生物化学技术

多态性（polymorphism）是指处于随机婚配的群体中，同一基因位点可存在2种以上的基因型。在人群中，个体间基因的核苷酸序列存在着差异性称为基因（DNA）的多态性(gene polymorphism)。这种多态性可以分为两类，即DNA位点多态性(site polymorphism)和长度多态性 (longth polymorphism)。基因多态性的主要检测方法简述如下：1．限制性片段长度多态 ...

蛋白酶K在BSE的检测中用来消化PrPc用来区别致病的PrPsc它的正确使用对检测特异性和敏感性都有重要影响，希望大家多多交流在使用中的心得，我就抛砖引玉，先总体说一个：概述: 蛋白酶K是一种非特异性、枯草杆菌蛋白酶相关的丝氨酸蛋白酶 具有很高的比活性。EDTA等鳌合剂或SDS等去垢剂不能使蛋白酶K失活 该酶在较广的pH范围内(pH 4-12.5)均有活性来源: 源于白色念球菌(Tritirach ...

重组载体的构建及鉴定 引言：根据实验目的，设计需要重组目的基因或RNAi片段，通过生物合成公司合成，需要说明的是设计的每条单链DNA其两端都应有没切位点，以便于重组。1. 合成 的 ssDNA ，分别命名：编码链为 Forward ssDNA 模板链为 Reverse ssDNA ， 每1 OD ssDNA 各加33 μl 无菌去离子水溶解，分别取18 μl 进行退火。在1.5ml ...

实验室常用溶液的配制标准程序关键字： 溶液 配制 标准程序1 、 目的保证实验中用到的各种溶液符合实验要求。2 、 该SOP变动程序本文件的变动，可由任一使用该文件的工作人员提出，报负责人决定。如通过则公布执行。3 、 适用范围XXXX研发部常用溶液：3M 醋酸钠、 2N NaOH 、 5M NaCL、 Solution Ⅰ 、 Solution Ⅱ Solution 、 Solution Ⅲ 、 ...

重组质粒构建是常用的分子生物学手段，其实只是最基本的方法，一般一个星期同时构建三二个组质粒是没有问题的。在国内先进的实验中，也大都是由实验员搞定。但是其中还是有些基本的技巧需要掌握。在这里将我的心得分享于大家，这也是我本人几年来一线工作时的经验积累，以期能为谷友提供借鉴，让大家在实验中少走弯路。所涉及内容如下： 1) 克隆基因的酶切位点问题 2) 载体酶切的问题 3) 连接片段浓度比的问题 在阐明 ...

溶菌酶可行性分析报告 溶菌酶是一种专门作用于微生物细胞壁的水解酶，称包胞壁质酶或N-乙酰胞壁质聚糖水解酶，它专一地作用于肽多糖分子中N-乙酰胞壁酸与N-乙酰氨基葡萄糖之间的β-1，4键，从而破坏细菌的细胞壁，使之松驰而失去对细胞的保护作用，最终使细菌溶解死亡。也可以直接破坏革兰氏阳性菌的细胞壁，而达到杀菌的作用，这主要是因为革兰氏阳性细菌的细胞壁主要是由胞壁质和磷酸质组成，其中胞 ...

一般先配制50倍的TAE缓冲液，用时再稀释成1倍的。 50倍TAE缓冲液的配制方法为 1. 称取下列试剂于1L烧杯中： Tris 242g &

先加一抗后再封闭的话，一抗就会结合到固相表面上，这种结合力是非特异性的疏水作用力，这种作用力是比较强的，经过处理的固相表面如硝酸纤维膜，酶标板对蛋白的吸附力更强，你再去封闭就没有作用了。 当然，也不是说封闭蛋白就完全不会封闭掉一抗的蛋白结合位点，在蛋白过量的条件下，蛋白质之间会有黏附和堆积作用，但这种作用通常是不稳定的。 如果你所选择的一抗与固相抗原亲和力较高，在适合的buffer条件 ...

配制：盐酸6.5ml稀释至1000ml.标定：称取0.15g于270—300。C灼烧至质量恒定的基准无水碳酸钠，称准至0.0001 g。溶于50mL水中，加10滴溴甲酚绿-甲基红混合指示液，用配制好的盐酸溶液滴定至溶液由绿色变为暗红色，再煮沸2min，冷却后，继续滴定至溶液再呈暗红色。同时作空白试验。另外一种：1、指示剂的配制溴甲酚绿--称取0.1g溴甲酚绿溶于乙醇（95%），用乙醇（95%）定 ...

