蛋白酶K(Proteinase K)使用小贴士

蛋白酶K在BSE的检测中用来消化PrPc,用来区别致病的PrPsc,它的正确使用对检测特异性和敏感性都有重要影响，希望大家多多交流在使用中的心得，我就抛砖引玉，先总体说一个：
概述: 蛋白酶K是一种非特异性、枯草杆菌蛋白酶相关的丝氨酸蛋白酶, 具有很高的比活性。EDTA等鳌合剂或SDS等去垢剂不能使蛋白酶K失活, 该酶在较广的pH范围内(pH 4-12.5)均有活性

来源: 源于白色念球菌(Tritirachium album)

 

反应条件: 蛋白酶K在较广的缓冲液pH范围(pH 4-12.5), 温度范围(37-60℃), 盐浓度(如: 3 M GuHCl)或尿素(4 M)条件下均有活性。在一些去污剂如: Tween20(5%), Triton X-100 (1%)和SDS(1%)条件下也有活性

比活性: 30 units/mg

分子量: 28.9 kDa

单位定义: 在250 μl反应体系, 37℃条件下1分钟内能分解释放相当于1 μmol酪氨酸的folin-阳性氨基酸和肽所需要的蛋白酶K的量定义为一个单位(1)

贮存条件: 20 mM Tris-HCl (pH 7.4), 1 mM CaCl2和50%甘油。贮存于-20℃
 

Proteinase K，中文名为蛋白酶K。不含DNase，不含RNase，进口分装，可直接使用。可以用于消化各种蛋白。用于各种常见的
  分子生物学、细胞生物学等相关实验，例如基因组DNA抽提、酶的消化去除等。
Ø 酶活力，>30U/mg。在37℃，以血红蛋白为底物，1分钟内可以产生相当于1微摩尔酪氨酸Folin阳性的氨基酸或多肽的蛋白酶K的
  量，定义为一个单位蛋白酶K酶活力。
Ø 在很宽的pH范围内有效，有效的pH范围为pH4.0-12.5，最佳pH范围为pH7.5-8.0。
Ø 蛋白酶K的最佳反应温度为65℃，但在65℃或更高的温度蛋白酶K自身的也非常迅速地降解。很多时候反应温度选择50-55℃。
Ø 在0.2-1%SDS或约10mM尿素存在的情况下，蛋白酶K显示更高的酶活性。蛋白酶K的常用工作浓度为0.05-1mg/ml，根据所用缓冲
  液是否含有SDS、尿素、pH是否适合、温度是否适合等因素确定具体的工作浓度。
Ø 常用浓度的EDTA、Triton X-100、Tween 20、Sarkosyl、盐酸胍对蛋白酶K的活力影响不大。

 

 

 

(责任编辑：大汉昆仑王)