蛋白质技术

Northern blot技术经乙二醛和二甲基亚砜变性处理后进行的RNA电泳　　这一方法原于McMaster和Carmichael(1977)。 含有乙二醛－DMSO的凝胶比含有甲醛的凝胶更难于进行电泳， 因为前者泳动速率较慢而且需将电泳液时行循环以避免电泳过程中形成过高的H＋梯度。尽管上述两种凝胶具有近乎相等的分辨率（Miller，1987），但用含朋乙二醛－DMSO的凝胶对RNA进行分级离，通常Northern杂交所显示的 ...

近期查找蛋白质组相关资源，今对丁香园部分相关资料做了个整理链接，以便大家查阅：蛋白质组研究分析中心（RCPA）－－蛋白质组研究网（由huang3301发贴）http://www.proteomics.ac.cn/cindex.html蛋白质组学必备——网站推荐（riversider于2005-04-03发贴）http://www.biochem.oulu.fi/proteomics/protocols.html蛋白质组学绪论（p ...

2004年3月18日，世界上最具权威性的著名杂志《自然》以主题论文的方式发表了由中国科学院生物物理所、植物研究所合作完成的 “菠菜主要捕光复合物(lhc-ii)2.72 ?分辨率的晶体结构” 研究成果。该晶体的结构彩图被选作本期杂志的封面照片。光合作用机理一直是国际上长盛不衰的研究热点，lhc-ii是绿色植物中含量最丰富的主要捕光复合物。这一复合物是由蛋白质分子、叶绿素分子、类胡萝卜素分子和脂类分子所组成的一个复杂分子体系， ...

首先申明：这是一个非常成功的工业化规模从包含体生产集落刺激因子的工艺，价值连城。比现在的，比如张江的XX公司的柱上复性，以及西北工大的耿老师的色谱饼工艺好得多，方便得多，产率高得多。希望有有心人关注，不为啥，为中国的患者，成本这么低，却卖。。。。，二为给各位提供包含体复性研究的参考。。。 闲话不说。集落刺激因子的基因构建、表达是非常容易的，在上海花个万把快钱就可以搞定。原核做包含体表达，各种表达载体都行，小菜一碟。最大的问题是 ...

SOUTHERN BLOT1. Run the gel as normal. Often for genomic southerns it is desirable to run long gels (18cm) over 4-6hrs.2. Photograph the gel with a ruler adjacent to the molecular weight markers as a reference.3. Alkali transfer buffer = 0.5M NaOH (20g/lt), 1.5M NaCl (87.66 g/lt). Prepare 1 litre for one gel and an ...

要检测一个基因的表达产物是否正确，或者比较表达产物量的相对变化，首选方法是Western Blot。因为Western Blot操作相对简单方便，既可以定性分析表达产物，同时还可以指示目的蛋白量的相对变化。虽然，顺利的时候Western Blot做起来很简单，可不顺的时候也很令人心烦――做不出结果啦、假阳性啦、结果出现多条带啦、到底是一抗有问题还是二抗有问题啦……毕竟，作为一种有活性的生物大分子，抗体和抗原的反应毕竟不象1+1 ...

相信如何提高目的重组蛋白的诱导表达量是很多同学在研究中都会遇到的问题。记得小编在读书的时候就经常在研究这个问题，泡了无数论坛，看了无数帖子，尝试过IPTG的诱导浓度、培养基成分、诱导温度、诱导时间，甚至让别的公司帮忙做密码子优化（将目的片段通过全基因合成的方式合成出来）。总的来说，提高IPTG浓度是可以提高目的蛋白的诱导表达量的，但一般也就用到1mM的浓度，再高对细胞有毒性； 培养基营养越丰富，表达量越高，所以如果追 ...

我准备做凋亡过程中CASPASE 3的变化，用WESTERN检测。我准备买SANTA CRUZ的抗体。有两种，一种是单抗，另一种是多抗。具体如下：1.caspase-3 (E-8): sc-7272SOURCECaspase-3 (E-8) is a mouse monoclonal IgG2a antibodycorresponding to amino acids 1-277 representing the full lengthprecursor form of caspase-3 (also des ...

UNIT 5.7 Overview of Protein Expression in Pichia pastorisDavid R. Higgins11 Invitrogen Corporation, San Diego, CaliforniaJohn E. Coligan, Ben M. Dunn, David W. Speicher, and Paul T. Wingfield (eds.)Current Protocols in Protein ScienceCopyright © 2003 John Wiley & Sons, Inc. All rights rese ...

提取植物总蛋白（以植物花粉为例）：1.三氯乙酸法（TCA）/丙酮(acetone)提取花粉总蛋白质花粉在liquid nitrogen中研磨成粉末，用含10%TCA和1%DTT的acetone沉淀蛋白质，-20度 2个小时(必要时过夜)，4度 25000g离心20min后去上清，用含1%DTT的acetone溶液悬浮沉淀，-20度 1个小时,再次离心去上清，将真空干燥的沉淀在等电聚焦缓冲液中(8M urea，20mmDTT,4%CHAPS,2% ...