称0.5g淀粉于200ml烧杯中 量取100ml蒸馏水 5ml于200ml装有淀粉的烧杯中 使其成糊状 剩余的95ml蒸馏水放于电炉上加热至沸腾 然后把沸腾的蒸馏水倒入淀粉中继续加热煮沸2min 加热过程中要搅拌 (责任编辑：大汉昆仑王) ...

酒精能够吸收细菌蛋白的水分，使其脱水变性凝固，从而达到杀灭细菌的目的。 如果使用高浓度酒精，对细菌蛋白脱水过于迅速，使细菌表面蛋白质首先变性凝固，形成了一层坚固的包膜，酒精反而不能很好地渗入细菌内部，以致影响其杀菌能力。 75%的酒精与细菌的渗透压相近，可以在细菌表面蛋白未变性前逐渐不断地向菌体内部渗入，使细菌所有蛋白脱水、变性凝固，最终杀死细菌. 酒精浓度低于75%时，由于渗透性降低，也会影响杀 ...

1）测定方法1．用含5％小牛血清的RPMI-1640培养液将靶细胞调整到5×104～2×105/ml，此浓度需根据情况预先标定。2．在96孔圆底细胞培养板中加入靶细胞，每孔加100μl。3个效应细胞自然释放对照孔不加靶细胞，只加100μl培养液。3．向各孔加100μl效应细胞，效应细胞与靶细胞的比例根据要求而定，通常为5：1～20：1。自然释放孔不加效应细胞只加100μl培 ...

Percoll不连续密度梯度沉淀法分离纯化淋巴细胞和淋巴母细胞撰写　金伯泉--------------------------------------------------------------------------------　　(一)　原理　　Percoll是一种包有乙烯吡咯烷酮的硅胶颗粒。渗透压很低( 粘度也很小，可形成高达1.3g／ml密度，采用预先形成的密度梯度时可在低离心力(20 ...

A-2.38-3.22-2.8-2.66-2.89-2.7-2.35-3.07-2.47C-2.94-15.0-2.58-1.96-3.29-2.22-2.97-2.37-15.0D-3.69-15.0-3.46-2.71-2.26-2.63-3.61-3.03-15.0E-3.64-15.0-3.51-2.65-3.39-3.41-3.21-2.63-15.0FG ...

原因 解决方法 1、柱温波动。（即使是很小的温度变化都会引起基线的波动。通常影响示差检测器、电导检测器、较低灵敏度的紫外检测器或其它光电类检测器。） 1、控制好柱子和流动相的温度，在检测器之前使用热交换器图2、流动相不均匀。（流动相条件变化引起的基线漂移大于温度导致的漂移。）2、使用HPLC级的溶剂，高纯度的盐和添加剂。流动相在使用前进行脱气，使用中使用氦气。 3、流通池被污染或有气体3、用甲醇或 ...

1) 配制培养基最好使用新制备的三蒸水。一般在试验前当天或前一天制备为好。调节pH值的酸碱溶液也应该使用这种水配制。2) 制备培养基的器皿清洗要绝对干净，烤干后备用（滤器、滤膜、量筒、移液管及盛放培养基的小瓶等存放和转移培养基液体的器具都应进行灭菌）。3) 溶解培养基：将干粉培养基溶于总量1/3的水中，再用水洗包装袋内面两次，倒入培养液中。振荡或超声助溶，一般不要加热助溶。4) 补加试剂：根据包装 ...

Q-1: 《限制酶在各种通用缓冲液中的相对活性》中记载了限制酶在各种通用缓冲液中的相对活性，但有时其它的缓冲液比产品附带的缓冲液具有更高活性 (例如Hind III附带的缓冲液是M，但缓冲液K显示出200%的活性)。在这种情况下，选用相对活性高的缓冲液进行反应，有没有问题? Q-2: 为什么有些限制酶的附带Buffer，使用的是比Basal Buffer相对活性要低的Universal Buff ...

M 其他相关问题集目录Q-1：使用IPTG（Dioxane free）时需要注意什么?································································2Q-2：使用X–Gal时需要注意什么?········································································· ...

一、Ligases Q-1: 各种连接酶特性的比较。 T4 DNA Ligase Q-2: 与分子内连接反应相比，容易发生分子间连接反应的DNA浓度为多少? Q-3: 平滑末端及突出末端的连接效率的差别。 Q-4: 在10%聚乙二醇存在的条件下，可以进行转化吗? Q-5: 要想让DNA环化，盐浓度 (NaCl、KCl等) 多少为好? A-6: 连接液是否需要乙醇沉淀纯化之后再转化? Q-7: T4 ...

直径mm 压平宽度（半周长）mm 截留分子量Da22 34 350022 34