物设计可以避免背景和非特异产物的产生，甚至在RNA-PCR中也能识别cDNA或基因组模板。引物设计也极大的影响扩增产量：若使用设计粗糙的引物，产 ...

1、基因组DNA 的得率较低或者无基因组DNA 原因，如何解决？1) 样品材料老化或者反复冻融导致DNA含量下降：应选择新鲜的材料样品，如新鲜血液、新鲜菌液、刚离体的动物组织或幼嫩的植物组织等，不能立即处理的样品应放入液氮或-70℃低温保存，以免DNA 降解。2) 样品破壁或者裂解不完全，DNA 未充分释放：动植物样品应在液氮中充分研磨，G+细菌、酵母等破壁较困难的样品应用溶菌酶、Lyticase ...

1.在重蒸酚中为什么加入0.1%的8-羟基喹啉及少量巯基乙醇？保存在冰箱中的酚，容易被空气氧化而变成粉红色，这样的酚容易降解DNA，一般不可以使用。为了防止酚的氧化，可加入0.1%的8-羟基喹啉及少量巯基乙醇。8-羟基喹啉是带有淡黄色的固体粉沫，不仅能抗氧化，并在一定程度上能抑制DNase的活性。2.如何将不同构型的质粒DNA区别开？由于不同构型的DNA在琼脂糖凝胶电泳中的迁移率不同，ccc DN ...

随着每年各类化学物质进入市场，产生残留物的数量不断增加，健康和环境成为日益关注的问题。虽然许多实验中使用的化合物是有毒的，很多都是潜在的危险，但一些化学品没有适当的危险性分类，在日常实验中被广大科研工作者所忽略。什么是EB溴化乙锭？在研究数以千计的实验室残留性有毒物质，最值得一提的就是溴化乙锭（EB；3 8-二氨基-5-乙基-6-phenylphenanthridinium甲基溴），该物质的潜在的 ...

1． 试剂：30％的醋酸，3只spectra/por管，HNP－3多克隆抗体，液氮2． 器械和设备：超声破碎仪，离心管，离心机，4度的冰箱，bicinchoninic酸蛋白测定系统，液氮仪，S－200HR柱，S－200HR柱，tricineSDS-PAGEAU-PAGE及激光测定取来在COPD病人50毫升脓痰液超声破碎3次，1分每次（幅度？）30％的醋酸定容至100毫升，置于4 ...

附　录　一常用酸碱的比重与浓度的关系　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　 当量浓　 配1升1N　　名　　称　　　　　 分子量　比重　　　　　　　　度　N　溶液所需　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　（粗略）　毫升数量氢氧化铵（NH3·H2O）　 35.05　 0.90　 28（以氨计）　15　　　 67氢氧化钠溶液（NaOH）　40.0　 1.5　　 50.0　　　 ...

Deoxyribonucleic acid sodium salt from salmon testesDNA(Salmon sperm) 鲑鱼精DNA产品编号规 格价 格D8030-100 100mg 180.00说明：生化研究。CAS＃：9007-49-2外观：白色线状特性：Linkage：Formerly listed as Type III溶解性：溶于水，参考浓度2mg/ml储存条件：2- ...

首先，分光光度计测量的样品必须是均一的，摇匀后再测量结果会准确些。它是利用分光光度法对物质进行定量定性分析的仪器。核酸的定量是分光光度计使用频率最高的功能。可以定量溶于缓冲液的寡核苷酸，单链、双链DNA，以及RNA。核酸的最高吸收峰的吸收波长260 nm。每种核酸的分子构成不一，因此其换算系数不同。定量不同类型的核酸，事先要选择对应的系数。如：1OD 的吸光值分别相当于50μg/ml的dsD ...

问：实验室购买的是西格玛产的小牛胸腺DNA，说明书上说保存温度是2~8℃，而由于我们的粗心，我们将其储存在零下20℃的低温储藏箱内，而我们将其配成溶液后，接下来又存储在0~4℃的普通冰箱里。我们用这个保存条件下的DNA做精密度较高的电化学实验，结果发现毫无效果，有指导老师告诉我有可能因为第一步零下20度太低，“冻死了”，请各位虫友支支招，到底应该在什么温度下保存比较好，或者告诉我小牛胸腺DNA的能 ...