的2009年1-3月全文，持续更新（3月11日更新一期）《科学》09年3月06日出版pdf全文http://www.rayfile.com/files/babebccc-0dd3-11de-9021-0019d11a795f/）重新整理一下，方便大家下载3月08日最新更新三期《自然》09年3月05日出版pdf全文http://www.rayfile.com/files/40b4522e-0b25-11de-b280-001422 ...

一本很好的Protein Microarray Technology 的书Front Matter (p i-xvi)Summary | Full Text: PDF (Size: 3733K)Colour Plates (p xvii-xxxii)Summary | Full Text: PDF (Size: 3504K)Chapter 1:Protein Microarrays: From Fundamental Screening to Clinical Diagnostics (p 1-9)Dr. Dev KambhampatiSu ...

注册了半天，终于搞下来了！http://www.bio-rad.com/cmc_upload/Literature/202685/Install_PDQuest_v801_PC.zipThe download version of PDQuest has a free 30 day trial period, during which you do not normally need an HSK. After the trial period expires, you can continue to use PDQuest in Viewer mo ...

摘 要 综述了近几年来多肽类物质的提取分离与分析方法，主要包括高效液相色法、电泳、质谱及核磁共振等方法在肽类物质研究中的最新应用进展。　　多肽类化合物广泛存在于自然界中，其中对具有一定生物活性的多肽的研究，一直是药物开发的一个主要方向。生物体内已知的活性多肽主要是从内分泌腺组织器官、分泌细胞和体液中产生或获得的，生命活动中的细胞分化、神经激素递质调节、肿瘤病变、免疫调节等均与活性多肽密切相关。随着现代科技的飞速发展，从天然产 ...

通过对90多种真核蛋白在原核中的表达总结出提高可溶表达的一些经验，很有借鉴意义～AbstractBackground: In the search for generic expression strategies for mammalian protein families several bacterial expression vectors were examined for their ability to promote high yields of soluble protein. Proteins ...

新的不能再新的菜鸟，没有师兄师姐带，也没有实验室老师带，完全自己摸索，到各个同学那里蹭经验。马上要做western，故将总结的western经验步骤po上来，一为求各位坛子里的大神垂怜，可以给予指导解惑，二来，也可与各位即将做western的新人一起交流心得，分享失败教训经验。若有不当之处，还请各位前辈、同仁给予指出，叩谢。明日开始从提蛋白开始，今先po一部分步骤，明天晚上来汇报结果。一、细胞总蛋白提取：1、PIPA（ ...

摘要：在细胞的发展过程及其各种重要功能中，可逆的蛋白质磷酸化扮演了重要的角色。我们在做实验的过程中证明蛋白质体外磷酸化的实验经常碰到。在此，我以一种蛋白质激酶为例介绍蛋白质体外磷酸化的方法；同时，谈谈我做这个实验的一点点心得。希望对大家有点帮助。主要试剂：10x磷酸化buffer(200mM tris-HCl PH7.5 ,500mMKCl,100mM MgCl )PBS, 1xSDS电泳缓冲液 6xSDS加样缓冲液（参考精编分子实验指南第 ...

Western Blot详解－主要试剂主要试剂1、 丙烯酰胺和N，N’-亚甲双丙烯酰胺，应以温热(以利于溶解双丙稀酰胺)的去离子水配制含有29%(w/v)丙稀酰胺和1%(w/v)N，N’-亚甲双丙烯酰胺储存液丙稀酰胺29g，N，N-亚甲叉双丙稀酰胺1g，加H2O至100ml。)储于棕色瓶，4℃避光保存。严格核实PH不得超过7.0，因可以发生脱氨基反应是光催化或碱催化的。使用期不得超过两个月，隔几个月须重新配制。如有沉淀，可以过滤。2、 十二烷基 ...

On-Line Biology Book: Table of ContentsINTRODUCTION: THE NATURE OF SCIENCE AND BIOLOGY (REVISED 3/12/07)CHEMISTRY I: ATOMS AND MOLECULES (REVISED 3/12/07 )CHEMISTRY II: WATER AND ORGANIC MOLECULES (REVISED 3/12/07)CELLS I: ORIGINS (REVISED 3/12/07)CELLS II: CELLULAR ORGANIZATI ...

觉得蛋白组学是未来科研的重要领域，所以关注了一下，请各位战友补充啊！！:I:I:I:I:P:P:P:P蛋白组学概述http://www.dxy.cn/bbs/thread/840484http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=65&id=2168890&sty=3&keywords=%B5%B0%B0%D7%D6%CA%D7%E9http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=65&id=20517 ...