DEAE FAST FLOW使用有关问题
互联网
2299
|
问：
1.DEAE FAST FLOW经过不同盐浓度洗脱后，在用初始缓冲液平衡柱子过程中，缓冲液的体积和平衡时间与什么有关？我要的蛋白等电点是4.5，用的是PH7.5的20mMTris-HCl缓冲液平衡，而且我用的是5ML的预装柱，洗脱后平衡得需要大约120ML的缓冲液，我看说明书写的只需5-6个柱体积，这是为什么呢？
2.如果自己装的DEAE FAST FLOW柱子流速不稳，时快时慢是什么原因？刚刚重装完，而且没用过几回 3.预装柱如果堵了，怎么办呢？ 谢谢！ 答1：
1，一般平衡的时候，是需要多冲洗几个柱体积的，我觉得为的是让你柱内的环境都是平衡液。
2，我觉得自己装的柱子，柱效肯定没有预装柱好，时快时慢，是你的样品没弄好，你可以上柱子之前过滤一下，这样影响就小了。 3，预装柱堵了，那你就用0.5M的碱试试。 答2: 堵了可以反冲试试 应该是浓度，说明书上的只是理论上的，和实际肯定有出入的。 自己装的可能是有断层 答3: 平衡一般看紫外吸收是否回到基线，至少是5以下吧，紫外也有波动的，有时候也会出现基线升高的情况，一般判断是否回到基线，就看紫外吸收线是不是平了 流速不稳可能是柱子没装好，可以重装一下试试 预装柱如果堵得太厉害，可以用异丙醇冲洗 答4： 关于第一个问题：我觉得洗脱平衡用120ml，这也太多了吧！我用过20ml的DEAE FF，平衡也只是5个柱体机，我觉得平衡时只要看电导稳定了就可以！ |