问：请问各位，用于层析的填料（DEAE-纤维素52）如何再生，再利用，怎么处理保存再利用呢？？我现在实验正进行到这步，不知道怎么处理，好急，请高手给些意见！谢谢！另外，在我层析前用酸碱处理DEAE-纤维素52时，水洗很久都不到合适的PH值，就酸碱处理就花了一天时间，请那位高手能告诉我详细的处理过程，让我检查下自己是否哪里有问题。非常感谢！！答:DEAE52预处理方案：取０.５M NaOH 500 ...

关于DEAE52纤维素的处理只有简单的几步，如下:1.先将干粉的纤维素浸泡在蒸馏水中，一段时间大约3小时左右，我偏爱这个时间，去除杂质，最好抽干一下；2.再用0.5mol/l的HCl溶液浸泡2小时，用去离子水洗净至PH中性，并抽干；3.将抽干的纤维素再浸泡在0.5mol/l的NaOH溶液中2小时，用去离子水洗至中性，抽干。即可用了 对于用过的纤维素，可以重复利用多次，但需要经过再生处理后才可 ...

问： 1.DEAE FAST FLOW经过不同盐浓度洗脱后，在用初始缓冲液平衡柱子过程中，缓冲液的体积和平衡时间与什么有关？我要的蛋白等电点是4.5，用的是PH7.5的20mMTris-HCl缓冲液平衡，而且我用的是5ML的预装柱，洗脱后平衡得需要大约120ML的缓冲液，我看说明书写的只需5-6个柱体积，这是为什么呢？ 2.如果自己装的DEAE FAST FLOW柱子流速不稳，时快时慢是什么 ...

活性炭属于无定型碳，在结构上微晶碳是不规则排列，在交叉连接之间有细孔，在活化时会产生碳组织缺陷，是一种多孔碳，堆积密度低，比表面积大。石墨化碳黑（GCB）是碳黑在惰性气体(通常为氩气)保护下加热到2700 ℃左右生成的一种碳材料。石墨化碳（Carb）由微弱的范德华力结合，排列松驰的网状层面组成的球状质点-胶体单元所组成，属于较低石墨化程度的碳素物质在高温条件下，碳黑内部和表面的大空隙结构被破坏，表 ...

台盼蓝（trypan blue）排斥实验一、目的学习台盼蓝排斥实验的原理和方法二、概述台盼蓝又称锥蓝，是一种阴离子型染料，这种染料不能透过活细胞正常完整的细胞膜，故活细胞不着色，但死亡细胞的细胞膜通透性增加，可使染料通过细胞膜进入细胞内，使死细胞着色呈蓝色。是最常用的检测细胞活率的方法。细胞活力常用百分比表示，活力的大小对试验结果有很大影响。细胞活力的测定有许多方法，最简便常用的方法是台盼蓝（tr ...

一．试剂制备：1.分离胶缓冲液（pH8.9）:36.6gTris48ml1mol/l的HCl或先加水至80ml用浓HCl调pH，再定容至100ml.2.浓缩胶缓冲液（pH6.7）：5.98gTris48ml1mol/l的HCl 或先加水至80ml用浓HCl调pH，再定容至100ml.3.30%丙烯酰胺（pH≤7.0）：29g丙烯酰胺和1g甲叉双丙烯酰胺，溶于60ml水中，加热至37º ...

Triton X-100是一种非离子型去垢剂 分子式：C14H22O(C2H4O)n 用途：Triton X-100是一种比较温和的去垢剂（表面活性剂或称界面活性剂），常作为添加剂使蛋白保持稳定，尤其是膜蛋白。 性质： 1. Triton X-100对细菌等微生物没有杀伤作用。 2. Triton X-100在紫外波段下有光吸收（lambda max = 275 nm and 283 nm in ...

影响电泳分离的主要因素：1.待分离生物大分子的性质：待分离生物大分子所带的电荷、分子大小和性质都会对电泳有明显影响。一般来说，子带的电荷量越大、直径越小、形状越接近球形，则其电泳迁移速度越快。2.缓冲液的性质：缓冲液的pH值会影响待分离生物大分子的解离程度，从而对其带电性质产生影响，溶液pH值距离其等电点愈远，其所带净电荷量就越大，电泳的速度也就越大，尤其对于蛋白质等两性分子，缓冲液pH还会影 ...